边缘无浆体MSP5基因片段的克隆与原核表达

目的克隆边缘无浆体MSP5基因,构建重组质粒,并进行表达与鉴定。方法根据GenBank公布的边缘无浆体MSP 5基因序列(AY714547)设计一对引物,无菌颈静脉采集边缘无浆体阳性的牛血,用PCR方法从4血的DNA模板中扩增MSP 5基因582bp的片断。将该片段克隆到原核表达载体pGEX-KG中,构建原核表达载体KG-MSP5,转化BL21,经IPTG的诱导表达蛋白。利用BugBuster GST Bind Purification Kit将其纯化,经Western blotting进行分析。结果重组质粒KG-MSP5,转化BL21,在IPTG的诱导下表达大小约46 kPa蛋白。western blotting分析表明其具有很好的免疫原性。结论本研究为边缘无浆体的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

苏云金芽胞杆菌晶体蛋白对羊捻转血矛线虫成虫的作用

将羊经丙硫咪唑驱虫后隔离饲养,人工感染捻转血矛线虫第３期幼虫,当第２６天从粪便中查出捻转血矛线虫虫卵后,由颈静脉、肌肉注射及经口灌服苏云金芽胞杆菌（Ｂ.t）伴胞晶体蛋白,每日１次,连续３次。以后隔日从羊直肠内采粪,用饱和盐水漂浮法查虫卵,并计算ＥＰＧ（每克粪便中虫卵数）。静注和肌注晶体蛋白后的羊,分别于注射后１周、２周、４周扑杀,口服和对照组羊４周后扑杀,从皱胃和小肠内查虫。结果表明,经静注（晶体蛋     

询检法确定耕牛血吸虫病化疗对象的研究

在7个血吸虫病流行区选择与血吸虫感染有关的7个因素进行调查,对调查结果进行相关分析后根据相关程度选择4个指标建立了耕牛,血吸虫病的询检方法。利用此方法对312头牛进行询检的结果与粪检法相比其阳性检出率达88.24%。该方法的建立对耕牛血吸虫病的防治具有重要的意义。     

日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白基因的克隆及原核表达

为了得到重组的日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白,研究设计了1对引物,以日本血吸虫mRNA为模板,用RT-PCR方法克隆了576 bp的22.6 ku膜相关蛋白基因片段,测序结果表明,该片段与已公布的Sj22.6基因序列(U75510)同源性达到99%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX-KG构建了原核表达质粒pGEX-Sj22.6,在大肠杆菌BL21 codn plus中表达获得了约48 ku的融合蛋白,经Western-blot检测,该重组蛋白具有良好的免疫原性。     

猪细小病毒和猪伪狂犬病毒复合PCR检测方法的建立

在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上。通过对扩增条件的筛选，成功地建立了PPV和PRV诊断方法，并应用于临床，利用一次PCR反应，即可同时扩增PPV的445bp和PRV217bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。     

温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。     

再谈如皋市鲜食玉米生产的发展思路

如皋市地处长江下游北翼，与沪、苏、锡、常等大中城市隔（长）江相望，具有良好的区位优势。随着2008年苏通大桥的通车，如皋市已进入上海1h都市圈，交通优势进一步凸现。近几年，如皋市认真贯彻“中央一号”文件精神，坚持以市场为导向，以农产品质量安全标准建设为抓手，以建设现代农业园区为突破口，加快城郊型和都市型农业建设步伐，取得良好成效，各类农业园区星罗棋布，     

检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法的建立及初步应用

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原,SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法.确定了抗原最适包被质量浓度为2.6 mg/L;血清最适稀释度为1:160,作用时间为45 min;优化了酶标SPA工作浓度,作用时间及底物显色时间.对已知阳性血清的检测下限可达1:6 400,其敏感性是IHAT方法的50～100倍.对临床4种动物共332份血清进行检测,阳性率由高到低依次为:SPA-ELISA(39.4%)>MAT(39.1%)>IHAT(13.1%).以上结果表明,SPA-ELISA不失为一种适用于多种动物弓形虫抗体检测的理想方法.     

检测牛血吸虫病的重组LHD-Sj23蛋白乳胶凝集试验的建立

利用原核表达的日本血吸虫重组LHD-Sj23蛋白作为抗原致敏乳胶,建立诊断牛血吸虫病的乳胶凝集试验(LAT).用制备的乳胶抗原分别检测牛结核杆菌、牛泰勒虫、牛巴贝斯虫、牛口蹄疫、牛边虫、牛传染性支气管炎阳性血清,结果均为阴性,说明建立的乳胶凝集方法具有良好的特异性.用所建立的LAT方法与ELISA方法同时检测169份牛血清,结果表明,建立的LAT方法的特异性为94.29%.敏感性为93.10%,两种方法的符合率为94.08%(P>0.05),差异不显著.用同一批乳胶抗原检测7份牛血清,5次检测结果一致,说明致敏的乳胶抗原是稳定的.保存期试验结果表明,致敏乳胶在25℃可保存1个月,在4℃可保存3个月.这表明建立的LAT方法稳定、特异性强、灵敏度高、操作简便快速,无需昂贵仪器,适宜在临床上推广应用.     

重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究

［目的］探讨检测猪弓形虫病的新方法。［方法］应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3（rMIC3）作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于猪弓形虫抗体的检测。［结果］该法所用最佳抗原浓度为3.40μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。［结论］该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。