鱼腥草对金黄色葡萄球菌生物被膜干预作用研究

研究鱼腥草水提物对金黄色葡萄球菌生物被膜的干预作用。采用微量肉汤稀释法测定鱼腥草水提物对金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003的最低抑菌浓度;采用结晶紫染色法、扫描电镜及激光共聚焦显微镜评估鱼腥草水提物对CMCC(B)26003生物被膜形成的影响;最后采用实时荧光定量PCR方法测定鱼腥草水提物对O-乙酰丝氨酸硫化氢裂解酶B(O-acetylserine sulfhydrylase-B)cysM基因转录的影响。结果显示,鱼腥草水提物在12.500 mg/mL、6.250 mg/mL、3.125 mg/mL质量浓度下均可以有效抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成,在12.500 mg/mL质量浓度下可下调cysM基因的表达。鱼腥草可能通过下调cysM基因的表达而抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。     

贵州山豆根根腐病病原菌鉴定

【目的】明确贵州山豆根根腐病的病原菌种类,为山豆根根腐病的防治及抗病育种提供理论基础。【方法】采用保湿培养法和组织分离法对感染根腐病的山豆根植株组织进行病原菌分离和纯化,根据柯赫氏法则对代表性菌株进行致病力测定;结合形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。【结果】从收集的病株组织样本中共分离获得200株真菌菌株,选取在PDA培养基上菌落形态差异明显的67株菌株进行ITS测序并在NCBI数据库进行BLASTn比对分析,结果显示,67株菌株中包含尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）35株、茄腐镰刀菌（F.solani）7株、粉红粘帚霉（Clonostachys rosea）23株和帚状弯孢聚壳（Eutypella scoparia）2株。致病性测定结果表明,尖孢镰刀菌代表性菌株和茄腐镰刀菌代表性菌株均可侵染山豆根引起典型的根腐病症状,且茄腐镰刀菌致病性明显强于尖孢镰刀菌。结合形态学特征和分子生物学鉴定结果,确认分离得到的病原菌分别为尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌。【结论】贵州山豆根根腐病主要由尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌复合侵染引起。     

红花龙胆愈伤组织诱导及其生理生化特性分析

为更好保存红花龙胆种质资源及研究其次生代谢产物,需建立高效的红花龙胆愈伤组织诱导体系,并对愈伤组织的生理生化特性展开研究。本研究利用植物组培技术,筛选红花龙胆愈伤的最佳外植体,运用响应面优化法对红花龙胆愈伤组织诱导体系进行优化,对愈伤组织继代培养过程中的生理生化指标(细胞活力,生长周期,可溶性蛋白含量和苯丙氨酸解氨酶活性)进行检测。结果显示,适合红花龙胆愈伤组织诱导的最佳外植体是根;愈伤组织诱导最佳培养基:MS+NAA 0.87 mg/L+6-BA 0.43 mg/L+KT 0.71 mg/L,诱导率97.62%;不同激素对愈伤组织诱导率大小的影响顺序:NAA6-BAKT,6-BA和KT两种植物激素的交互作用对红花龙胆愈伤组织诱导的影响极显著;愈伤组织的细胞活力、净增长量、可溶性蛋白含量和苯丙氨酸解氨酶活性在前42 d总体呈上升趋势,愈伤继代培养的最佳时间为42 d。本研究可为今后建立红花龙胆再生体系及利用愈伤组织研究其次生代谢产物提供基础资料。     

缬草挥发油的微波辅助提取工艺及其抗氧化活性

以缬草根茎为原料,以缬草挥发油得率为指标,采用微波辅助水蒸气蒸馏法对缬草挥发油提取工艺进行单因素分析,并通过Box-Behnken响应曲面试验进行优化,分别用还原力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(简称DPPH)自由基清除力和羟自由基清除力对其抗氧化能力进行研究。结果表明,缬草挥发油微波提取的最佳工艺条件为微波功率330 W、提取时间25 min、液料比8.6 m L∶g,在此条件下提取的缬草挥发油得率为(5.92±0.07)%。微波提取的缬草挥发油对DPPH自由基、羟自由基均有较强的清除能力及较高的还原力,与水蒸气蒸馏法相比具有明显差异,可为缬草油抗氧化产品的开发提供参考。     

ppgA基因在冠突曲霉有性产孢中的功能分析

为研究信息素前体基因ppgA在冠突曲霉(Aspergillus cristatus)有性产孢中的功能,本研究利用同源重组原理对冠突曲霉高效基因敲除菌株AKu70中ppgA基因进行敲除.形态学观察发现,在MYA培养基中,ppgA基因敲除株前期生长较△Ku70菌株快.培养6d后,敲除株形成较厚的菌落,浅黄色.此外,敲除株菌落中产生褐色色素的时间较晚,且明显减少.在1 mol/L NaCl条件下,敲除株仅菌落中央形成稀疏成熟闭囊壳,闭囊壳数量减少约15倍,子囊孢子成熟期延长;敲除株菌落边缘闭囊壳不成熟,无子囊孢子产生.在3 mol/L NaC1条件下,敲除株菌落白色,生长缓慢.这些结果表明,ppgA基因在冠突曲霉的有性产孢过程中发挥重要作用,该研究为进一步探讨冠突曲霉有性产孢机制的研究提供了理论参考和数据支持.     

苗药小花清风藤叶绿体基因psbA-trnH序列特征及遗传多样性分析

基于psbA-trnH序列分析,探讨黔产小花清风藤种质资源遗传多样性、系统进化与分子鉴定方法,对贵州苗药小花清风藤4个县区产地13个居群样品进行psbA-trnH序列PCR扩增。应用Codon Code Aligner 8.0.2软件进行校对拼接,分析居群遗传距离、单倍型数量与多样性,构建系统进化树。结果表明:13条小花清风藤叶绿体基因psbA-trnH 序列长度为469~488 bp,多态性位点数共37个,简约信息位点14个,自裔位点23个,插入/缺失片段3个;居群间的遗传距离变化范围为0~0.085 9,平均遗传距离为0.025 3,具有4个单倍型,单倍型(基因)多样性(Hd)为0.679;Fu and Li's D^*检验、Fu and Li's F^*检验、Tajima's D检验中P值均大于0.10,无统计学意义,说明黔产小花清风藤进化速率不一致,遗传多样性分化较丰富。本研究丰富了小花清风藤及其同属植物的研究数据,为小花清风藤的分类鉴定、系统演化和分子标记开发等研究提供了一定参考。     

绿豆药材质量控制方法研究

为了建立绿豆药材的地方标准,采用经验、显微鉴别法对该药材性状、显微特征进行描述;按照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则相关方法,对绿豆中水分、灰分和酸不溶性灰分进行了测定;采用薄层色谱法,以牡荆苷为对照,对药材进行定性鉴别;采用HPLC法,以牡荆苷为对照,采用Agilent ZOR-BAX SB-C18(5μm,4.6 mm×250.0 mm)色谱柱,甲醇-水(40∶60)为流动相,检测波长340 nm下进行定量分析,建立绿豆中牡荆苷的含量测定方法。结果表明,该药材性状、显微鉴别、薄层鉴别方法具有较强的专属性,水分为9.91%～12.57%,总灰分为2.51%～3.22%,酸不溶性灰分为0.03%～0.11%,牡荆苷含量为0.127%～0.248%。上述结果表明,建立的标准具有很好的专属性和准确性,可以作为绿豆药材的地方质量标准。     

黄连解毒汤对小鼠血清中Trp、Kyn、5-HT及粪便中短链脂肪酸代谢的影响

为了探讨黄连解毒汤对KM小鼠血清中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、5-羟色胺(5-HT)和粪便中短链脂肪酸代谢的影响,将KM小鼠随机分为空白对照组(16只)和黄连解毒汤组(16只),通过对小鼠灌胃黄连解毒汤,分别在干预7,14 d后,每组随机处死8只并分别采集粪便和血清样本,运用高效液相色谱法(HPLC)测定血清中Trp、Kyn和5-HT浓度,采用气相色谱法(GC)测定粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量。结果表明:与空白对照组相比,黄连解毒汤组小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸以及血清中Kyn、5-HT浓度均极显著升高(P0.01),而血清中Trp浓度无显著变化(P0.05)。说明黄连解毒汤对KM小鼠血清和粪便代谢有一定的影响。     

适宜甘蔗渣栽培的杏鲍菇菌株筛选

以引进7个杏鲍菇菌株为供试菌株,进行甘蔗渣为主原料的栽培试验,结果 A2菌株(杏鲍菇5号)具有产量高、商品性好等特点,适宜用甘蔗渣料栽培。     

感染白粉病烟株叶片真菌的群落结构与多样性

为烟草白粉病的科学防治提供理论依据,采用Illumina MiSeq高通量测序技术对采自同一烟株上发病烟叶和健康烟叶DNA的ITS区进行测序,分析各样品的真菌群落结构与多样性。结果表明:白粉病烟株健康烟叶真菌群落丰富度及多样性均高于发病烟叶;2种样本的优势菌门均为子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota);发病烟叶优势菌属及其相对丰富度为高氏白粉菌属(Golovinomyces)99.22%,曲霉属(Aspergillus)0.33%和链格孢属(Alternaria)0.33%;健康烟叶的优势菌属及其相对丰富度为高氏白粉菌属(Golovinomyces)91.86%、曲霉属(Aspergillus)0.34%和链格孢属(Alternaria)0.31%。在白粉病烟株上发病烟叶和健康烟叶均存在大量的高氏白粉菌属。