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【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。 相似文献
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本文介绍了油体脂解途径中相关信号分子的研究进展。通过对信号分子进行荧光探针标记,利用荧光显微镜技术和共聚焦显微镜成像分析可以准确、迅速地对相关信号分子的定位和表达进行跟踪研究,从而揭示油体的生物学发生和分解机制。 相似文献
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高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]建立HPLC法快速测定茶叶中的咖啡因。[方法]色谱柱Zorbax-C8(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm);流动相为0.04 mol/L柠檬酸水溶液∶N,N-二甲基甲酰胺(DMF)∶四氢呋喃(THF)=90∶16∶4;流速为1.00 ml/min;柱温60℃;检测波长280 nm;进样量为10μl。[结果]咖啡因在20~100μg/ml时,浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),加标回收率为98.9%~102.3%,相对标准偏差RSD为0.23%。[结论]该方法简单、快速、准确,适用于茶叶和茶饮料中咖啡因含量的测定。 相似文献
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目的筛选红花不定芽高效诱导条件,结合红花茎尖微嫁接技术,解决转基因红花再生效率低的问题。方法以新疆塔城裕民无刺红花的子叶作为外植体,子叶--愈伤组织--不定芽分化--伸长--生根/嫁接,分别对红花不定芽高效诱导培养基、伸长培养基和生根培养基进行筛选。结果确定了不定芽分化培养基:MS+1.0mg/L TDZ+0.5mg/L NAA,不定芽伸长培养基:MS+1%蔗糖,生根培养基:White+3mg/L IBA+Ag NO3 10mg/L+2%蔗糖+0.2g/L活性炭,生根率为12.5%;以14d红花实生苗做砧木,劈接法嫁接再生植株的成活率为53.3%。结论本研究采用不定芽高效诱导与茎尖微嫁接技术相结合的方法,成功的获得了再生植株。 相似文献
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日本甜柿以色艳味美、营养丰富、硬度大、自然脱涩为特点 ,深受果品商和消费者的青睐 ,国内外需求量较大 ,发展前景十分广阔。为此 ,我区化马湾乡西庄村与台湾果品商于 2 0 0 1年 10月签署了建立6 6 6hm2 日本甜柿出口基地的协议。由于当时日本甜柿苗源短缺 ,便采取了晚秋栽砧木 (君迁子 ) ,晚春嵌芽接的建园方法 ,嫁接成活率达到 96 3% ,年底保存率达到 90 8% ,苗木平均高 1.3m ,地径 1.5cm ,侧枝数 1.8个。现将技术要点总结如下。1 园地选择选择地势较高 ,土层深厚而肥沃 ,保水透气性好 ,土壤 pH 7左右 ,土壤质地为砂壤土 ,有水浇条… 相似文献