猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)江苏分离株NJGC ORF5基因的克隆及遗传变异分析

为了分析江苏省流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对江苏地区分离的PRRSV NJGC株的ORF5基因进行了克隆和测序,利用DNAstar软件与国内外代表性毒株进行了同源性分析与序列对比,并绘制了系统进化树.结果表明:NJGC株属于美洲型PRRSV,其ORF5基因与美洲型代表毒...     

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析(英文)

[目的]对来自2008～2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。[方法]利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。[结果]260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%～100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primaryn eutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008～2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。[结论]2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。     

河北省不同蔬菜种类废弃物资源量、分布特征及肥料化利用潜力分析

以河北省11 个地级市8 大类主要蔬菜废弃物为研究对象，利用草谷比估算了河北省不同蔬菜废弃物资源量。结 果表明：2011～2016 年期间河北省蔬菜废弃物资源量平均以每年4.26 万t 的速度增加，2016 年达到了230.37 万t。其中， 甘蓝类（57.87 万t）、白菜类（43.42 万t）和茄果类（29.98 万t）蔬菜废弃物资源量最高，比平均值分别增加了100.98%、 50.80%、4.12%，其次为根茎类、豆类和瓜菜类，叶菜类和葱蒜类最低。废弃物资源量在各地级市间分布不均衡，变异系数 为50.57%～82.52%。以唐山市（40.81 万t）、石家庄市（35.17 万t）、保定市（29.78 万t）和张家口市（27.96 万t）蔬菜废 弃物资源量最多，总量占全省的58.04%。将全省蔬菜废弃物全部进行肥料化，相当于每667 m² 农田间接施加纯氮3.01 kg、 纯磷1.85 kg、纯钾2.99 kg 和有机质72.61 kg，相当于全年化肥用量的6.68% 和有机肥299.20 万t，其中，甘蓝类、白菜类和 茄果类蔬菜氮磷钾养分量最高，总量占8 类蔬菜的57.73%，有机质含量根茎类最高。全省蔬菜废弃物资源量在2011～2016 年期间呈稳定上升趋势，且不同地区各类蔬菜废弃物资源量和养分量差异突出，其中，蔬菜产量和产废系数成为了影响蔬菜 废弃物资源量差异高低的重要因素。     

大棚设施栽培对黑莓主要经济性状的影响

为给大面积推广大棚栽培黑莓提供理论依据,就黑莓的大棚设施栽培进行了试验研究。结果显示:果实成熟期提前,延长了采收时间;生长期叶片叶绿素含量与露地栽培的基本一致;浆果中可溶性固形物和色素的含量略低于露地栽培,而总酸含量却高于露地栽培;果穗和穗柄明显长于露地栽培,果实大小的变化较小;株产量低于露地栽培,单位面积产量明显高于露地栽培,并且果实损耗小,收获率高。     

玉米大斑病菌StCHS6的基因结构及表达规律分析

为了阐明玉米大斑病菌几丁质合成酶基因StCHS6在病菌生长发育及致病过程中的作用,克隆并解析了该基因及其编码蛋白的结构特征,明确了该基因在病菌生长发育过程中的表达模式。在玉米大斑病菌1号小种菌株01-23中克隆StCHS6,利用生物信息学手段分析该基因的结构特征,并利用已有的病菌重要发育阶段的RNA-Seq数据库信息,明确该基因的表达模式。结果发现,StCHS6位于病菌基因组scaffold_1:2066293-2069876(-)的位置,基因全长为3 584 bp,含有4个内含子和5个外显子;CDS序列大小为2 703 bp,编码900个氨基酸,脂肪指数为81.86,亲水性平均值为-0.178,等电点(PI)为8.36,不稳定指数为36.94,属于碱性稳定型蛋白;保守结构域分析表明,StCHS6蛋白含有几丁质合成酶催化结构域Chitin_synth_1和多个跨膜结构域;亚细胞定位分析推测该蛋白定位于细胞膜上;RNA-Seq数据分析表明,StCHS6在菌丝、分生孢子、芽管、附着胞和侵入钉5个发育时期均有表达,但其表达量有所差异。以芽管时期的表达量为1,菌丝、分生孢子、附着胞和侵入钉时期的表达量分别为芽管时期的3.80,4.97,3.40,2.60倍。为阐明玉米大斑病菌StCHS6的基因结构特征、表达模式及功能奠定了基础。     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。     

cDNA-AFLP技术在果树生物技术育种上的应用

cDNA-AFLP技术是近年来广泛应用于植物基因分离与表达研究的mRNA指纹图谱技术,具有可靠、高效的优点.在果树生物技术应用方面,目前该技术在第一代果树中应用居多且已取得大量成果,在第二代果树上仅有少量报道,在第三代果树上的应用处于起步阶段.在简单叙述其基本原理和特点的基础上,重点阐述英在果树基因分析研究中的应用,包括芽变突变体鉴定、基因分离、基因表达特性分析以及指纹图谱构建,并对其在果树生物技术育种研究上的应用前景进行了展望.     

沼液配方肥对油菜生长、品质及氮素利用的影响

采用等氮量原则和土壤盆栽试验方法,对比研究了追施沼液配方肥和无机复混肥对油菜生长、品质及氮素利用的影响。结果表明:沼液配方肥的肥效明显优于无机复混肥。在等施氮量条件下,与无机复混肥各处理相比,施用沼液配方肥的处理A3油菜干物重达最高值,为17.10g/pot。在品质方面,等施氮量条件下,施用沼液配方肥的处理A1、A2、A3和A4与无机复混肥的处理B1、B2、B3和B4相比,硝酸盐含量分别降低了38.85%、44.83%、52.97%、49.08%;Vc含量分别增加24.31%、35.80%、39.08%、33.77%;还原糖含量分别增加6.81%、15.67%、21.32%、7.73%;同时氮肥利用率分别增加47.29%、49.82%、59.90%、34.39%。     

基于MODIS的民勤绿洲植被覆盖变化定量分析

以典型沙漠绿洲-民勤绿洲为研究区,利用MODIS陆地3级标准数据产品MOD13,通过改进的植被覆盖度估算模型对2000～2010年7月的植被覆盖度进行了估算,并对其进行分级,通过空间叠置定量分析了不同级别植被覆盖度的分布特征及动态变化。研究发现,从2000～2010年11年间,民勤绿洲轮廓变化明显,绿洲面积明显缩小,荒漠进一步扩张,极低覆盖度植被面积增加1106.01km2,相当于研究区总面积26.95%,中高覆盖度和高覆盖度植被面积分别减少133.63km2和54.75km2,各占研究区总面积的3.26%和1.33%;研究表明,11年来民勤绿洲面积萎缩明显,岛状绿洲大量消失,其中以西北部最为严重。     

猪源马链球菌兽疫亚种类M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。