玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63原生质体形成 和再生条件的初探

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63在温室及大田试验中都对棉花黄萎病菌表现出很强的拮抗作用，是一株很有应用潜力的生防菌株。不论是菌丝体本身还是其代谢产物都对多种植物病原菌有很强的抑制作用。对该生防菌株进行深入研究，尤其是分子水平的研究尤为重要。笔者通过研究影响链霉菌原生质体形成的多种条件和因素，包括培养基的选择、培养时间、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解时间等，最终成功的制备出了生防菌Men-myco-93-63的原生质体，初步确定了其形成条件：TSB培养基一级培养24h，用SGGP作为二级培养基培养菌丝体40h（补加甘氨酸2%），将菌丝体加入2mg/ml溶菌酶37℃水浴60min后即可得到原生质体，涂在再生培养基R5上再生培养，再生数可达4.8×106个/ml。为该生防菌原生质体的转化、基因表达等研究奠定了重要的基础。     

我国棉花大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)电泳图谱分析

对24株来自不同地区、作物的不同致病类型的大丽轮枝菌,进行了同工酶和可溶性蛋白电泳图谱分析。结果表明,24株大丽轮枝菌苹果酸脱氢酶酶谱具有种的特异性,酯酶酶谱具有属的特异性。谷氨酸脱氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶和可溶性蛋白电泳图谱与病菌的致病类型有关,可将24株大丽轮枝菌分为2群,群Ⅰ包括20个菌株,均属于中等致病力或弱致病力的非落叶型菌系;群Ⅱ包括4株菌,均属于强致病力的落叶型菌系。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdA_(mgh)基因的验证

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)等多种重要的植物病原真菌都具有较强的抑制作用。nsdA(negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是从天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因。根据天蓝色链霉菌A3(2)的序列设计引物,PCR扩增出Men-myco-93-63nsdAmgh基因,经斑点杂交法验证,nsdAmgh确实在该生防菌中存在。该基因的发现有助于进一步了解该生防菌产生抗生素调节的分子机制,也为抗生素高产菌株的获得提供了新的靶标。     

小麦品系西农1163-4抗叶锈病基因的遗传分析和分子作图#br#

【目的】小麦品系西农1163-4高抗小麦叶锈、条锈和白粉病,综合农艺性状良好。明确该小麦品系中所含的抗叶锈病基因及遗传特点,找到与其紧密连锁的分子标记,有利于抗病基因利用和培育抗病新品种。【方法】将西农1163-4与感病品种Thatcher杂交,获得F1、F2代群体,利用中国叶锈菌优势小种THTT进行苗期抗性鉴定和抗性遗传分析;采用SSR技术对西农1163-4所携带的抗叶锈基因进行分子标记研究,共筛选了1 273对SSR引物。【结果】小麦品系西农1163-4对多个叶锈菌小种具有良好的抗病性,对THTT的抗性是由1个显性基因控制,该基因暂命名为LrXi。获得了与LrXi紧密连锁的3个微卫星分子标记Xbarc8、Xgwm582、Xwmc269和1个STS标记(ω-secali/Glu-B3),将LrXi定位于小麦1BL染色体上。距离最近的2个微卫星位点是Xgwm582、Xbarc8,与抗叶锈基因间的遗传距离分别为2.3 cM和3.2 cM。【结论】LrXi位于1BL染色体,抗叶锈表现不同于所有已知抗叶锈病基因,该基因的发现将有利于丰富中国抗叶锈病基因资源,为培育持久抗病品种奠定基础。     

小麦品系西农1163-4抗叶锈病基因的遗传分析和分子作图

【目的】小麦品系西农1163-4高抗小麦叶锈、条锈和白粉病,综合农艺性状良好。明确该小麦品系中所含的抗叶锈病基因及遗传特点,找到与其紧密连锁的分子标记,有利于抗病基因利用和培育抗病新品种。【方法】将西农1163-4与感病品种Thatcher杂交,获得F1、F2代群体,利用中国叶锈菌优势小种THTT进行苗期抗性鉴定和抗性遗传分析;采用SSR技术对西农1163-4所携带的抗叶锈基因进行分子标记研究,共筛选了1 273对SSR引物。【结果】小麦品系西农1163-4对多个叶锈菌小种具有良好的抗病性,对THTT的抗性是由1个显性基因控制,该基因暂命名为LrXi。获得了与LrXi紧密连锁的3个微卫星分子标记Xbarc8、Xgwm582、Xwmc269和1个STS标记(ω-secali/Glu-B3),将LrXi定位于小麦1BL染色体上。距离最近的2个微卫星位点是Xgwm582、Xbarc8,与抗叶锈基因间的遗传距离分别为2.3 cM和3.2 cM。【结论】LrXi位于1BL染色体,抗叶锈表现不同于所有已知抗叶锈病基因,该基因的发现将有利于丰富中国抗叶锈病基因资源,为培育持久抗病品种奠定基础。     

生防菌株Men-myco-93-63液体培养代谢特性初探

1 材料和方法 1．1 供试菌株链霉菌Men-myco-93-63,由河北农业大学植物病害生物防治研究室提供。 1．2 培养基和培养方法 1．2．1 培养基发酵培养基:3％淀粉,1％葡萄糖,2％蔗糖,0．02％果糖,2．0％花生饼粉,0．5％ NaCl,0．2％酵母膏,0．6％(NH4)2SO4,0．02％ KH2P04,0．25％CaCO3,0．07％FeSO4,0．07％ ZnSO4pH自然。 1．2．2 培养方法每100 mL培养基接种1 mL 孢子悬液(浓度107数量级),装入500 mL三角瓶, 30℃,200 r/min振荡培养,每12 h取样检测代谢情况。     

几种农用抗生素诱导植物对灰霉病的抗性及其 信号转导途径研究

为探索申嗪霉素、多抗霉素、春雷霉素等3种农用抗生素在诱导植物灰霉病抗性中的作用，本试验通过温室条件下对烟草等植物叶片喷雾后，再用离体叶片接种灰霉病菌的方法检测了这3种抗生素在不同植物上对灰霉病的诱抗效果。另外，采用荧光定量PCR技术检测了3种抗生素诱抗处理后，烟草植株抗病信号转导途径中相关基因NPR1、CTR1、ETR1表达量的变化。结果表明：分别使用申嗪霉素40 mg/L 4 d、多抗霉素5 mg/L 4 d、春雷霉素80 mg/L 3 d诱导处理本氏烟、茄子、番茄、辣椒、黄瓜、草莓等不同植物后，再离体叶片接种灰霉病菌的病斑直径减小了25.86%～55.56%、25.17%～45.41%、20.17%～51.26%。同时，喷施3种抗生素均可激发烟草系统抗病标志基因NPR1的表达，激活SA和JA/ET信号转导途径，并抑制乙烯（ET）信号转导通路中负调控基因CTR1和ETR1的表达，从而诱导烟草植株产生系统抗病性。     

玫瑰黄链霉菌防治番茄连作障碍及对土壤微生物区系的影响

利用对多种植物病原菌具有强烈抑制作用的生防微生物玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63的固、液发酵物,对设施番茄连作土壤进行修复,研究生防菌对土壤营养和土壤微生物的影响,及其对植株生长势的影响和对连作障碍的防效等。结果表明:生防菌固、液发酵物均能提高土壤肥力,其中玉米芯固体发酵物能够明显提高氮磷钾及有机质质量分数;施用生防菌剂后,土壤微生物总量由1.36×106cfu/g增加到3.748×106cfu/g,其中增加最明显的是细菌和放线菌;生防菌能够在连作土壤中定殖,能促进植株生长和番茄产量的提高,在温室和田间药效试验中对番茄连作障碍的防效分别为47.37%和46.75%。