基于Cytb基因的穿山甲科物种鉴定研究

为鉴别混有非穿山甲物种疑似检材的来源物种，基于细胞色素b基因设计了穿山甲科特异的新引物DCW-F1/DCW-R1。试验表明：其特异性良好、灵敏度较高、适用检材类型较广。采用BLAST比对法、遗传距离法和系统发育法分析了4组不同长度Cytb序列，研究序列长度对穿山甲物种鉴定的影响。结果表明，多数样本与相应穿山甲物种同源序列相似度均高于98%,建议将该值作为BLAST比对法的判别标准；除马来穿山甲(211 bp)和树穿山甲(421和211 bp)外，剩余5个穿山甲物种种间最小遗传距离均大于种内最大遗传距离，序列长度的变化和样本量的不平衡会导致该比值不稳定；除马来穿山甲和菲律宾穿山甲，其余物种均为单系，序列长度变短使得系统发育树拓扑结构和分支置信度发生相应变化。     

‘绿岭’核桃带芽茎段的组织培养和快速繁殖

以‘绿岭’核桃带芽茎段为试材，采用组织培养方法，研究了植物生长调节剂、珍珠岩对其快速繁殖、瓶内生根及移栽成活的影响，以期构建‘绿岭’核桃初代培养、继代增殖、瓶内生根和移栽驯化的完整体系，建立高效组培快繁体系。结果表明：茎段腋芽生长的最佳培养基为DKW+1.2 mg·L^-1 6-BA+0.012 mg·L^-1 K-IBA,培养30 d后初代苗高为31.48 mm;最佳继代增殖培养基为DKW+0.6 mg·L^-1 6-BA+0.010 mg·L^-1 K-IBA,增殖系数可达5.31;最佳瓶内生根培养基为1/2DKW+15 mg·L^-1 K-IBA,生根率51.85%;炼苗后移栽到培养土、珍珠岩(1∶1)+ABT 500 mg·L^-1混合基质中，成活率达33%以上。     

细胞传代对小型猪脂肪间充质干细胞及分泌因子的影响

为了探索细胞传代对小型猪脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADSCs)的影响，试验采用形态学观察法、CCK8法、Transwell迁移法、ELISA法对P3～P9代ADSCs的形态变化、增殖能力、迁移能力进行研究，并检测了传达次数对脂肪间充质干细胞的条件培养基(adipose-derived mesenchymal stem cells conditioned medium, ADSCs-CM)中血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(ANG-1)、血管生成素-2(ANG-2)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量的影响。结果表明：随着传代次数的增加，ADSCs形态发生变化，细胞折射率变低，边界逐渐不清晰；不同传代次数的ADSCs生长曲线相似，近似S型，但P3、P5代细胞增殖能力显著高于P9代(P<0.05);且P5代细胞迁移能力与P3、P9代细胞存在极显著差异(P<0.01);P5代细胞分泌VEGF、ANG-1、ANG-2、b-FGF、IL...     

绥芬河三块鱼属“银滩头”洄游群体的分子鉴定

绥芬河三块鱼属洄游群体中“银滩头”的分类地位一直存在争议。利用DNA条形码COⅠ和基因标记（fst和mitfa）分析相结合的方法，对采自我国绥芬河的珠星三块鱼（Tribolodon hakonensis，40尾）、三块鱼（T.brandtii，38尾）和“银滩头”（34尾）及采自日本宇曾利山湖的珠星三块鱼（3尾），共计115尾个体进行了种质鉴定。线粒体COⅠ基因扩增结果显示，共获得单倍型11种，其中，珠星三块鱼独享5种，三块鱼独享5种，珠星三块鱼日本群体独享1种（Hap6），“银滩头”群体与珠星三块鱼共享1种，与三块鱼共享3种，聚类分析不支持“银滩头”群体为一个独立种。基因标记扩增结果显示，“银滩头”群体中兼具珠星三块鱼和三块鱼两种基因型。结合以上两种分析结果发现“银滩头”中存在珠星三块鱼与三块鱼的杂交个体。明确了“银滩头”群体的分类地位，即“银滩头”是由珠星三块鱼、三块鱼及二者的杂交个体组成的一个混合群体。研究结果为三块鱼属鱼类的分类、种质资源保护和野外增殖放流提供了科学依据。     

梅花鹿茸不同生长阶段顶端茸皮组织MEF2C基因的表达分析

为探讨肌细胞增强因子2(MEF2C)基因在梅花鹿茸生长发育过程中的生物学作用，以梅花鹿茸为试验材料，对其进行T-A克隆，以获得MEF2C基因的cDNA序列，再结合实时荧光定量PCR技术，对梅花鹿茸不同生长阶段(前、中、后期)顶端茸皮组织层MEF2C基因的表达量差异进行分析，结果表明：成功克隆出的梅花鹿MEF2C基因的完整编码区，全长为1 302 bp,共编码433个氨基酸，其中丝氨酸含量最高，占氨基酸总量的13.4%;蛋白质相对分子质量为46 898.44,理论等电点pI值为8.69,脂肪系数为65.77;分子式为C_(2011)H_(3210)N_(600)O_(654)S_(20),总原子数为6 495,不稳定系数为51.83,亲水性平均值为-0.662,MEF2C基因为不稳定的亲水蛋白；二级结构以无规则卷曲为主；亚细胞定位预测为细胞核内；通过Blastp功能对比显示，梅花鹿MEF2C基因与马鹿的同源性最高，为99.54%,与牛、羊的同源性也都超过99%。实时荧光定量结果分析表明，MEF2C基因在鹿茸生长不同阶段的顶端茸皮组织中都有表达，但表达水平不同，中期表达量是前期表达量的3.210 6±0.183 5倍，后期表达量是前期表达量的3.620 1±0.195 1倍，且前期与中期的表达量、前期与后期的表达量存在显著差异(P<0.05),而中期与后期的表达量差异不显著(P>0.05)。     

梅花鹿CAV1基因cDNA克隆及序列分析

为了为深入研究梅花鹿窖蛋白-1(Caveolin-1, CAV1)基因的生物学功能提供数据支持，试验利用RT-PCR和分子克隆技术获得梅花鹿CAV1基因CDS序列并对其进行生物信息学分析。结果表明：梅花鹿CAV1基因序列与马鹿、山羊相似度较高，与加拿大猞猁、智人等相似度较低；CDS区长537 bp,编码178个氨基酸；CAV1蛋白是Caveolin家族的一员，在第97～119位存在1个跨膜螺旋区，为疏水性稳定酸性蛋白，无信号肽；该蛋白中α-螺旋和无规则卷曲占比较高，亚细胞定位主要在细胞膜；CAV1蛋白有13个磷酸化位点，1个乙酰化位点；CAV1蛋白参与细胞内吞作用、黏着斑、细菌侵袭上皮细胞等通路；该蛋白与CAV2、NOS3、EGFR、FYN等蛋白存在相互作用。