蓝藻水华暴发期间养殖池塘浮游藻类动态变化

2017年7～9月对河南师范大学养殖基地暴发蓝藻水华的养殖池塘进行监测。结果显示,共鉴定浮游藻类25种(属),隶属于5门。7月水华初期和8月水华中期,优势种均为微囊藻(Microcystis sp.),占总浮游藻类的99%以上。浮游藻类丰度和生物量波动范围分别为(0.883～12.666)×10~8 cells/L和9.740～70.020 mg/L,生物多样性为0.05～1.15。总磷(TP)和总氮(TN)含量分别为0.32～0.51和4.18～7.09 mg/L,水温为22.1～30.6℃。TP、TN、水温较高是造成蓝藻水华暴发的主要原因之一,蓝藻水华暴发造成生物多样性整体偏低。冗余分析(RDA)结果显示,浮游藻类密度和生物量与TP、TN含量呈正相关,蓝藻门(Cyanophyta)与水温、TP、TN呈正相关。同时,微囊藻暴发最大的威胁是微囊藻毒素(Microcystins, MCs)的释放,根据世界卫生组织规定的MCs含量不得超过1.0μg/L,否则就会对水生生物产生危害。实验结束时,对水样和胞内MCs的测定。研究表明,水样中MCs含量为0.040μg/L,胞内MCs含量为0.686μg/L,该养殖池塘微囊藻毒素含量在安全范围内。     

甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性

【目的】 研究甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性，为临床合理使用甘草查耳酮A抗感染治疗提供依据。【方法】 采用微量肉汤稀释法和平板计数法测定甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）和最小杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC）；平板计数法测定1MIC、2MIC、4MIC和8MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌的杀菌效果；吸光光度法测定1/16MIC、1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长的影响；结晶紫染色法测定1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC和1MIC的甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制效果以及1/4MIC、1/2MIC、1MIC和1MBC甘草查耳酮A对生物被膜的清除效果；建立小鼠皮肤刀伤模型和皮肤脓肿模型评价甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌感染小鼠的治疗效果。【结果】 甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌临床分离菌株具有良好的抗菌活性，MIC和MBC分别为3.125和12.5 μg/mL。时间-杀菌曲线结果显示，2MIC和1MIC组在6 h内铜绿假单胞菌数量逐渐减少，之后基本维持在1×10⁵ CFU/mL左右；8MIC和4MIC组铜绿假单胞菌的数量一直处于下降趋势，并且分别在14和16 h后均无菌落形成。1/16MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长影响不明显，而1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A可抑制细菌生长。1MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜形成的抑制率约为70%，1MBC甘草查耳酮A可清除约50%预形成的生物被膜。体内试验结果表明，甘草查耳酮A有助于铜绿假单胞菌感染小鼠刀伤的创口愈合，并减少皮肤脓肿。与对照组相比，甘草查耳酮A和氨苄西林组脓肿中的细菌数量均极显著减少（P<0.01）。【结论】 甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌具有良好的体外和体内抗菌活性，可进一步用于临床治疗铜绿假单胞菌感染制剂的研发。     

铜绿假单胞菌PA14 H3-T6SS的调控功能研究

【目的】研究模式病原细菌铜绿假单胞菌PA14（Pseudomonas aeruginosa PA14）第三套六型分泌系统（H3-T6SS）的调控机制和在环境适应等方面的功能，为该菌致病机制研究和治疗方案开发奠定基础。【方法】以铜绿假单胞菌PA14为研究对象，利用凝胶迁移阻滞试验（EMSA）验证σ^s因子（RpoS）与H3-T6SS启动子区的结合能力；构建rpoS敲除菌株（ΔrpoS）及回补菌株（rpoS），用启动子酶活试验研究RpoS对H3-T6SS表达的调控作用；构建H3-T6SS关键组分clpV3敲除菌株（ΔclpV3）及回补菌株（clpV3），测定其在酸、渗透压等不同胁迫下的细胞存活率；检测H3-T6SS对铜绿假单胞菌PA14生物膜形成和运动能力的影响。【结果】RpoS蛋白可以直接结合H3-T6SS启动子区；成功构建了铜绿假单胞菌PA14的rpoS和clpV3敲除菌株及回补菌株，RpoS正调控H3-T6SS的表达，H3-T6SS有助于细菌抵抗酸胁迫，但对渗透压胁迫响应不明显；H3-T6SS可显著增强细菌的生物膜形成和运动能力。【结论】铜绿假单胞菌PA14的H3-T6SS受调控因子RpoS的正调控，在增强细菌抗酸胁迫、生物膜形成和运动能力等方面有重要作用。     

铜绿假单胞菌flg E基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果评估

为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果，本研究经PCR扩增flgE基因，将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建flgE基因的重组质粒pflgE，进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE，通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗的包封率、加入DNA酶后经琼脂糖凝胶电泳检测其抗DNA酶降解的能力、37℃恒温静置1 d,3 d和5 d后经琼脂糖凝胶电泳检测稳定性。结果显示CpflgE的包封率为94.69%，可有效抵抗DNaseⅠ的降解，具有较强的稳定性。以pflgE和CpflgE免疫BALB/c小鼠，共免疫3次，同时设置灭活疫苗免疫组、铜绿假单胞菌鞭毛蛋白亚单位疫苗免疫组以及PBS对照组。免疫后不同时间经间接ELISA测定各组小鼠血清抗体水平，MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平，采用检测试剂盒测定各组小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。结果显示，Cpflg E诱导小鼠的血清抗体水平、脾淋巴细胞增殖水平及血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的浓度总体上虽均低于灭活疫苗，但与鞭毛蛋白亚单位疫苗相当，且显著高于pflgE (P<0....     

掺硼金刚石薄膜电极电化学氧化对铜绿微囊藻的生长抑制

阳极材料采用掺硼金刚石薄膜板状电极，研究了电化学氧化中电流密度、电解时间、pH、氯离子浓度、硫酸根离子浓度对铜绿微囊藻生长抑制的影响，以及电解前后藻细胞形态的变化。结果表明，4个影响因素对铜绿微囊藻生长抑制效果显著。抑藻效果随电流密度、电解时间的增加而增加，电流密度为17 mA/cm²时藻细胞出现破裂、细胞内物质流出的现象，抑藻效果较好；当电解时间为20 min时，可完全抑制藻细胞生长；再增大电解时间，对抑藻效果无明显促进作用，初始pH在中性及酸性条件下可完全抑制藻细胞生长。抑藻效果与溶液中氯离子、硫酸根离子浓度成正相关，当溶液中氯离子浓度为6 mg/L时，可完全抑制藻细胞生长；无氯离子时，藻细胞在4 d后出现继续增长现象。     

鸡场铜绿假单胞菌外毒素 A 基因遗传变异分析

为探究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)毒力因子变异情况，对鸡场分离、鉴定的7株PA分离菌外毒素A(Exotoxin A,ETA)基因进行了遗传变异分析。结果表明，鸡场分离鉴定的7株PA分离菌成熟的ETA结构蛋白基因长1 824和1 839 bp，编码608和613个氨基酸；7株分离菌ETA基因与27株PA参考菌株之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为98.9%～100.0%,98.5%～100.0%。7株分离菌成熟的ETA结构蛋白基因共有多处碱基位点发生了变异，其中包括PA-47株第106～110位15个碱基的连续缺失和10处错义突变。7株PA分离菌ETA蛋白共有6种不同的氨基酸变异位点模式；第426位(H)、第440位(H)、第470位(Y)、第481位(Y)、第553位(E)和第558位(W)氨基酸残基均未发生突变，均为有毒形式。本研究结果可为PA致病机理研究提供参考依据。     

浮床水芹不同器官酚酸类和脂肪酸类化感物质代谢组学分析

为明确浮床水芹不同器官化感物质特征与差异，揭示水芹化感抑藻机制，以浮床水芹为研究对象，基于液相色谱-电喷雾质谱(LC-ESI-MS)代谢组学技术对不同发育阶段水芹种植水和整株不同器官的化感物质种类和含量进行分析。结果显示：在繁殖期、幼苗期和成熟期水芹种植水中检出酚酸类化感物质36种、脂肪酸类化感物质24种，且两类化感物质在幼苗期种植水中的相对含量显著高于繁殖期和成熟期。对幼苗期水芹根、茎、叶中酚酸类和脂肪酸类化感物质进行靶向分析，发现在各器官中共存的酚酸类化感物质有18种，其中阿魏酸和咖啡酸在叶片中含量较高，分别为(15.20±1.98) ng·mg^-1和(37.26±2.21) ng·mg^-1;各器官中共存的脂肪酸类化感物质有33种，其中硬脂酸和肉豆蔻酸在根和叶中的含量较高，分别为(450.70±14.32) ng·mg^-1和(39.54±0.50)ng·mg^-1。研究表明，水芹种植水和其体内所含的酚酸类、脂肪酸类化感物质种类丰富，这些物质的释放是浮床水芹在富营养化水体中化感抑藻的主要原因。同时，...     

牛源铜绿假单胞菌的分离鉴定及中草药抑杀效果比较分析

为查明养殖场引起牛只呼吸道疾病的病原菌,采集患病牛鼻拭子,采用实验室方法进行细菌的分离鉴定;通过细菌毒力基因的检测、致病性试验、药敏试验分析分离菌生物学特性;并明确22种中草药对其抑杀效果。结果表明,分离菌为两端钝圆革兰氏阴性短杆菌,16SrRNA基因序列与GeneBank铜绿假单胞菌比对相似序列达到100%,表明分离菌株为铜绿假单胞菌;菌株携带Exo S、Exo Y毒力基因,8h内可致小鼠死亡。药敏试验结果显示,该菌对环丙沙星极为敏感,对阿米卡星、新霉素、复方新诺明等9种药物中度敏感;中草药药敏试验结果显示,乌梅、五倍子、五味子对分离菌具有较好的抑菌作用,其MIC分别为31.25mg/mL和62.50mg/mL,对病原菌的生长繁殖具有较好抑制作用。本研究为该病的防控提供参考。