猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征

[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。     

高温胁迫对野生湖北百合生理指标的影响

为了解贵州野生湖北百合的耐热性,对其设置不同高温(28℃、31℃、34℃、37℃、41℃、43℃)和不同时间(12、24、48、72h)处理,测定各处理对叶片的膜透性、抗氧化物系统保护酶、可溶性物质等生理指标。结果表明,随着温度升高和时间的延长,MDA含量上升、相对电导率增加,则膜透性增强;可溶性糖含量、Pro含量呈现升高趋势;CAT活性呈现先升高后下降趋势。同一温度下,随着时间的延长,各处理POD活性呈现先升高后下降趋势,但43℃处理呈持续升高;31℃、34℃和37℃处理不同时间SOD活性呈现下降-升高-下降趋势变化,28℃、40℃和43℃处理呈现先降低后升高趋势;可溶性蛋白质含量呈升高-降低-升高的变化趋势。通过主成分分析,MDA含量、POD活性、Pro含量和可溶性糖含量是野生湖北百合高温胁迫的主导指标;其次,SOD活性、可溶性蛋白含量也是次要的指标。     

苯酚降解菌的分离、驯化与固定化研究

对采自贵阳市乌当区某造纸厂的污泥进行富集、驯化、筛选,最终得到2株能以苯酚为惟一碳源生长的菌株(3#和5#),混合菌株可耐受1.3 g/L左右的苯酚,单一菌株可耐受1.0 g/L的苯酚。经生理生化及形态学鉴定,初步确定为醋杆菌属和假单胞菌属,通过不同pH值,苯酚浓度、温度以及外加碳源、氮源、盐度对菌株降酚能力的影响研究,确定了5#菌株的最佳生长和降酚条件。     

基于两种方法结果差异的市域土地整治功能分区研究

市域土地整治功能分区是市级土地整治规划的重要内容。目前,我国对此问题的研究还处于起步阶段,对市域土地整治功能分区的理论与方法还没有形成统一认识。以上饶市为研究对象,提出了分区指标体系和权重,采用了系统聚类和星座图两种数学方法进行初步分区,根据分区结果差异,进行逐步细化,结合专业知识,将上饶市土地整治功能分区最终分为信江河谷平原综合整治区,东南部山地城乡统筹主导区,中东部丘陵农用地整理主导区,东北部山区城乡统筹主导区,西南部滨湖土地生态保育主导区,西北部低山综合整治区等6个土地整治主导区,分析了功能区特点,确定了土地整治重点与方向。该分区结果符合上饶市自然与社会经济条件实际,为土地整治规划的顺利实施提供保障。同时提出的分区思路与方法可以有效的解决分区过程中的一些难点问题,对进一步完善土地整治功能分区的理论与方法具有借鉴意义。     

植物抗寒转录激活因子ICE1和ICE2基因的生物信息学分析

从美国在线数据库(NCBI)中获得不同植物ICE1和ICE2基因的完整序列并对其进行分析,以期对ICE基因的结构与生物学功能研究提供理论基础。利用Clustal W2和Mega 5.0软件对其基因的氨基酸序列进行多重比对和系统发育树构建,并采用不同的生物信息手段对其蛋白的一、二、三级结构进行分析。结果表明:ICE1和ICE2基因均含有4个不同的结构域,即富S区、核定位信号区(NLS)、bHLH结构域和转膜区,但其bHLH结构域和富S区(单子叶植物间)存在差异。ICE1和ICE2基因编码的氨基酸主要是脂肪族类氨基酸,以丝氨酸(Ser)和亮氨酸(Leu)为主,其等电点均呈酸性,等电点值均是单子叶双子叶,ICE1和ICE2均为亲水性不稳定蛋白。C和H为ICE1和ICE2蛋白二级结构的主要元件,E和T只是零星分布在整个蛋白中,且H、T、E、C的含量均存在差异,其含量及折叠方式的差异导致蛋白三级结构的不同。ICE1和ICE2基因在基因序列上有相似的结构域,但其蛋白结构存在差异。     

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)系统对鱼类的生长和繁殖有着重要的作用。利用PCR方法克隆获得了鲤胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)-2和-3基因的上游启动子部分序列,长度分别是1142bp和1067bp。Igfbp-2启动子区域没有TATA框和CAAT框。同时,Igfbp-3中只含有TATA框,但没有CAAT框。研究结果表明,二者启动子不具备典型的启动子特征,同时,在二者启动子上还发现了cAMP应答元件和肝细胞核因子结合位点,以及Pit-1、Oct-1、RXR和GR等结合位点。研究认为,鲤Igfbp-2和-3基因的表达受到潜在的多因子调控。