黑龙江省一株马流感病毒的全基因组测序及同源性分析

通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2002年美国肯塔基分离株A/equine/Kentucky/1/02（美洲谱系Florida亚型）、A/equine/Argentine/77（美洲谱系Argentine亚型）等有代表性毒株进行同源性分析,发现该毒株与Florida-2型马流感病毒基因片段的同源率最高。根据马流感病毒的命名规则,将这毒株命名为A/equine/Heilongjiang/1/2010。本次所分离到的黑龙江株马流感病毒,丰富了我国马流感病毒资源库,为我国马流感流行病学研究、诊断技术及疫苗研究提供了重要基础。     

高羊茅根际一种短体线虫的分离与鉴定

高羊茅(Festuca elata)是草坪草中绿期最长的一个草种,在草坪建植中具有重要作用。一些病害随着高羊茅种植范围的不断扩大而逐渐频发,对草坪造成极大经济损失。本研究通过调查北京市高丽营镇高羊茅斑块状枯死的原因发现,导致高羊茅枯死的是高羊茅根际优势植物寄生线虫。采用贝尔曼漏斗法分离了侵染北京地区高羊茅上的线虫,结合唇环、受精囊、食道、V值等形态学鉴定方法,证明高羊茅草根际优势植物的寄生线虫均为一种短体线虫,确定为斯克里步纳短体线虫(Pratylenchus scribneri)。线虫ITS和28S序列的PCR扩增及Gen Bank序列比对后发现,其与国外发现的P.agilis及P.scribneri序列相似度为93%,亦确证该线虫为斯克里步纳短体线虫。     

台州市开元广场设计探讨

介绍一个窄长的街道广场,探讨如何在一个"白纸"式的场地上,通过"预景"(vision)建构设计过程,使场地内部自成一体、自我关联,在一种内向的状态中实现从总体到细节的自我完善,营造怡人的公共空间.     

苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vips研究进展

苏云金芽孢杆菌Bt营养期杀虫蛋白Vips主要分为Vip1、Vip2和Vip33种。Vip1和Vip2构成二元毒素,对叶甲科昆虫具有特异杀虫活性。Vip3对鳞翅目昆虫具有广谱杀虫活性,该蛋白广泛存在于Bt中,与已知杀虫晶体蛋白ICPs没有序列相似性。Vip3通过诱发细胞凋亡,最终导致昆虫死亡,这与Btδ-内毒素的作用机理完全不同,Vips的发现对于Bt的进一步开发利用具有重要意义。本文主要对营养期杀虫蛋白Vips的分布、特性、作用机制及应用等进行报道。     

美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定

利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因HcCDA1.将该基因分别在大肠杆菌BL21和毕赤酵母细胞Pichia pastoris GS 115表达.经诱导表达后,Western blot分析表明HcCDA1在大肠杆菌中成功表达61.8 kD的蛋白,符合预期大小;在毕赤酵母GS115中成功表达80 kD蛋白.酶活性试验显示酵母细胞中表达的重组蛋白酶活力为1.685 U/mL.本研究利用毕赤酵母成功表达具有酶活力的重组HcCDA1蛋白,为进一步明确该蛋白的生理功能提供条件.     

花生蛴螬中肠组织cDNA文库的构建

利用Qiagen试剂盒提取花生害虫华北大黑鳃金龟幼虫蛴螬中肠总RNA,并纯化mRNA,然后按照Stratagene试剂盒合成双链cDNA,经过凝胶柱层析,收集符合要求的cDNA片段,加工后与Uni-ZAP XR Vector连接,经Gigapack Ⅲ Gold体外包装,即获得蛴螬的cDNA文库,未扩增文库滴度1.95×106pfu/mL,重组率为99.7%,扩增后文库滴度达1.34×109pfu/mL,插入cDNA片段的长度平均为1.34kb,表明成功构建了高质量的蛴螬中肠cDNA文库。     

一种从多克隆抗体库快速分离高特异性抗体的方法

为克服传统方法制备单克隆抗体复杂而费时的弊病,研究介绍了一种从多克隆抗体库中快速分离高特异性抗体的方法;根据抗原抗体特异性结合的原理,以大肠杆菌系统表达的甜菜夜蛾围食膜蛋白SeP89为抗原,从多克隆抗体库中分离其特异性抗体;成功从甜菜夜蛾围食膜蛋白抗血清库中分离SeP89蛋白的特异性抗体;以快速分离围食膜蛋白SeP89抗体为例,研究建立了一种快速从多克隆抗体库中分离特异性抗体的方法.     

通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体的构建

用PCR方法克隆了山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的TK基因,根据TK基因结构,设计了2对引物分别扩增得到与TK基因部分相邻的长度约1kb的同源重组臂序列,分别插入到pGEM-Teasy载体,通过SmaⅠ位点重新连接,并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGHpolyA信号以及LacZ基因,构建了通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体pdTK.此转移载体为改造GTPV-TY株以及开发二价或多价基因工程疫苗奠定了基础.     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒对东方粘虫痘病毒的增效作用

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrosisvirus,AcMNPV)能够增强粘虫痘病毒(Pseudaletia separata entomopoxvirus,PsEPV)的侵染力。将两种病毒的混合悬液滴于50mg的饲料上,接入3龄末东方粘虫(Mythimna separata)的幼虫进行生物测定。当每头幼虫接入1.0×10~4 OBs的AcMNPV和1.0×10~7 OBs的PsEPV的混合液时,幼虫的死亡率为95.00%,而单独用1.0×10~7 OBs·虫~(-1)AcMNPV处理时,则幼虫不感染;单独用1.0×10~7 OBs·头~(-1)PsEPV处理时,只获得46.33%的死亡率。将AcMNPV多角体蛋白与病毒粒子分离,进一步测定,单独用1.0×10~6 OBs·虫~(-1) PsEPV侵染3龄末幼虫时,幼虫不被感染,而用同样浓度再混以AcM- NPV多角体蛋白或病毒粒子时,则会有41.67%和36.67%的死亡率,说明多角体蛋白或是病毒粒子的包涵体蛋白是产生增效作用的重要因子。     

非饱和土壤水分一维运动的数值模拟

以土壤水动力学原理为基础,利用有限差分法,建立了垂直方向上非饱和土壤水分一维运动的数值模型,用以模拟均质土壤在不同初始与边界条件下的水分运动。程序使用面向对象编程的VisualBasic高级程序设计语言编写,并通过验证。该模型可以模拟降水和灌溉入渗以及蒸发条件下的土壤水分在垂直剖面上的分布情况。