一种高通量提取桃DNA方法的建立与应用

【目的】DNA制备是大规模基因型筛选和分子标记辅助选种的重要前提,本研究采用一种1.2 mL八联排管代替单个离心管,探索一种操作简便、节约时间、成本低的桃DNA快速提取方法,以满足高通量遗传研究的需求,提高工作效率。【方法】以普通生长型桃（standard type,ST）‘中油桃8号’为母本,温度敏感半矮生型桃（temperature-sensitive semi-dwarf in Prunus persica,PpTssd）‘09-1-112’为父本,杂交获得F₁代分离群体500株实生苗为载体,包括温度敏感半矮生型246株,普通生长型254株,建立一种高通量、低成本桃DNA提取方法。利用1.2 mL八联排管结合八通道移液器,简化提取步骤,提取桃幼嫩叶片中的基因组DNA;通过紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA浓度、纯度和完整性进行检测。基于高分辨率熔解曲线（high resolution melting,HRM）,采用96孔板对温度敏感半矮生型桃和普通生长型桃共500个F₁分离后代单株进行PCR扩增和基因分型,区分TSSDtssd基因型与tssdtssd基因型。基于双亲表型与基因型一致,开发InDel位点,PCR扩增后,采用SDS-PAGE在F₁群体中进行验证,确定利用分离的DNA是否正确区分不同基因型。【结果】分离的DNA经紫外分光光度计检测,浓度范围约为25-200 ng·μL^-1,OD_260nm/OD_280nm约为1.81-1.98,DNA纯度较高;琼脂糖凝胶电泳条带清晰、单一,DNA完整度较高。参考桃基因组（Version 2.0）,根据双亲深度测序数据,开发获得SNP标记SNP_Pp03_3758620,应用于高分辨率熔解曲线基因分型,发现温度敏感半矮生型和普通生长型呈现明显不同的峰型,证明提取的DNA模板可应用于HRM基因分型。基于双亲基因型与表型一致,开发InDel标记InDel_Pp03_3829009,聚丙烯酰胺凝胶电泳的验证结果显示PCR扩增具有较高的强度,获得与目的片段大小一致的特异性条带,且在两种不同生长型单株中具有明显的多态性,表明PCR扩增稳定,提取的DNA可用于基于InDel标记的多态性分析。使用该提取方法,每人每天可以完成1 000个样品的DNA提取,成本较低,且不会对幼苗早期生长造成影响。【结论】建立了一种简便、有效、低成本的桃基因组DNA提取方法,可以满足基因分型、品种鉴定及遗传分析等分子生物学研究,实现了大批量不同样本基因组DNA的同时提取,具有较高应用价值。     

蔬菜根结线虫病发生特点及控制措施

近年来,随着保护地蔬菜生产面积的不断增加,再加上连作重茬等人为因素的影响,根结线虫病已成为保护地蔬菜生产的一大障碍。一、危害症状根结线虫主要侵染蔬菜的根系,根部形成瘤状物,以侧根和根须较多,初为白色,表面光滑。后期变褐,粗糙。剖开根结,可见乳白色线虫。受害的植株,地上部生长缓慢,影响生长发育,植株矮小,黄化萎蔫。似缺肥水或枯萎病症状。果菜类结果小而少,多为畸形,根部受害后,其它土壤病原物乘虚侵入,     

冬季早熟西瓜病毒病的综合防治技术

滇西地处低海拔热河谷地区,具有冬季积温高,夜温差大的气候优势,种植的西瓜以上市早、品质优而闻名全国,产品远销东北、华北及西南各省市,瓜农获得了较好的经济效益。目前种植冬早两瓜已作为滇西地区冬季农业开发的主要项目之一,常年种植面积达4500～5500公顷。但近几年病毒病的发生与危害在逐年上升。     

气象要素对植物病害侵染循环的影响

侵染循环是指寄主植物从前一生长季节开始发病到下一生长季节再次发病的过程。其中包括病原物的越冬、越夏、传播和初侵染、再侵染。一、病原物的越冬、越夏病原物的越冬或越夏与植物的生长季节有关,是病原物怎样度过寄主的休眠期的问题。     

秋延后大棚黄瓜品种比较试验

利用塑料大棚栽培秋延后黄瓜的经济效益较好,近年来,荆门市蔬菜主产区秋延后黄瓜大棚种植面积逐年扩大。为了筛选出综合性状好、经济效益高的黄瓜新品种．进行了5个黄瓜品种的秋延后大棚栽培比较试验。现将试验结果报告如下。     

两种方法染色处理速生杨木单板

采用热浸法和冷压法对速生杨木单板进行染色处理,利用紫外可见分光光度计研究染液质量分数、染色时间、染色温度及助剂等因素对速生杨木单板染色效果的影响.结果表明:两种方式对速生杨木单板进行染色处理都取得了较好的上染率,而热浸法的染色效果较冷压法要好.     

浅论港口对区域经济发展的带动作用

港口是区域经济发展的重要资源,是带动区域经济发展的核心战略优势,港口经济已经成为区域经济发展的增长极. 一、港口发展对区域经济发展产生乘数效应 港口发展的乘数效应表现在两个方面:一是表现在港口业本身的乘数效应.“据初步测算,我国沿海港口每百万吨吞吐量可创造1亿元以上的GDP和2000多人的就业机会.”港口产业不仅解决了大量的就业问题,创造一定的国民收入,而且带动了为港口建设提供原材料和港口机械的行业的发展,这些行业又会带动为其提供原材料、机械、服务等其它行业的发展等等.港口运输业需要金融、邮电、通讯、餐饮等行业提供服务,从而带动了第三产业的发展.二是港口区域经济的乘数效应.沿海港口城市是先进产业最先登陆的地区,无论是依靠雄厚的资金发展起来的资金密集型还是知识技术密集型产业,都会逐渐在港口城市形成支柱产业.这些支柱产业的发展会带动一系列为它们服务的生产性和非生产性行业的发展,使沿海港口城市的社会规模越来越大.     

南通市耕地土壤肥力动态演变趋势及监测点稻麦施肥情况分析

为掌握江苏省南通市耕地土壤肥力动态演变趋势,现对南通市2008年-2019年期间的耕地土壤肥力变化情况进行了动态监测,同时对监测点的稻麦施肥情况及产量进行了分析.结果 表明,2008年-2019年期间,南通市耕地土壤肥力稳步提升,平均基础产量小麦为2943.6 kg/hm2、水稻为4783.5 kg/hm2.2019年...     

水稻穗期前后施用农药对稻米中农药残留影响的研究

通过田间多种药剂、不同剂量、不同用药时间、不同药次数试验,收集各处理小区的稻谷、稻草、土样,在室内对稻谷糙米中的农药残留量、降解动态进行检测分析,明确了大米中的农药残留量,直接与施药时间,农药品种、施药频数密切相关,残留量三唑磷>乙酰甲胺磷>甲胺磷>毒死蜱>吡虫啉>敌敌畏,从而为无公害优质米产业化、标准化生产中科学合理、安全用药提供了科学依据.     

南通市各农区土壤有机质与全氮测定及其相关性分析

对南通市不同农区土壤耕层的全氮与有机质含量进行了测定,并分析了其线性相关性及影响因素,结果表明,全氮与有机质存在显著正相关性,但各农区的回归系数与相关系数有所不同,施肥对有机质与全氮离合有一定影响。