猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。     

1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒分子进化分析及对鹅的致病性

从广东地区鹅群采集的咽喉拭子中分离到1株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)并命名为A/Goose/Guangdong/A11/2016(H9N2)(GS/A11)。采用RT-PCR方法扩增出病毒的全基因片段,并进行序列比较及遗传进化分析。推导氨基酸序列分析表明,GS/A11的HA蛋白裂解位点序列为333PSRSS↓GL340,无连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感特征;GS/A11上的Q226L突变提示结合人α-2,6唾液酸受体的能力增加;M2蛋白中出现了与金刚烷抗性相关的S31N突变。基因遗传进化树分析显示,分离株病毒为三元重组基因型。为了解H9N2亚型对鹅的致病性,以106×EID50剂量经静脉注射6周非免疫鹅,攻毒显示,攻毒鹅无明显临床症状,仅表现为局部器官感染,可经喉气管和泄殖腔排毒。研究提示,该株H9N2亚型AIV对鹅无明显致病力,但感染后可持续排毒。该现象为流感病毒在鹅及其他禽类中流行并发生基因重组提供了机会,故应加强鹅H9N2亚型AIV的检测及分子遗传的演变监控。     

1型鸭肝炎病毒R株全基因组分析与检测技术的研究

 【目的】测定1型鸭肝炎病毒（DHV1）毒株R全基因组,建立鸭肝炎病毒1型巢式PCR与实时荧光定量RT-PCR。【方法】设计特异性引物测定DHV1毒株R全基因组,以3D为靶基因序列的引物P1和P2,P3 和P4进行巢式PCR,引物F和R进行实时荧光定量RT-PCR。【结果】序列分析发现该毒株与其它GenBank上发表的DHV1毒株基因组核苷酸序列同源性为94.2%～99.2%,编码聚合蛋白氨基酸序列同源性为98%～98.8%,表明DHV1-R株与其它DHV1毒株之间病毒基因组一级结构有较高的同源性。基因组结构5′UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C- 3A-3B-3C-3D-3′UTR在遗传进化关系上与副肠孤病毒属（Parechovirus）亲缘关系较近。参照鸭肝炎病毒1型基因序列设计特异性引物,分别进行巢式PCR和SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR 方法检测鸭肝炎病毒1型, 结果表明巢式PCR敏感性为6 pg•ml-1。实时荧光定量RT-PCR确定特异性产物的Tm值,同时做普通RT-PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为85.6℃,最低能检测到含0.015 fg•μl-1 阳性质粒标准品。【结论】建立的巢式PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR 检测方法显示了较好的特异性、敏感性,为鸭肝炎病毒1型的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。     

鸡传染性法氏囊病病毒的分子致病机理研究进展

鸡传染性法氏囊病(IBD)是传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病。由于IBD发病突然、病程短、死亡率高,且可引起鸡体免疫抑制,目前仍然是养鸡业的主要传染病之一。近几年IBD的流行出现发病日龄增大、临床症状不明显等新的特点,加上IBDV超强毒株和抗原变异毒株的出现,致使传统疫苗免疫效果欠佳,给我国IBDV防控带来更大的挑战。文章对IBDV编码蛋白的功能、IBDV感染对细胞免疫的影响、与宿主细胞相互作用及致病机理等方面的最新研究进行论述,以期对IBDV的致病机制有更加系统的了解,为该病的防控提供方法和策略。     

鸡白痢沙门菌的耐药性及磺胺类耐药基因的研究

本研究检测分析了珠三角地区鸡白痢沙门菌对磺胺药的耐药性及相关耐药基因,以进一步了解鸡白痢沙门菌对磺胺药耐药性的产生和传播机制。采用微量稀释法检测69株鸡白痢沙门菌分离株对磺胺药的耐药性,PCR检测了磺胺类耐药基因SulⅠ、SulⅡ和SulⅢ在分离株中的分布情况。结果显示,75.4%的受试菌株对磺胺异恶唑产生了耐药性;耐药基因SulⅡ检出率最高(79.7%),其次是耐药基因SulⅠ(33.3%),未能检出耐药基因SulⅢ。提示珠三角地区鸡白痢沙门菌对磺胺药的耐药情况相当严重,磺胺类耐药基因SulⅠ和SulⅡ在磺胺类耐药菌株的产生中起重要作用。     

猪TNF-α竞争定量RT-PCR标准曲线的建立

根据GenBank中猪TNF-α的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增402 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建成含TNF-α部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增402 bp片断共用同一对引物,但缺失137 bp的竞争重组子.通过重组质粒与竞争重组子竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立猪TNF-α的标准竞争曲线和直线回归方程.     

番鸭感染AIVH5后血液中SOD活性和MDA的变化

对经H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗免疫后具不同H5亚型AI抗体水平的番鸭,人工感染AIV H5后,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化,研究番鸭抗氧化功能动态与AI抗体水平的关系.结果表明,AIH5免疫后,抗体水平在1:0～1:32之间时,人工感染AIV H5使SOD活性明显降低(P＜0.05或P＜0.01),MDA含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01),抗体水平在1:64～1:128之间时,SOD活性和MDA含量则接近正常的水平.     

番鸭“白点病”的诊断与防治

番鸭“白点病”又称“花肝病”、“花点病”、“番鸭坏死性肝炎”,是1998年以来在福建、浙江、广东等番鸭饲养区域出现流行的一种高发病率、高致死率的急性烈性传染病。发病雏鸭表现为迅速脱水消瘦,衰竭死亡,病理变化特征是心脏、胰脏、脾脏、肾脏等多个内脏器官,尤其是肝脏表面和实质出现弥漫性灰白色粟粒大小的坏死点。本病是目前危害番鸭群的几种主要传染病之一,直接影响番鸭的育雏成活率,给番鸭养殖业造成严重的危害。1.流行病学情况本病主要发生于6～30日龄的雏番鸭群,最小可见于3日龄,以10～15日龄的雏番鸭最为严重,而30日龄以上的番…     

ND不同免疫程序诱导鸡体的免疫动态比较

用鸡新城疫（ND）IV系，I系冻干苗，由NDV强毒制成的蜂胶灭活疫苗、油乳灭活苗，组合成不同的免疫程序对鸡群分别于20，27，35日龄进行免疫，以探讨ND疫苗弱毒苗和灭活苗诱导鸡体的免疫动态，为临床上合理地安排ND的免疫程序提供理论依据。试验结果表明：弱毒苗加油乳剂苗诱导免疫应答效果较为优越，也较为实用。     

猪IFN-γ竞争定量RT-PCR标准曲线的建立

根据GenBank中猪IFN-γ的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增380bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-TEasy载体中,构建成含IFN-γ部分基因片段的重组质粒。利用反向PCR技术构建和扩增380 bp片段共用同一对引物但缺失163 bp的竞争重组子。通过重组质粒与竞争重组子,建立猪IFN-γ的标准竞争曲线和直线回归方程,为进一步检测IFN-γ的mRNA的转录水平变化奠定基础。