鸡传染性支气管炎山东A株病毒S1高可变区基因的克隆

参照国外已发表的M41高可变区Sl序列设计-对引物，跨度为1．7kb左右。采用差速离心法浓缩病毒，提取病毒RNA，经RT-PCR扩增，得到与设计同样大小的PCR DNA片段，将PCR产物纯化，与质粒载体(pGEM-T EasyVecTOR)连接，并转入大肠杆菌JMl09，获取阳性克隆。增菌培养后用小量碱提取法提取质粒，利用PCR扩增法与EooRI酶切分析进行鉴定。对阳性质粒DNA进行测序，利用0migaa2．0、Dnasis等分子生物学软件进行分析，并与标准M4l株、T株等进行序列比较，结果表明：山东传支A株与标准M41株同源性较高，最大同源率为99％；与标准T株同源性较差，最大同源率为80％。理论酶切图谱与M41相同，为同一基因型。     

OuEChERS-联免疫吸附法检测动物源性产舳中阿维菌素残留

本研究采用QuEChERS净化法,样品用乙腈提取,ODs吸附剂粉分散固相萃取净化,检测动物源性食品中的阿维菌素。该方法的最低检测限1．Oag／kg,回收率在68．30／0-85．6％之间。通过3种不同种类动物源性产品中阿维菌素残留量的检测表明,该方法稳定、可靠,能满足动物源性食品中阿维菌素类药物残留检测需要。     

牛海绵状脑病的卫生检疫

牛海绵状脑病（Bovinespongiformencephalopathy，BSE）是由非常规的传染性因子引起、潜伏期很长、病势逐渐加重并以死亡为转归的牛的一种中枢神经系统疾病。其病理学特征为中枢神经系统的灰质形成海绵样空泡。据此将本病命名为牛的海绵状脑病。英国于1986年首先发现BSE，这种病的原始型是山羊和绵羊的痒病（ScraPie）。本病在美国、爱尔兰、瑞典、法国、瑞士、丹麦、阿曼苏丹、福克兰群岛都有发生。1992年5月，国际兽疫局（OIE）召开的第60次会议上，将BSE列为重点疫病，放在牛的卫生检疫上，对BSE进行充分了解和监视是十分必要目…     

小反刍兽兽疫的检疫

小反刍兽兽疫(peste des petits ruminants, PPR)又称小反刍兽假性牛瘟或羊瘟,是由副黏病毒科麻疹病毒属小反刍兽兽疫病毒引起的一种急性接触传染性疾病.主要感染小反刍兽,特别是山羊高度易感,野生动物也可偶然发生.     

仔猪腹泻性大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,简称ETEC)引起的新生仔猪腹泻一直是困扰养猪业发展的重要疾病之一。该病的发病率、死亡率均较高,是影响规模化猪场哺乳仔猪成活率的主要病因,给养猪业造成了极大的经济损失。对于由ETEC引起的腹泻,国内外长期采取药物治疗方法,但药物治疗费用昂贵,更因抗药菌株日趋增多,导致药物疗效不佳甚至无效,而免疫预防是控制这类疾病的最佳选择。粘附素和肠毒素是大肠杆菌的两个重要毒力因子,是导致腹泻的主要原因。目前国内外对粘附素和肠毒素基因工程疫苗进行了广泛的研究,取得了很好的成…     

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。     

鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒三重PCR诊断方法的建立及应用

根据GenBank中已登录的鸭病毒性肝炎病毒（DHV）、禽流感病毒（AIV）和新城疫病毒（NDV）的基因序列,设计了3对特异性引物,建立了DHV、AIV和NDV的多重PCR鉴别诊断技术,并对体系进行了优化和特异性、敏感性试验。结果表明,该体系所扩增的3种病毒基因片段大小分别为174bp（DHV）、264bp（AIV）和362bp（NDV）,且特异性、敏感性良好,能够分别检出1pg AIV、10pg DHV和10pg NDV的病毒RNA。对鸭临床样品的检测结果表明,该方法与病毒分离鉴定符合率90%以上,可用于临床样品的快速检测。     

共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。     

基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备(

采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHV VP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。     

利用噬菌体随机肽库筛选新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶模拟表位

噬菌体随机肽库技术被广泛应用于病毒抗原表位的研究(Ramanujam et al.,2002),利用该技术既可以筛选出线性表位,又可以筛选出与原始序列不同但功能相似的构象表位(Scott and Smith,1990)。本实验室已研制了针对LaSota株新