新疆石河子地区犬源立克次体病流行病学调查

立克次体目(Rickettsiales)中的立克次体属、埃立克体属和无形体属细菌分别能引起立克次体病、埃立克体病和无形体病,硬蜱是其主要传播媒介。在石河子市部分宠物医院及周边地区采集犬血及犬体表寄生蜱,通过PCR技术扩增蜱传立克次体目细菌16S rRNA基因,对所得结果进行测序并做系统进化分析。结果表明,扩增出立克次体345bp特异片段,无形体及犬埃立克体452bp特异片段,测序结果证实这些片段分别为立克次体、无形体和犬埃立克体。遗传进化分析显示,犬源立克次体、埃立克体及无形体石河子流行株分别与Rickettsiales bacterium(EF687768)、Ehrlichia sp.Yonaguni206(HQ697589.1)、Anaplasma(KJ410247.1、KJ410248.1、KJ410249.1)处于同一分支,分别属于立克次体、埃立克体、无形体的保守分支,提示与这些国内外流行株具有较近的亲缘关系。本研究基本理清了石河子地区犬中蜱传立克次体的感染和流行情况,为立克次体的防治提供了流行病学资料。     

肝片吸虫Ftn-1蛋白分子特征、抗原性及其抗体制备

为研究肝片吸虫Ftn-1蛋白的免疫学特性,根据Gen Bank中已发表的Ftn-1基因序列设计特异性引物,以肝片吸虫总RNA为模板,进行Ftn-1基因的RT-PCR扩增,将扩增产物连接到p MD19-T载体中,筛选出阳性克隆后测序,分析其分子特征。将Ftn-1基因克隆入表达载体p ET-32a(+)中,将其转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达并获得纯化的重组蛋白Ftn-1,经SDS-PAGE检测后,进行Western blot和小鼠免疫试验,分析其抗原性。结果显示,成功克隆了肝片吸虫Ftn-1基因,其c DNA全长为477 bp,推测编码158个氨基酸,编码蛋白质分子的抗原表位区主要集中在第33—57、83—87、113—146位,为亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽。经SDS-PAGE检测,重组蛋白Ftn-1分子质量约为33.5 ku,与预期大小相符;Western blot分析结果表明,重组蛋白Ftn-1可被肝片吸虫阳性血清特异性识别,证明具有良好的反应原性。小鼠免疫试验证实,重组蛋白Ftn-1具有良好的免疫原性。     

兔副伤寒病的诊治

兔副伤寒病的诊治塔里木农垦大学动物医学系８４３３００乔军兔副伤寒病是由鼠伤寒沙门氏杆菌和肠炎沙门氏菌引起的一种消化道传染病，其中以幼兔、怀孕母兔的发病率和死亡率最高。笔者于１９９３～１９９５年期间共诊治此病８７例，其中幼兔２９例，怀孕母兔５８例。共治...     

牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证

为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。     

细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究

为研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)中的原头蚴特异性抗原Eg19蛋白的反应原性,根据Gen Bank中Eg19抗原基因c DNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到p MD19-T载体,测序验证后,将Eg19抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,构建p ET-Eg19原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。结果 Eg19 c DNA全长534个核苷酸,编码177个氨基酸,等电点为4.54。该多肽含有2个N端酰基化位点,1个PKC磷酸化位点,1个CKⅡ磷酸化位点,1个ATP/GTP结合位点基序A(P-loop);抗原表位区集中在20~93、96~146位;为亲水性蛋白。SDS-PAGE可以检测到35 k Da的蛋白特异性条带;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg19抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用Eg19抗原蛋白作为Eg感染诊断中的候选抗原奠定了前期基础。     

σ~B因子在单核细胞增生李斯特菌环境应激反应中的调控作用

为了解σB因子在单核细胞增生李斯特菌(LM)环境应激反应中的调控作用,笔者用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)和同源重组的方法构建了SigmaB基因缺失株,分析该缺失株在不同温度、pH和高盐压力条件下的应激反应能力及应激相关基因的转录水平。结果表明:与野毒株相比,SigmaB基因缺失株在压力条件下的应激能力减弱,rsbV、rsbW、hpt、clpP、ctsR等环境应激相关基因转录水平均降低。本研究提示σB因子在LM温度、pH和高盐环境应激反应中具有重要的调控作用,这为揭示LM环境应激反应的分子机制及药物作用新靶点的筛选提供了重要的理论依据。     

哺乳仔猪饲养管理应顺应的规律

哺乳仔猪的饲养管理包括了哺乳仔猪的饲养、哺乳仔猪的管理、降低哺乳仔猪死亡率等项内容。要想做好这些内容则必须先详细了解哺乳仔猪的生理特点:     

奶样中无乳链球菌和乳房链球菌的分离与鉴定

奶牛乳房炎是奶牛最常见的疾病之一.该病主要由细菌引起,在牛群中广泛存在,其中无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)和乳房链球菌(Streptococcus uberis)是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌.试验采用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择性培养基和色素试验培养基快速分离无乳链球菌和乳房链球菌,并结合生物梅里埃开发的VITEK全自动细菌鉴定仪进行准确鉴定,从而建立一种从奶样中快速分离无乳链球菌和乳房链球菌的常规方法.     

秀丽隐杆线虫的培养条件及其在捕食线虫性真菌研究中的应用

为进一步了解模式线虫-秀丽隐杆线虫(C.elegans),并为筛选高效力的家畜寄生线虫生防真菌提供实验依据,本研究通过对C.elegans的形态、培养条件以及保存方法的研究,发现C.elegans在16℃～25℃NGM培养基中均可以生长,但在20℃NGM培养基中生长较佳。在-80℃或液氮的温度条件下,C.elegans在30%甘油溶液和SA冻存液中均可以保存至少2年。同时,本研究探索了不同龄期C.elegans幼虫对供试菌-少孢节丛孢菌新疆分离株(Arthrobotrys oligospora XJ-XA)的捕食器官的诱导能力,并测定了供试菌株对不同龄期C.elegans幼虫的捕食率,分析了菌株捕食器官产生、捕食能力与线虫龄期的关系。结果表明,不同龄期C.elegans对供试菌的捕食器官诱导产生的数量有明显差异,而且供试菌对不同龄期C.elegans的捕食能力也存在差异。     

中国白兔白介素-15基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的表达

以RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞（PMBCr）进行扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-15基因进行序列比较。结果IL-15基因全长489 bp,编码162个氨基酸,其中前29个氨基酸残基构成信号肽序列。与不同物种IL-15基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异。在推导的中国白兔IL-15氨基酸序列中,在108～110、119～121、127～129和143～146位存在4个潜在的N-联糖基化位点,同时存在6个Cys残基。将pTIL-15双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-15,转化大肠杆菌BL21（DE3）,并用IPTG进行了诱导。结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为20 500的重组目的蛋白。经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的13.6%。