非洲猪瘟血清学诊断技术研究进展

非洲猪瘟是一种病毒性、出血性、接触传播性疾病,具有极高的致死率。我国作为养猪大国,非洲猪瘟给我国造成巨大的经济损失。由于我国目前尚未有可用的商品化疫苗,只有尽早地发现非洲猪瘟并严格实施流行病学调查、消杀灭源才能有效防控非洲猪瘟。随着非洲猪瘟流行特征的变化,非典型临床病例、慢性感染猪逐渐增多,病毒血症不明显并且排毒不规律,仅靠病原学存在漏检可能,而血清学检测可作为病原学检测的补充,对于非洲猪瘟临床诊断具有重要意义。本文从流行病学、病毒结构、诊断标识以及现阶段常用的非洲猪瘟血清学检测方法进行综述,供非洲猪瘟血清学诊断研究以及疫情防控工作者参考。     

基于RNA-seq对猪瘟病毒感染宿主的转录组学研究进展

对转录组测序(RNA-seq)的技术特点及其发展进行概述，对该技术在猪瘟感染研究中的应用进行详细综述，并对其存在的问题及未来发展做了进一步展望，以期为猪瘟的相关研究提供参考。     

牛中华泰勒虫(Theileria sinensis sp.nov.)新种Ⅰ.传统分类学研究

对分离自我甘肃中部地区土种黄牛体的泰勒虫未定种作了鉴定。与环形泰勒虫（T.annulata)、瑟氏泰勒虫（T.sergenti)、小泰勒虫（T.parva)、突变泰勒虫（T.mutans)、斑羚泰勒虫（T.tautotragi)、附膜泰勒虫（T.velifera)、水牛泰勒虫（T.buffeli)作了形态学上的比较研究，观察到该未定种除了泰勒虫所共有形态外，还有其它泰勒虫所没有的且难以描述的特异形态，尤其对染虫率高峰期，特异形态占虫体总数的20％左右。该种还具有出芽增殖的特性，可在除脾牛体内大量繁殖，染虫率可达52．69％的高峰，试验感染牛出现高烧、极度贫血、精神沉郁、食欲不振等临床症状，导致个别牛只死亡，剖检观察到某些脏器有严重病变，表明具有一定的致病力。媒介蜱尚不清楚，但已证实，在我国传播家畜泰勒虫和巴贝斯虫的7种媒介蜱对该种无传播能力。传统分类学研究结果表明，该种不同于已知牛泰勒虫有效种，系一新种。由于这一新种首次在中国分离到，因而被命名为中华泰勒虫（Theileria sinensis sp.nov.)（梨形虫亚目：泰勒虫科）。     

口蹄疫病毒强毒株China/99 P2区核苷酸序列测定及比较分析

以口蹄疫病毒强毒株China/99PNA为反转录模板，用一对特异性引物扩增目的cDNA，然后与pGEM-T Easy载体连接并转化J109菌株，再经重组质粒电泳、PCR和EcoR1酶切鉴定，序列测定和分析结果表明，该强毒株与A12、O1K和TW45毒株的核苷酸差异率分别为7．78％、6．62％ 13．19％，推导的氨基酸序列差异率分别为1．23％、1．84％和5．73％，4个毒株序列比较发现，China/99、O1K和TW45三毒株的2A／2B连接处为甘氨酸／脯氨酸，A12为精氨酸／脯氨酸，而且T－C转换率和A－G转换率较高，是点突变的热点核苷酸，氨基酸差异主要存在于2B和2C蛋白中，2A基因较为保守，2B蛋白和第1－4，63－67，73－78，83－91，116－121和126－131区域，2A蛋白的第4－9区域和2C蛋白的第9－13，22－25，91－96，150－159，179－188，201－207和258－262区域可能是重要的活性中心。     

从高热病死猪中分离到1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒

1 材料与方法 1.1 病料、细胞、实验猪、抗体血清等 11份来自猪场发病死亡猪的病料,分别采自发病猪的心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结;Marc-145细胞由本所鉴定、保存和提供;PRRSV抗血清由中国农业大学动物医学院杨汉春教授惠赠,中和效价为1:40;实验猪:12头55日龄左右的健康仔猪,4头105日龄左右健康猪.均来自中国兽医药品监察所实验基地.猪瘟、伪狂犬病、圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征经检测均为阴性.     

传染性法氏囊病病毒X毒株不同代次的致病性及VP_2可变区序列分析

分别以传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) X毒株细胞适应的第 5代、第 1 1代和第 1 7代毒感染 38日龄非免疫雏鸡进行致病性试验 ,确定 X毒株的毒力 ,并比较 3个代次毒的致病性差异 ,进而利用 RT-PCR扩增其VP2 基因可变区 ,测定其核苷酸序列 ,从分子生态学角度研究了非鸡胚源细胞传代培养对 IBDV X毒株毒力和抗原性的影响。结果表明 ,IBDV X毒株表现为中等毒力 ,在 Vero细胞上传代后 ,其毒力有所减弱。VP2 可变区氨基酸序列有 3个位置发生了替换 ,即第 5代毒氨基酸残基 2 62位为半胱氨酸 ,而第 1 1代毒和第 1 7代毒则变为酪氨酸 ( Cys→ Tyr) ;第 5代毒的 2 90位为缬氨酸 ,而第 1 1代和第 1 7代毒则变为蛋氨酸 ( Val→Met) ;第 5代毒和第 1 1代毒的 31 6位为赖氨酸 ,而第 1 7代毒则变为精氨酸 ( Lys→Arg)。 2 90位氨基酸替换导致该区域二级结构的改变 ,并对 IBDV的抗原性有显著影响。上述结果提示 ,这些氨基酸残基可能对维持IBDV的毒力和抗原性是必要的。通过毒株间 VP2 可变区序列的比较和系统发生树的分析 ,证明 IBDV X毒株与 Bursin-2疫苗毒关系很近。     

传染性法氏囊病病毒X毒株不同代次的致病性及VP2可变区序列分析

分别以传染性法氏囊病病毒（IBDV）X毒株细胞适应的第5代、第11代和第17代毒感染38日龄非免疫雏鸡进行致病性试验，确定X毒株的毒力，并比较3个代次毒的致病性差异，进而利用RT－PCR扩增其VP2基因可变区，测定其核苷酸序列，从分子生态学角度研究了非鸡胚源细胞传代培养对IBDV X毒株毒力和抗原性的影响。结果表明，BDV不X毒株表现为中等毒力，在Vero细胞上传代后，其毒力有所减弱。VP2可变区氨基酸序列有3个位置发生了替换，即第5代在酸残基262位为半胱氨酸，而第11代毒和第17代毒则变为酪氨酸（Cys→Tyr)；第5代毒的290位为缬氨酸，而第11代和第17代毒则变为蛋氨酸（Val→Met)；第5代毒和第11代毒的316位为赖氨酸，而第17代毒则变为精氨酸（Lys→Arg）。290位氨基酸替换导致该区域二级结构的改变，并对IBDV的抗原性有显著影响。上述结果提示，这些氨基酸残基可能对维持IBDV的毒力和抗原性是必要的。通过毒株间VP2可变区序列的比较和系统发生树的分析，证明IBDV X毒株与Bursin-2疫苗毒关系很近。     

口蹄疫病毒基因组IRES和Poly（C）之间功能未知区一级和二级结构分析

用RT－PCR法，以口蹄疫病毒（FMDV）WH／99株牛舌水泡皮为材料，提取RNA及扩增目的cDNA，然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株，再经重组质粒电泳、PCR和EcoR Ⅰ酶切鉴定；用DNAstar软件比较功能未知区的序列差异，以RNAdraw软件分析它们的二级结构。结果表明，7株FMDV的功能未知区序列长度介于207－256个核苷酸；序列分析表明，WH／99与Asia Ⅰ63／72、A24／Cruzeiro、TWTY／97和TWCP／97的序列差异最大，预示此区段可能与病毒感染嗜性有关；二级结构分析表明，A24／Cruzeiro、Asia Ⅰ63／72和TWCP／97均有5个结构域，WH／99和TWTY／97具有6个结构域。TWTY／97和TWCP／97二级结构的差异可能是TWTY／97功能未知区第20位插入的“C”所致，而O1K／66和O1Campos仅有3个结构域。2株猪O型FMDV功能未知区5'端存在着连续的核苷酸缺失现象，最多达52个，唯有3株牛O型FMDV（O1K／66、O1Campos和WH／99）在上述位置无任何缺失。