重组甲基转移酶致弱水疱性口炎病毒的致病性与免疫原性

为了研究有效的水疱性口炎病毒疫苗,控制水疱性口炎疾病的蔓延,用甲基化能力致弱的重组水疱性口炎病毒VSV-E1764A,VSV-S1827A,VSV-Y1650A和VSV-F1691A作为疫苗,通过口腔灌服途径将1×106 PFU的重组病毒接种5周龄BALB/c小鼠,研究以上重组病毒的致病性和免疫原性.结果表明:重组病毒VSV-S1827A,VSV-Y1650A和VSV-F1691A对小鼠的致病性减弱,而VSV-E1764A仍然具有较强的致病性;免疫后的小鼠用野生型水疱性口炎病毒(VSV)进行攻毒,发现VSV-S1827A和VSV-Y1650A能够诱导高水平的中和抗体,从而保护小鼠免于攻击.总之,甲基化酶致弱的水疱性口炎病毒VSV-S1827A和VSV-Y1650A不仅对动物的致病性减弱,而且表现出良好的免疫原性;因此,甲基化酶致弱的水疱性口炎病毒可能成为有良好开发前景的活疫苗.     

基于T7 RNA聚合酶的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立

    为了建立传染性法氏囊病病毒反向遗传系统,应用PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5'末端和3'末端分别引入T7启动子和核酶HDV序列,然后分别将含有T7启动子和核酶HDV序列的A、B节段构建到载体PT-Pluc当中,构建感染性载体PT-mA和PT-mB.在脂质体介导下将PT-mA和PT-mB共转染经痘病毒vTF7-3(含T7 RNA聚合酶基因,能稳定表达T7 RNA聚合酶)预先感染1 h的vero细胞.细胞病变观测、间接免疫荧光试验、电镜观察和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救.     

不同利用方式下贵州玄参产地土壤重金属含量与评价

以贵州玄参产地不同利用方式下土壤为研究对象,分析测定了不同利用方式下土壤中重金属含量特征,并采用单因子污染指数法与综合污染指数对不同利用方式下土壤重金属污染进行评价,结果表明:土壤重金属Cr含量表现为玄参党参林地,As和Hg含量表现为林地玄参党参,Pb含量表现为玄参林地党参,Cu含量表现为党参玄参林地;参照国家土壤环境质量二级标准,Cr、As、Hg、Pb及Cu5种重金属含量没有超过标准值;参照贵州省土壤背景值,玄参种植土壤及党参种植土壤中重金属Cu超过贵州省土壤背景值;参照《绿色食品产地环境技术条件》,5种重金属均属于正常水平;玄参种植土壤、党参种植土壤和林地综合污染指数均小于1,表明贵州玄参产地土壤环境质量良好,但玄参种植、党参种植土壤和林地土壤重金属综合污染程度属于警戒线水平。     

体外诱导猪脾细胞产生白细胞介素2的初步研究

报导了用猪脾淋巴细胞制备白细胞介素2(interleukin 2,IL_2)的方法.用不同来源的植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)作为刺激剂,研究体外诱导猪脾细胞产生IL_2的最适条件.采用IL_2依赖T细胞株(FI_2)的增殖反应3H—TdR掺入法进行IL_2的活性测定.结果表明,诱导IL_2产生的最适条件是:脾细胞悬液浓度为5×10~6个细胞/ml,PHA(国产)的刺激浓度是350μg/ml,培养时间以48小时为宜,用相同剂量的PHA刺激猪脾细胞,Difco产的PHA—P诱导IL_2产生的效果优于国产PHA:在培养液中加入2—巯基乙醇(2—mercaptoethanol,2—ME)未见IL_2的活性增高.     

漓江上游山区水源林叶面积指数变化的遥感监测

为了定量评价漓江上游山区复杂地形水源林叶面积指数(LAI)的变化,对阔叶林、针叶林、竹林样地以TRAC仪器测定LAI,利用遥感数据计算归一化植被指数(NDVI)、比值植被指数(SR)、减化比值植被指数(RSR)、土壤调整植被指数(SAVI)、增强植被指数(EVI),并从DEM数据获取高程、坡度、坡向,提出并建立复杂地形最优多植被指数组合估算山区林地LAI的神经网络模型,利用模型对1989–2009年6景TM/ETM遥感图像估算LAI空间分布。结果表明,神经网络解决了LAI与多植被指数的非线性回归方程无法引入地形因素、且方程系数较多较难确定的问题,提高了LAI的估算精度。研究区成熟阔叶林减少代之以大片种植经济幼林,是导致林地LAI变化的原因。1989-2000年,LAI≥6.0的林地面积比例从78.8%逐年急剧下降到44.1%,LAI在1.0~6.0的林地面积比例从20.8%大幅上升到55.4%;2000-2009年,随着幼林的生长、竹林的速生,LAI≥6.0的林地面积比例逐渐上升恢复到74.5%,但仍未恢复到1989年的面积比例,相应LAI在1.0~6.0的林地面积比例逐渐下降到25.1%。研究成果为漓江上游水源林生态评估提供参考。     

罗氏沼虾诺达病毒TAS-ELISA检测法的建立及应用研究

罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases of Macrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1:50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000-2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践.     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因植物表达载体的构建

以含鸡传染性法氏囊病病毒(杭州分离株,HZ96)VP2基因的质粒 PBS为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到1.5 kb左右长的VP2基因产物;用KpnⅠ和 SalⅠ酶切纯化的PCR产物;将纯化的酶切产物在 T4 DNA连接酶的作用下定向克隆到植物表达载体Cambia1301 水稻胚乳特异性启动子GT1下游, 并经PCR、酶切和测序鉴定.植物重组表达载体经三亲交配已导入根癌农杆菌中.     

温州地区鸭疫里默氏杆菌的分离、鉴定及药敏试验

从浙江省温州地区2004年鸭场送检病死鸭的脑、心包液、脾及肝中分离到WZ1和WZ2两株细菌,将这两株细菌进行菌落形态观察、染色镜检、生化、血清鉴定及动物回归试验,证实该两株菌为鸭疫里默氏杆菌.两株细菌均对新霉素、头孢孟多、氟嗪酸及壮观霉素等抗生素敏感,对氟哌酸、氨卡青霉素、链霉素、庆大霉素、环丙沙星、氯霉素等不敏感.血清学试验表明,WZ1和WZ2两待检菌株血清型一致,但均不属于1型和2型.