耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及发酵条件优化

研究耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中异源表达。从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌BYG5-20中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因xynA,将其构建在大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGJ148中得到重组质粒pGJ148-xynA。采用电转化法将重组质粒pGJ148-xynA转入枯草芽孢杆菌1A747中,得到重组菌B.GJ148-xynA,然后进行诱导表达以及培养基的优化。重组菌GJ148-xynA发酵上清液中木聚糖酶酶活可达93.32IU/ml。耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶基因xynA可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。     

枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达

构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。     

麦芽糖诱导耐碱性木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达

考察麦芽糖诱导木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌WB700中的表达。以麦芽糖为诱导剂,对诱导质量分数、诱导时机、诱导温度和麦芽糖的添加方式等主要因素进行了分析比较。结果表明,当菌体生长至发酵液吸光值OD600达到1.3时加入终质量分数为4.5%麦芽糖,37℃,持续诱导10 h,木聚糖酶活力达到最高,为56.32 U。通过SDS-PAGE检测对比显示:经麦芽糖诱导表达的木聚糖酶比不加麦芽糖诱导的木聚糖酶表达量高,表达效果更明显。     

SO_2和Cl_2气体胁迫对茶条槭4种非酶类保护剂的影响

以三年生茶条槭为试验材料,采用静态熏气处理方法,探讨了SO2和Cl2单一气体胁迫对茶条槭叶片MDA和4种非酶保护剂含量的影响。结果表明：随着SO2和Cl2浓度的升高而MDA、FAA和Pro含量增加;可溶性糖和ASA的含量随着SO2和Cl2胁迫浓度的增加而减少,但低浓度的SO2和Cl2（0.3-1.5mg？m-3）胁迫时较对照增加或与差异不明显,当SO2和Cl2浓度达到0.3mg？m-3以上时则极显著下降;SO2和Cl2对茶条槭的伤害程度为SO2     

产β-半乳糖苷酶枯草芽孢杆菌BGJ222培养条件的初步优化

本文以酵母粉蛋白胨培养基为基础培养基,探讨了不同培养时间、接种量、初始pH、碳源、氮源、金属离子对枯草芽孢杆菌BGJ222表达β-半乳糖苷酶能力的影响。结果表明,菌株BGJ222最大产酶量的培养条件为:初始pH 6.6,接种量2%(V/V),培养温度37℃,培养时间24 h;培养基组成为:酵母粉0.5%(m/V),蛋白胨1.0%(m/V),NaCl 0.5%(m/V),三梨醇1.0%(m/V),MgCl20.5%(m/V)。在此条件下,菌株BGJ222表达β-半乳糖苷酶达到11456.4 Miller,比基础培养基的表达量(860 Miller)提高了12倍。     

产纤维素酶枯草杆菌B.subtilis DR的鉴定与酶特性研究

采用形态学观察和16SrDNA保守序列分析相结合的方法对一株产耐热纤维素酶的菌株进行鉴定。形态学观察为芽孢杆菌属革兰阳性菌。序列分析发现该细菌的16SrDNA保守序列与部分枯草杆菌的保守序列的同源性达到99%。结合形态学的观察,将该细菌命名为B.subtilis DR。大量培养获得发酵液中纤维素酶粗酶液,对其性质进行研究表明:该菌产生的纤维素酶为热稳定纤维素酶,最佳的酶促反应温度为50℃,最佳酶促反应的酸碱环境为pH6.5的中性偏酸性环境。在温度70℃下保温处理30 min,该酶仍保留超过70%的酶活力。     

小麦HMW-GS毛细管电泳高效分离体系研究

小麦高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）与小麦品质密切相关。为构建高效HMW-GS分离体系,以中国春为标准样,通过HPCE(毛细管电泳）方式,在亚氨基二乙酸（Iminodiacetic acid,IDA）缓冲液基础上,系统分析了不同组分浓度、pH以及毛细管电泳参数对HMW-GS分离效果的影响。结果表明,以15% 乙腈（Acetonitrile,ACN）+75 mmol·L^-1 IDA+0.05% 羟丙基甲基纤维素（Hydroxypropyl methylcellulose,HPMC）（pH=2.5）为缓冲液,采用内径25 μm、检测长度27 cm毛细管,PDA检测波长200 nm,分离电压20 kV,运行温度30 ℃,样品10.0 kV进样5 s时,亚基分离效果最好,连续多次、多天重复电泳,均可获得稳定图谱。相比传统的Phos-gly体系,图谱分辨率更好,分离重现性更高（亚基出峰时间RSD值小于0.2%）。     

大豆GmWRI1a基因启动子克隆及其功能分析

为了探究大豆种子油脂合成与储存基因GmWRI1a的调节,分析其启动子功能,从大豆品种东农50基因组中扩增获得GmWRI1a基因转录起始位点上游1669bp的启动子序列,转化拟南芥。GUS染色确定了启动子的有效性,继而根据顺式作用元件的分布,分别扩增得到4个启动子5'端缺失片段1138bp,1087bp,690bp和437bp。4个启动子缺失片段分别转化拟南芥后,通过GUS组织染色结果发现,这些启动子片段能够驱动下游GUS基因表达。GUS酶活表明,启动子存在乙烯、茉莉酸、赤霉素3种激素响应元件,其中乙烯、茉莉酸和赤霉素的响应元件分别分布在-1138^-1087bp、-1087^-690bp和-690^-437bp。     

日粮磷水平及磷限制日粮中添加不同浓度植酸酶对肉用仔鸡生长性能影响的研究

通过对高热稳定性、高耐酸性植酸酶生产价值的验证,研究了不同梯度日粮磷水平及磷限制日粮中添加不同浓度植酸酶对肉用仔鸡生长性能的影响。选择1日龄的AA白羽肉鸡(♂)800只,随机分为8个处理组,每组10个重复,每个重复10只鸡。处理组1为日粮正常组,基础日粮中有效磷的含量为0.45%;处理组2、3和4为日粮有效磷限制组,分别对日粮中有效磷的含量限制为0.35%,0.3%和0.25%。在处理组4的日粮基础上,分别对处理组5、6和7添加250U/kg,500U/kg和1000U/kg三个浓度梯次的植酸酶A,对处理组8添加100U/kg浓度的植酸酶B。试验期18d。结果表明,日粮有效磷限制组(处理组2、3和4)的肉用仔鸡18日体重、平均日采食量和料肉比等指标全都低于日粮正常组(处理组1),差异显著(P0.05);根据日粮中不同浓度植酸酶的添加,18日龄内,肉用仔鸡的平均体重(R2=0.6241)和料肉比(R2=0.9383)均呈现线性增长,同时,植酸酶B添加组(处理组8)的日采食量和日增重均优于植酸酶A添加组(处理组5、6和7)(P0.05)。因此,植酸酶可以有效的缓解日粮中有效磷不足对肉用仔鸡生长性能的影响,植酸酶B饲用效果优于植酸酶A。     

小麦新品种西农 537 及栽培技术

西农 537 是西北农林科技大学农学院以周 98165 为母本、西农 4211 为父本杂交后代品系（2007140）为母本，再以九麦 2 号为父本，经系谱法选育而成的高产、多抗、落黄好的小麦新品种，审定编号：陕审麦 2020005 号。对西农 537 的特征特性、产量表现及高产种植管理技术要点进行介绍，为小麦新品种西农 537 的示范和推广及后续相关的科学研究提供参考。