化学去核卵母细胞为受体的小鼠体细胞核移植

卵母细胞的化学去核是采用干扰染色体分离或纺锤体正常功能的化学试剂,使其所有染色质通过纺锤丝牢固结合,并借助极体排出的惯性将所有染色质全部带出胞外,达到去核目的。目前以化学去核处理的MⅡ期卵母细胞为受体,已获得克隆小鼠。然而,第一次减数分裂期的小鼠卵母细胞经化学去核后,进行核移植还未见报道。与传统的机械去核相比,该方法对卵母细胞无机械损伤,完全是极体的自然排放;同时细胞质及其中核重编程相关因子损失量小;而且高效、省时,程序简单,所得的卵胞质或许更适合于供体细胞核的重编程。剪取超排小鼠的卵巢,以注射器刺破有腔卵泡后获得卵母细胞和卵丘细胞复合体,进行体外成熟培养。成熟培养5 h后去除卵丘细胞,挑选生发泡破裂的细胞顺序移入含脱羰秋水仙碱(DC,0.4μg/mL,2 h)和DC(0.4μg/L) 放线菌酮(CHX,50μg/mL)的M16培养液中继续培养,直到第一极体排出。去核卵胞质与胎儿成纤维细胞用植物凝集素(PHA,200μg/mL)粘合后,转入电击槽;施加1个5 V/mm、3μs交流电脉冲和2个92 V/mm、70μs直流电脉冲进行电融合。3 h后,以SrCl2激活6h,于四孔培养皿中制作的“孔中孔”(well of well)体外培养重构胚。试验重复3次,共计698个卵母细胞,获得的重构胚融合率和激活率分别为84.8%和93.6%;胚胎2-细胞发育率为24.7%,4-细胞率为6.74%;2-细胞期克隆胚移植假孕受体后,没有获得怀孕受体。试验分别以“血清饥饿”胎儿成纤维细胞、新鲜细胞和冷冻保存细胞为供体作核移植,结果表明,冷冻保存细胞的融合率(69.3%)与其余两组(80.6%和84.8%)呈显著差异(P<0.05);激活率、2-细胞和4-细胞发育率,则三组间差异不显著(P>0.05)。本研究将化学去核与无透明带技术相结合,完全丢弃了传统核移植的显微操作及其繁琐程序,属手工克隆,它的成功将会大大简化核移植程序,同时提高了核移植的生产力,最终提高核移植总效率。     

运用病毒载体实现基因治疗

近年来，随着对基因领域的深入探索以及对基因疾病本质的了解，基因治疗应运而生，而基因治疗的疗效，很大程度上依赖于治疗基因在宿主体内发挥作用的时间以及安全性，病毒载体法是目前基因治疗使用较为广泛的方法，该方法可以介导治疗基因在宿主细胞中的稳定存在及长效表达，是基因治疗的一个重要手段。     

丝毛乌骨鸡胸肌和肝脏cDNA文库的构建与鉴定

摘要：了解肌肉组织和肝脏组织的基因类型，构建鸡肌肉组织和肝脏组织的功能基因表达谱在动物遗传育种中具有重要的意义。为比较基因组学的研究、功能基因组学的研究、QTLs定位等的动物分子育种做前期基础科研工作，研究以丝毛乌骨鸡(Gallus gallus )的胸肌和肝脏为实验材料，以Lambda ZAPⅡ为载体，构建了胸肌和肝脏的cDNA文库。同时，对这两个cDNA文库进行了噬菌体PCR鉴定和所提质粒的Eco RⅠ和XhoⅠ的双酶切鉴定。结果表明，胸肌和肝脏mRNA的OD260/OD280 分别为1.92和1.90。胸肌cDNA文库的滴度在3.6× 107 pfu/mL以上，重组率92%以上，插入片段平均大于1.5 kb。肝脏cDNA文库的滴度在3.4× 107 pfu/mL以上，重组率90%以上，插入片段平均大于1.4 kb。     

耕地资源空间集聚度评价及影响因素——以江苏省睢宁县为例

耕地空间集聚是农地整治目标之一,也是农业现代化的基本要求,现有研究大多是从景观格局视角用多指标对耕地空间集聚进行评价,为了探寻耕地空间集聚的影响因素,本文提出一种单指标评价法。首先综合考虑耕地图斑的位置、形状、面积,定义了耕地图斑的空间集聚度公式,并用程序代码求取每一图斑的集聚度大小;其次以不同图斑的集聚度为因变量,选择相关影响因素为自变量进行计量分析;最后以江苏省睢宁县为例做了实证分析。结果表明:当设定半径指数为2 000 m时,2013年睢宁县耕地空间集聚平均值是0.567 7,总体水平较高,有利于农业现代化生产;坡度、高程、人均GDP、人均耕地、与城市距离、路网密度、基本农田建设对耕地空间集聚水平都有显著影响,且坡度与基本农田建设对耕地集聚的作用弹性较大,而城市距离对空间集聚的作用弹性最小。论文提出的耕地空间集聚度评价方法可为基本农田划定及农地整治提供相关技术支撑。     

不同环境因子对海州香薷堆肥品质与物质转化研究

以海州香薷为堆肥原料,采用纤维素分解菌和effective microorganisms(EM菌)为接种菌剂,对不同的微生物组合、不同环境因子(温度、湿度)的联合堆肥进行了实验室阶段的研究。结果表明,在堆肥制作过程中,各处理含水率明显下降;全C呈明显的下降趋势,全N则呈明显的增加趋势,以纤维素分解菌和EM菌的混合菌剂对堆肥品质影响最为显著,使其C/N下降到17.9。而在室温、含水率为75%条件下,堆肥的品质最佳,其C/N值为13.7,ηC/N为60.8%,达到有机肥料一级腐熟标准。同时,整个堆肥过程中纤维素分解菌始终保持旺盛的活性,其菌群密度保持在2.79×10~5CFU/g干重左右。通过纤维素分解菌和EM菌的协同作用,能够快速高效地降解海州香薷残体。     

泥石流调查

泥石流常常危害人类的生命及损害财产,因此人们都希望对泥石流的发生进行预测预报。为此有必要先查清易发生泥石流的区域和具体场所,分析泥石流发生,发展的过程、机理和规律,掌握变化的因素;而泥石流调查是实现预测预报必不可少的工作内容。     

哈尔滨地区2004—2008年猪发病主要种类调查

<正>为归纳出哈尔滨地区猪疫病种类,了解猪传染病重要性排序,并为制定免疫程序提供可靠依据,本调查通过对哈尔滨地区近五年来的临床诊断病例进行数据统计。1材料与方法1.1材料对哈尔滨地区猪病门诊确诊的病例进行收集。将收集到的2004—2008年临床剖检资料筛选,去伪存真进行归纳。1.2方法对哈尔滨市192个乡镇的散养猪及规模养猪场     

强化专业合作社建设促进畜牧业大力发展——关天加快辽宁省畜牧业专业合作社发展的几点建议

为更好地推动畜牧专业合作社在辽宁乃至全国的发展,本刊特策划“强化专业合作社建设,促进畜牧业大力发展”专题,分别从合作社与其他经济形式的区别、国外合作社经验、合作社法解读等方面进行阐述,以宽甸县庆兴黄牛养殖专业合作社和大石桥市畜牧业专业合作社为典型作以介绍,同时,介绍辽宁省畜牧业专业合作社发展现状,为发展畜牧业专业合作社提供参考和帮助。     

中国人白细胞介素-12 (hIL-12)cDNA克隆及序列分析

根据已发表的IL-12两个亚基P35 cDNA序列（NM-000882）与P40 cDNA序列（NM-002187）设计2对引物。以LPS刺激的人脐血淋巴细胞为材料，采用RT-PCR技术从总RNA扩增hIL-12基因，包括完整的前体蛋白编码序列。所得到的序列与GenBank中发表的一致，但与CLMF和NKSF序列有所差异。P35同CLMF相比，244aa密码子GAC（Asp）→GAT（Asp）、247aa密码子ACG（Thr）→ATG（Met）；与NKSF比较，44aa密码子GTC（Val）→GTG（Val）。P40同NKSF比较239aa密码子AAC（Asn）→AAG（Lys），291aa密码子ACC（Thr）→ACG（Thr）；P40同CLMF相比较，氨基酸与核苷酸序列完全一致。通过与不同物种氨基酸及核苷酸序列比较分析，P40亚基与其它动物的同源性80％以上，P35亚基与其它动物同源性在70％。     

草海保护区功能分区与生态环境变化的关系研究

草海湿地是我国云贵高原岩溶湿地中的独特类型，地处金沙江上游，不仅起到调节下游水量平衡，以及调节区域气候的作用，也是高原特有鹤类——黑颈鹤的主要越冬地之一，其生态环境的变化具有重要的生态意义。通过对草海国家级自然保护区水土流失、湖盆淤积，水环境、黑颈鹤栖息生境等生态环境特征变化以及当地社区湿地资源利用状况的分析，探讨了湿地生态环境变化与现行保护区功能分区的关系，说明三级模式下的湿地生态环境管理激化了湿地资源利用与保护的矛盾，必须加强草海湿地生态结构和功能特征的研究，制定合理的保护区功能分区，切实有效地保护湿地生态环境。