鸭脂联素基因全长cDNA的克隆和原核表达的研究

本研究旨在通过克隆鸭脂联素(Adiponectin)基因序列并进行序列分析,揭示该基因的序列特征、组织特异性表达规律,并对其进行原核表达。采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法从鸭脂肪组织总RNA中扩增脂联素基因cDNA片段;半定量RT-PCR检测组织表达特异性;构建原核表达载体,建立原核表达体系。从鸭脂肪组织中得到3个脂联素基因cDNA片段,克隆测序后,拼接获得了鸭脂联素基因1374bp全长cDNA序列,其包含一个长度为738bp完整的开放阅读框,编码245个氨基酸;编码区与鹅、鸡脂联素基因序列的同源性分别为94.9%和86.0%,与人、小鼠、狗等物种脂联素基因的同源性在64.2%～67.0%之间;氨基酸序列比较可知,鸭与鹅、鸡的脂联素氨基酸的同源性分别达95.5%和84.0%,与人、小鼠、狗等哺乳动物的同源性在65%左右。半定量RT-PCR研究结果表明脂联素基因在所测组织中均表达,且高度表达于脂肪组织、肌胃、小肠、心和骨骼肌,中度表达于肺、腺胃、卵巢和脾组织中,而在肝、肾和间脑中低度表达。构建得到在其C端含有8个组氨酸的鸭脂联素融合蛋白表达载体pET41a-duck-adp,重组表达质粒转入BL21(DE3)大肠杆菌中表达,经IPTG诱导后并SDS-PAGE检测获得了30ku的鸭脂联素原核表达蛋白。脂联素基因在动物进化中具有一定的保守性,该基因在不同组织中表达水平不同,通过原核表达可获得鸭脂联素的重组蛋白。     

寒冷季节光照制度对育肥猪生长性能、肉品质及血清生化指标的影响

文章旨在评估寒冷季节延长光照时间对育肥猪生长性能、肉品质及血清生化指标的影响.试验将15周龄、平均体重为(54.26±0.17)kg的352头三元商品肥猪随机分为2组,每组176头,每组8个重复.整个试验期间(15～24?w),外界环境温度为-10℃～-5℃,对照组采用常规光照模式(光照12?h,黑暗12?h),处理组...     

冻融作用对石油污染土壤酶活性和水溶性碳的影响

通过现场采样调查及室内分析测试,研究了石油污染土壤经过10个冻融循环和恒温处理后,土壤中过氧化氢酶和脲酶的活性、土壤呼吸速率、水溶性有机碳及微生物量碳的变化特征.结果表明,冻融作用对中重度污染土壤中过氧化氢酶和脲酶的活性有促进作用,过氧化氢酶活性提高6.64%,脲酶活性增加41.11%,但对土壤微生物量碳影响不大;水溶性有机碳受冻融作用影响较大,其比恒温处理提高67.04 mg·kg-1,且土壤中总石油烃含量越高,水溶性有机碳变化越大;中重度石油污染土壤经过冻融处理后,其石油烃含量较之恒温处理减少明显,两种不同处理的差值达290.268 mg·kg-1,而对于高度石油污染土壤来说,冻融作用则可能不利于石油烃的降解.     

基于AMSAA模型的变环境车辆可靠性评估方法研究

车辆可靠性作为其质量水平的重要体现,正不断受到重视.以往车辆可靠性研究手段侧重于定性分析,且使用较为繁琐.为满足定量分析需求,选取了AMSAA模型进行车辆可靠性评估.由于车辆试验过程存在变环境、多路况的特点,数据不适合直接使用.为了解决该问题,采用环境折合系数来实现不同环境下数据的转化与统一.在求解折合系数时,以粒子群...     

鳡肌肉生长抑制素(MSTN)基因的克隆及其组织特异性表达分析

以鳡肌肉总RNA为模板,采用RTPCR和RACE的方法,获得了鳡肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的3个重叠片段,测序后拼接得到2 177 bp全长cDNA序列,其包含了5′端非翻译区的89个核苷酸和3′端非翻译区1 052个核苷酸以及1 125个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码375个氨基酸,其中前22个氨基酸为鳡MSTN的信号肽。鳡MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和在C端生物活性区含9个保守的半胱氨酸残基。核苷酸和氨基酸同源性分析发现鳡MSTN与厚颌鲂、草鱼和鲤等鲤形目鱼类的同源性较高,与鲈形目的同源性较低,与哺乳动物和鸟类的同源性最低;系统发育分析表明鳡MSTN与厚颌鲂亲缘关系最近。 半定量RT-PCR分析表明,该基因在肌肉和脑中表达量最高,在心肌中也有较高表达,在肝脏、肠、鳃和肾等组织中未见明显表达,此结果表明鳡MSTN基因除对肌肉生长发育有调控作用以外,可能还有其他功能。     

日粮添加山楂渣对育肥猪生产性能、免疫性能和消化酶活性的影响

文章旨在研究日粮添加山楂渣对育肥猪生产性能、免疫性能和消化酶活性的影响。试验将360只健康、体重相近的112日龄三元育肥猪随机分为5组,每组6个重复,每个重复12头猪。空白组饲喂基础日粮,4个试验组在基础日粮中分别添加2.50%、5.00%、7.50%和10.00%的山楂渣。预饲期5天,正试期63d。结果表明：与空白组相比,育肥猪日粮中添加7.50%的山楂渣可显著提高终末重（FBW）、平均日增重（ADG）,显著降低料重比（F/G）(P <0.05);与空白组相比,育肥猪日粮中添加7.50%、10.00%的山楂渣,血清免疫球蛋白A(IgA)、IgM、白介素（IL）-2水平显著提高（P <0.05）;与空白组相比,育肥猪日粮中添加7.50%、10.00%的山楂渣可显著提升消化道乳糖酶、蔗糖酶、麦芽糖酶、蛋白酶、脂肪酶的活性（P <0.05）。综上所述,育肥猪日粮中添加7.50%的山楂渣可显著改善生产性能、免疫性能和消化酶活性。     

路面平整度测定方法

就最常用的测试平整度的方法,3 m直尺法和连续式平整度仪法进行了详细的阐述。     

施氨水平对不同小麦品种氮代谢相关指标及产量的影响

在大田条件下,以矮抗58和郑麦366为材料,研究了施氮水平对小麦叶片和子粒谷氨酰胺合成酶(GS)活性、游离氨基酸含量及产量的影响.结果表明,小麦叶片GS活性、游离氨基酸含量在开花后随着生育期的推进均呈先上升后下降趋势,均在花后14 d达到高峰,且倒1叶＞倒2叶＞倒3叶；子粒的GS活性趋势和叶片一致,但子粒的游离氨基酸含...     

褐煤中腐植酸的提取及其含氧官能团的分析

采用锡林浩特褐煤为原料,利用活化法提取腐植酸,运用傅立叶红外光谱(FTIR)和钡离子交换法测定原煤和腐植酸含氧官能团的含量,探讨了褐煤、腐植酸与提取腐植酸后褐煤(残余煤)的基本结构单元和含氧官能团含量的变化。     

克隆动物安全评估的研究进展

自克隆羊"dolly"出生以来,体细胞核移植(SCNT)在动物生产中有了广泛应用.随着克隆动物源产品进入食品消费领域,克隆动物健康评估及其相关食品安全评价也成了人们关注的焦点. 1 克隆动物及其后代的健康问题 在胚胎发育期间,一系列复杂的分子过程与全能细胞的基因表达有关.对于克隆技术而言,分化的2倍体必须要恢复到全能阶段才能适应胚胎发育期间的基因表达,这就造成核模板的不同,从而使新形成的受精卵存在重组错误.