应用套式RT—PCR检测广西临床病料猪流感病毒

套式RT-PCR技术是在常规RT-PCR的基础上设计1对内套引物,对常规RT-PCR的产物再进行一次PCR扩增,该技术比常规RT-PCR技术的检测敏感度更高,更适于检测病原RNA含量极其少的临床病料。通过应用套式RT-PCR方法对来自广西7个市不同猪场的疑似猪流感的临床病料进行猪流感病毒检测,结果发现,被检的7个市均检出猪流感病毒,72份病料中31份为阳性,阳性率为43．06％,可见广西有呼吸道症状的病猪中有较高猪流感病毒感染率,必须重视和加强广西猪流感的监测与防控工作。     

广西猪伪狂犬病的流行监测及防控工作重点

为调查猪伪狂犬病（PR）目前在广西的流行情况,于2006～2008年对广西13个市122个不同规模猪场进行流行病学调查,并对163份病料及61份血清进行检测。结果显示,163份病料经PCR检测出阳性病料6份,阳性率为3．7％;对6株广西PRV gE胞外基因进行克隆测序比较及遗传进化分析发现,广西PRV毒株变异不大,6株广西PRVgE基因与国内外其他毒株之间核苷酸序列同源性均很高,介于96．4％～100．0％之间,氨基酸同源性为93．6％～100．0％,亲缘关系较为密切,应为同一毒株遗传进化而来;61份血清经gE—ELISA检测出阳性血清7份,阳性率11．5％,表明部分猪场存在PRV隐眭感染。调查结果肯定了广西在PR防控工作中取得的成绩,提出做好免疫、加强监测、淘汰隐性感染猪、提高猪体免疫力、净化种猪群是今后PR防控工作的重点。     

马尾藻多糖分离提取及抗氧化活性初步观察

以马尾藻为原料,分别采用水提醇沉、超声波破壁、微波处理、酶法提取4种方法分离提取马尾藻多糖,比较不同提取方法对多糖提取率的影响.通过皮下注射地塞米松或配合马尾藻多糖腹腔注射处理小鼠后,测定胸腺指数、脾脏指数,以及血清中IL-6、TNF-α和胸腺组织匀浆中GSH含量,观察马尾藻多糖对小鼠细胞因子及体内抗氧化能力的影响;通过清除羟自由基、超氧阴离子和抑制红细胞溶血试验观察马尾藻多糖体外抗氧化活性.结果表明,在4种提取方法中,酶法提取率最高.马尾藻多糖处理小鼠后,胸腺中GSH和血清中IL-6、TNF-α的含量随多糖浓度的增加而升高;马尾藻多糖清除羟自由基和对抗过氧化氢溶血的能力随着浓度的增加而升高,且对超氧阴离子具有一定的清除作用.马尾藻多糖具有提高机体细胞因子水平和抗氧化作用,具有开发利用价值.     

猪流行性腹泻病毒野毒株及弱毒疫苗株RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断PEDV的毒株类型;通过退火温度等反应条件优化,建立了区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鉴别检测方法。结果显示:所建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株扩增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株扩增出185 bp目的片段;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、A群猪轮状病毒(PRo VA)、猪嵴病毒(PKV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到病毒滴度为1.3×10~3TCID_(50)/mL。利用该方法对采集自广西部分地区93份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV野毒株阳性率为61.29%(57/93),弱毒株阳性率为5.38%(5/93)。结果表明:该RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,能快速、准确地区分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,为猪流行性腹泻的快速诊断及病原分子鉴别检测研究提供了可供借鉴的技术手段。     

复合益生菌发酵饲料对“2+4”模式肉鸽生产性能的影响

旨在探讨"2+4"饲养模式下,复合益生菌发酵饲料对肉鸽生产性能的影响。试验选取同一批孵化的360只乳鸽,体重、年龄相近的90对亲鸽,分成复合益生菌发酵饲料组(Ⅰ组)和普通饲料组(Ⅱ组)开展对比试验。结果表明,Ⅰ组7日龄、 14日龄、 21日龄、 28日龄乳鸽平均体重比Ⅱ组分别提高2.6%(P>0.05)、 6.5%(P<0.01)、 5.8%(P<0.05)、 5.8%(P<0.05);Ⅰ组料重比3.49:1低于Ⅱ组3.67:1 (P<0.05);Ⅰ组乳鸽硬嗉病患病率1.67%,低于Ⅱ组患病率5.56%(P<0.05);哺育期21d,Ⅰ组雌性亲鸽平均体重减轻指数2.35%,低于Ⅱ组的5.51%(P<0.05);哺育期Ⅰ组雌性亲鸽产蛋时间较Ⅱ组平均提前1.6d (P<0.05)。综上所述,复合益生菌发酵饲料能提高乳鸽和亲鸽的生产性能,降低乳鸽硬嗉病患病率,缩短养殖周期,提高肉鸽生产效益。     

中药对猪场常见病原菌的药敏特性及联合抑菌活性评价

以常见的50味中药提取液对大肠杆菌、巴氏杆菌、链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和放线杆菌等6种猪场常见病原菌进行药敏试验,并在测定单味中药对上述病原菌最小抑菌浓度(MIC)的基础上,采用微量棋盘稀释法进行中药两两联用抑菌活性试验,通过计算抑菌浓度指数(FICI)判断药物互作效应。药敏试验结果表明,乌梅、大黄、黄芩、金银花、连翘、野菊花和五倍子对6种猪场常见病原菌均表现为高度敏感。药物MIC测定结果显示,以乌梅、大黄、桂枝、金银花、连翘、野菊花和五倍子等7味中药对6种猪场常见病原菌的MIC较低,故选取这7味中药进行两两联合用药试验。在中药两两联用抑菌活性试验中,乌梅+桂枝、大黄+桂枝、桂枝+连翘、桂枝+野菊花、桂枝+五倍子呈拮抗效应;乌梅+五倍子、大黄+连翘、大黄+野菊花、大黄+五倍子、金银花+连翘、金银花+野菊花、连翘+野菊花呈协同效应;乌梅+大黄、乌梅+金银花、乌梅+连翘、乌梅+野菊花、大黄+金银花、桂枝+金银花、金银花+五倍子、连翘+五倍子、野菊花+五倍子呈相加效应。     

三种对虾病毒多重实时荧光PCR检测方法的建立

根据基因库中白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）和桃拉综合征病毒（TSV）的基因序列,设计了WSSV 、IHHNV和TSV的三对特异性引物和三条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测WSSV 、IHHNV和TSV的三重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对WSSV 、IHHNV和TSV的检测敏感性分别达到20000、20和20000个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对WSSV 、IHHNV和TSV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这三个病毒。对保存的45份经常规PCR检测仅为WSSV 、IHHNV和TSV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中2份为WSSV和IHHNV混合感染。本研究建立的三重实时荧光PCR方法用于WSSV、IHHNV和TSV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。     

鸡细小病毒半巢式PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速、特异、灵敏的检测鸡细小病毒（chicken parvovirus,ChPV）的方法,根据ChPV的保守基因NS1设计了3条特异性引物,建立并优化了能快速检测ChPV的半巢式PCR方法,对其进行特异性和敏感性试验,并用所建立的方法对48份临床样品进行了检测。特异性和敏感性试验结果显示,建立的半巢式PCR只对ChPV敏感,扩增产物为186 bp的特异性条带;其最低能检测到5.62 fg/μL的ChPV DNA;而对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒不敏感。临床检测结果显示,同时对48份临床样品进行检测,检出率为16.67%（8/48）,提示广西区内鸡群存在ChPV感染。本研究建立的ChPV半巢式PCR方法适用于ChPV的临床检测。     

凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达

[目的]明确凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA(LvcrustinA)在毕赤酵母菌中的表达情况,为研发出一种基于重组蛋白crustinA的新型水产药物打下基础.[方法]采用全基因合成法(PAS)合成LvcrustinA基因,然后将LvcrustinA基因克隆至真核表达载体pYE-GAPα,所得重组质粒转化感受态细菌TOP10,以质粒提取试验盒提取的重组质粒pYE-GAPα-LvcrustinA电转至毕赤酵母菌GS115;以SDS-PAGE电泳检测和Western blotting鉴定分析融合蛋白LvcrustinA的表达情况,并通过保护试验验证融合蛋白LvcrustinA对副溶血弧菌的抵抗作用.[结果]以构建的重组质粒pYE-GAPα-LvcrustinA电转毕赤酵母菌GS115,获得的重组菌株在30℃下摇床(220 r/min)培养24 h即可获得融合蛋白LvcrustinA,且随培养时间的延长,其表达量逐渐增多.Western blotting鉴定结果显示,纯化的融合蛋白LvcrustinA能被抗His抗体识别.保护试验结果表明,融合蛋白LvcrustinA对副溶血弧菌具有良好的抵抗力.[结论]利用表达质粒pYE-GAPα和酵母菌GS115可成功重组表达获得LvcrustinA,且获得的LvcrustinA具有促进凡纳滨对虾抵抗副溶血弧菌感染的作用.     

桂科育成猪血常规指标的测定分析

[目的]检测桂科育成猪的血常规指标,明确不同功能细胞(红细胞、白细胞和血小板)的数量变化及形态分布情况,为桂科猪的免疫评估与抗病性能研究提供基础数据.[方法]于49日龄起每周对44头桂科育成猪(公母各半)采血1次,连续采样7周,测定其血常规指标,并与长白猪和恩施黑猪的血常规指标进行比较分析.[结果]在桂科育成猪不同日龄的红细胞类检测指标中,红细胞计数(RBC)和血红蛋白含量(HGB)均在70日龄达最低值(6.85× l012/L和97.1 g/L),显著低于49、56、63、84和91日龄时的对应值(P<0.05,下同);平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均血红蛋白浓度(MCHC)的变化规律基本一致,均在70日龄达最低值(15.11 pg和275.70 g/L)、91日龄达最高值(16.40 pg和314.30 g/L);红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)和红细胞体积分布宽度(RDW)的变化相对较稳定,不同日龄间均无显著差异(P>0.05,下同).在白细胞类检测指标中,白细胞计数(WBC)于63日龄达最低值(13.71×109/L)、84日龄达最高值(17.52×109/L),二者差异显著;中性粒细胞计数(NEUT)在70日龄时达最低值(3.61×109/L),显著低于49和56日龄的对应值.淋巴细胞计数(LYMPH)的变化相对较稳定,受日龄增长的影响不显著.在血小板类检测指标中,血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)及血小板平均分布宽度(PDW)在不同日龄的变化相对较稳定,受日龄增长的影响不显著.与35日龄长白猪和5月龄以上恩施黑猪相比,桂科育成猪除HCT、平均血小板体积(MPV)、PCT和PDW等少数指标表现异常外,其他大部分血常规指标介于长白猪与恩施黑猪血常规指标范围内.[结论]桂科育成猪在血常规指标方面有一定的独特性,发育至49~91日龄时已具备较稳定的免疫系统.