RNAi抑制猪主要病毒感染的研究进展

RNA干扰(RNAi)是外源性或内源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制。RNAi技术具有高效性和特异性,具有广阔的前景。将RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究取得了显著的基因沉默效果,为病毒性疾病的预防和治疗开辟了一条新途径。     

PRV SA株gB基因和EGFP基因在BHK细胞中的融合表达研究

为了研究gB蛋白在细胞内的作用位点,试验以猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)SA株为模板,设计特异性引物,扩增gB基因保守片段;以pEGFP-N1质粒为模板扩增EGFP基因;以gB基因与EGFP基因胶回收产物为模板,用gB基因上游引物及EGFP基因下游引物通过重叠延伸PCR(SOE PCR)技术获得gB/EGFP融合基因;构建pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒,转染乳仓鼠肾细胞(BHK细胞),采用Western-blot技术及荧光显微镜检测荧光蛋白在细胞内的表达情况。结果表明:试验成功扩增到300 bp的gB基因、760 bp的EGFP基因及1 060 bp的gB/EGFP融合基因;成功构建出pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒并转染BHK细胞;Western-blot技术及荧光显微镜检测显示,融合蛋白在BHK细胞中成功表达。说明通过荧光蛋白研究目的蛋白的作用位点是可行的。     

多毛番茄‘LA2329’对B 型烟粉虱抗性的QTL分析

 多毛番茄‘LA2329’对烟粉虱具有很高的抗性。利用‘LA2329’与普通番茄‘9706’得到 的BC1 群体构建了一张包含180 个分子标记,总长度为1 166.6 cM 的番茄分子连锁图谱。采用离体鉴定 的方法对BC1 群体进行抗烟粉虱鉴定,鉴定指标为叶片烟粉虱成虫附着量、叶片烟粉虱卵量,叶片正、 背面Ⅵ型腺毛密度。共定位到33 个与4 个指标相关的QTL。其中叶片烟粉虱成虫附着量和卵量显著正相 关,二者定位到8 个相同的QTL,其中2 个主效QTL 定位在2 号染色体,分别介于标记InDel_FT45 ~ SSR57 之间和SSR57 ~ InDel_FT49 之间,解释的表型变异率分别为33.2%和39.8%。叶片背面Ⅵ型腺毛密度相关 的QTL 在6 号染色体具有集群分布的现象,其中4 个显著性QTL 定位在C2_At3g11210 ~ C2_At1g24360 标记之间,解释的总变异率为56%。叶片正面Ⅵ型腺毛密度相关的4 个QTL 和叶片烟粉虱成虫附着量及 卵量相关的4 个QTL 定位在2 号和12 号染色体的相同位点,增效基因来源相反。以上结果说明叶片烟粉 虱成虫附着量和卵量指标具有相同的抗性鉴定效果,可以认为是同一个鉴定指标;此外,番茄中Ⅵ型腺 毛密度不是影响叶片烟粉虱成虫附着量和卵量的性状。     

仔猪腹泻性大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,简称ETEC)引起的新生仔猪腹泻一直是困扰养猪业发展的重要疾病之一。该病的发病率、死亡率均较高,是影响规模化猪场哺乳仔猪成活率的主要病因,给养猪业造成了极大的经济损失。对于由ETEC引起的腹泻,国内外长期采取药物治疗方法,但药物治疗费用昂贵,更因抗药菌株日趋增多,导致药物疗效不佳甚至无效,而免疫预防是控制这类疾病的最佳选择。粘附素和肠毒素是大肠杆菌的两个重要毒力因子,是导致腹泻的主要原因。目前国内外对粘附素和肠毒素基因工程疫苗进行了广泛的研究,取得了很好的成…     

禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为467 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合REV快速检测的套式PCR方法。采用该方法对REV毒株进行了检测,结果显示能扩增到314 bp的条带;禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽网状内皮组织增生病的临床诊断和分子流行病学调查。     

昆明小鼠与BALB/c小鼠MHC-Ⅱ分子恒定链的序列差异分析及多克隆抗体的制备

分离昆明小鼠与BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞,经Con-A活化,提取细胞总RNA,RT-PCR获得小鼠Ii分子（P31、P41）基因,DNAStar软件分析序列。将BALB/c小鼠P31/P41分子插入到pGEX-KG多克隆位点构建原核表达载体,IPTG诱导并经GST标签蛋白纯化柱纯化表达蛋白,将GST-P31/P41蛋白分别与弗氏佐剂混合乳化后免疫家兔,采集血清。测序分析显示,两品系小鼠P31、P41均分别为648、840bp,编码215个、279个氨基酸;序列比对结果表明,昆明小鼠、BALB/c小鼠P31、P41分子与GenBank已登录核苷酸序列与/或氨基酸序列均存在多个位点差异,且所克隆的两品系小鼠P31分子之间核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸序列同源性为98.6%;两种小鼠P41分子之间核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99.3%;通过与人、鸡对应Ii分子进行比较,发现与人同源性较高,核苷酸序列同源性在79.0%以上,氨基酸序列同源性在73.0%以上,而与鸡同源性相对较低,核苷酸序列同源性在55.0%以上,氨基酸序列同源性在41%以上。IPTG诱导并纯化后获得GST-P31/P41蛋白,免疫家兔后所采集的血清经ELISA、Western-blotting证实获得了兔抗P31/P41多克隆抗体。结果表示,昆明小鼠与BALB/c小鼠Ii分子间存在差异位点,并成功制备了兔抗Ii分子多克隆抗体,为开展靶向性表位疫苗研究奠定基础。     

辣椒抗黄瓜花叶病毒病研究进展

黄瓜花叶病毒（CMV）病是影响辣椒生产的主要病害,是辣椒抗病育种的主攻目标。分子标记辅助选择育种可有效地克服传统育种的缺陷,加速育种进程。分子标记的开发依赖于基础研究,辣椒基因组数据的公布为辣椒抗CMV研究提供了一个新的契机。所以本研究就黄瓜花叶病毒的危害、辣椒抗源材料的筛选和抗性鉴定、抗性遗传规律分析及抗性基因定位等方面进行了总结归纳,为进一步辣椒抗CMV研究和分子标记辅助育种提供一定的理论参考。     

江苏省辣椒地方种质资源的收集与利用

辣椒在江苏已有近300年的种植历史,演化出长灯笼椒、羊角椒等不同类型的地方种质资源。先后3次的全国农作物种质资源征集和收集,在江苏省收集辣椒地方种质资源87份,其中南京早椒得到了高效利用。20世纪70年代,江苏省农业科学院等单位以南京早椒作为母本培育出我国第1个辣椒杂交品种早丰1号;在此之后,多家辣椒育种单位对南京早椒进行创新改良,培育出苏椒、江蔬、赣丰、昌蔬等多个品牌的辣椒杂交品种,推进了我国辣椒杂交品种的更新换代。     

辣椒新品种苏椒1614优质高效栽培技术

辣椒是江苏省重要的蔬菜作物之一。苏椒1614优质高效栽培,集成了穴盘育苗、膜下滴灌、植株调整、病虫害综合防治等技术,表现出早熟、大果、优质、高产等特点,深受种植户和消费市场欢迎。