基于VIGS技术干扰病毒RNA防控烟草黄瓜花叶病毒病

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)引起的花叶病是烟草上的重要病害。本试验通过病毒诱导基因沉默技术(virus induced gene silencing, VIGS)构建靶向沉默CMV-1a、CMV-2a、CMV-MP和CMV-CP的VIGS载体,测定基因沉默后CMV相对表达量、CMV病毒浓度和TRV相对表达量,并对VIGS载体对CMV的防治效果进行评价。结果表明,试验建立的VIGS载体能够有效导入烟株;沉默CMV-2a的处理CMV相对表达量最低,基因沉默效率最高,为46.25%;接种病毒30 d后CMV-2a处理的病毒浓度最低,仅为对照的72.8%,TRV载体的相对表达量显著高于其他处理;沉默CMV-2a的处理发病时间推迟,病情指数最低,防治效果最好。本研究建立的CMV-2a VIGS体系能够有效沉默外源侵入的CMV基因表达,抑制CMV在烟株内的传播,为防治烟草黄瓜花叶病毒病提供了新的思路与方法。     

豫烟8号的选育及其特征特性

豫烟8号是在病毒病严重侵染的NC89烟田中筛选变异单株,经系统选育而成的烤烟新品种。该品种农艺性状稳定,田间生长整齐一致,中抗黑胫病,中感黄瓜花叶病和赤星病,感烟草花叶病;烤后原烟颜色多橘黄、组织疏松、成熟度好、厚薄适中;烟叶内在化学成份较协调,感官质量略好于NC89,烟叶质量符合中式卷烟需要;与NC89比较,产量提高5.35%,产值增加5.66%。豫烟8号是一个品质、抗性、产量、适应性等方面均能兼顾的优良新品种。     

烟草类萜生物合成途径中关键酶基因的克隆与表达调控

萜类化合物是烟草重要的香气前体物质,它们的降解产物是烟草最重要的香气来源之一.本研究概述了类萜代谢途径及其相关酶类的克隆与表达调控的研究进展,并对利用类萜代谢工程调控该代谢途径来提高烟草香气品质的应用前景进行了展望.     

TMV侵染烟草基因差异表达的cDNA-AFLP分析

以烤烟品种龙江925 [高抗烟草普通花叶病(TMV)]接种TMV的叶片为材料,选用240对引物组合的扩增, 获得约 9 500个转录基因片段, 经过克隆测序最终获得了12个诱导表达片段, 它们与核酸代谢、蛋白质合成与修饰、能量代谢、胁迫响应、细胞内运输、糖代谢等相关, 并利用荧光定量PCR分析一个诱导表达片段TIF2在0~72 h之间5个时间点(0、12、24、48和72 h)的基因差异表达, 证实了所获得的基因序列为真实诱导的表达序列。对此序列进行RACE, 最终获得全长cDNA序列, 全序列857 bp, 预测的编码区在101~613 bp之间, 共编码170个氨基酸。经Blastn、Blastp比对分析, 在烟草中没有获得其同源序列, 确定该基因是在烟草中发现的与抗TMV相关的新基因。     

不同耐氮肥烤烟品种质外体NH4+浓度差异和有关生理指标分析

 【目的】研究不同耐氮肥烤烟品种叶片质外体NH4+浓度差异与耐氮肥性关系,为筛选对氮素适应范围广的烤烟品种提供理论依据。【方法】以耐氮肥的烟草品种中烟90、中耐氮肥的K326和对氮肥敏感的NC89为试验材料,用盆栽法研究它们之间的质外体NH4+浓度差异。【结果】生育后期3个烤烟品种叶片质外体的NH4+浓度均呈现逐步升高的趋势,中烟90的质外体NH4+浓度最大,NC89最小.谷氨酰胺合成酶 (GS)活性和总氮含量下降明显,质外体pH值急剧减小,谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)活性缓慢上升,质外体pH始终低于叶片pH;质外体NH4+浓度与GS活性和总氮都呈显著负相关,与GDH活性呈显著正相关。【结论】 烤烟品种耐肥性与其生育后期质外体NH4+浓度,GS活性和GDH活性有关,耐肥性强的烤烟品种其质外体NH4+浓度高,GS活性低,GDH活性高,NH4+挥发多。     

烟叶钾含量与烟株农艺性状和烟碱含量的相关分析

中国北方烟区土壤的普遍缺钾是影响中国烟草生产的一个重要原因。这种缺钾的土壤特性在短时间内很难得到较大的改善。利用不同基因型的烟草品种对钾素利用效率的不同选育钾高效品种是解决这一问题的一个有效途径。寻找与钾素利用效率相关的农艺性状，从农艺性状的表现选育钾素高利用效率的烟草品种能够大大加快选育的进程。此项研究对7个亲本材料的烟叶运用盐酸浸提火焰光度法测定了钾含量。对19个基因型材料调查株高、茎围、节距、单株叶数、最大叶的叶长和叶宽等农艺性状，取各基因型平均值进行与烟叶钾含量性状的相关分析。发现除了最大叶宽与烟叶钾含量呈负相关外，株高、茎围、节距、叶数和最大叶长与烟叶钾含量均呈正相关关系。其中株高、茎围与烟叶钾含量之间的相关性达到了显著，最大叶长与烟叶钾含量的相关性达到了极显著水平。以C731为材料，运用盐酸提取紫外分光光度法测定烟碱含量，发现中、上部叶随着叶龄的增大，烟碱含量逐渐增加，在叶龄的第75 d，烟碱含量达到最大值，随后呈现减少趋势；而烟叶钾含量随着叶龄的增大在不断降低。绝对钾含量由于受到干物质积累的影响，变化略有不同，但是总体上仍然是减少的。对于下部叶，烟碱含量在叶龄的第60 d增加到最大值，随后呈现减小趋势，烟叶钾含量也随着叶龄的增大在不断地减少。上、中、下三个部位的烟碱与烟叶钾含量均呈负相关关系。其中，中部叶烟碱与相对钾含量（%）和绝对钾含量（g）显著相关，并且与相对钾含量的相关程度也很高（r=-0.7126）。这说明在烟叶的全生育期内，烟叶钾含量增加时，烟碱含量是减少的。因此，提高烟叶钾含量有助于降低烟碱进而改善烟叶品质，尤其对于中、上部叶来说是很有效的。     

广东南雄烟区主要气候因素与烤烟品质特点分析

分析广东省南雄烟区适宜种植烤烟的基本条件、主要气候因素及所产烟叶的品质特点。结果表明,该烟区具有无霜期长、≥10℃积温高、日均温≥20℃持续天数多及0~60 cm土壤含氯量较低等特点,具备生产优质烟叶的基本条件;南雄烟区大田前期气温较低、光照时数短,旺长和成熟期气温较高、光照时数较长,可能是南雄浓香型烟叶风格特色形成的气候因素;南雄烟区烟叶外观品质佳,化学成分含量较适宜,含钾量高,组成比例协调,浓香型风格突出,配伍性强,感官评吸质量较好。     

加速烟叶发酵的技术方法

烟叶发酵是改善烟叶品质的1种初加工方法,也是卷烟加工的1个重要环节。从改变环境温湿度、辐照、加速氧化、外加微生物和生物酶法等方面综述了烟叶发酵技术,并提出了烟叶发酵技术研究的新方向。     

昼夜温差和光照强度对烟草西柏三烯二醇的合成及CYC-1、CYP71 D16基因表达的影响

为阐明光照和温度对烟草西柏三烯二醇合成的调控机制,以烟草突变品系8306及其原始株12451为材料,采用气相色谱-质谱联用技术（ GC-MS）和实时荧光定量PCR技术,研究了不同昼夜温差和不同光照强度条件下烟草西柏三烯二醇的合成差异以及烟草CYC-1和CYP71D16基因的表达差异。结果表明,昼夜温差15℃条件下西柏三烯二醇合成量以及CYC-1和CYP71D16基因表达量明显高于昼夜温差0℃处理,说明较大的昼夜温差促进CYC-1和CYP71D16基因上调表达,从而使西柏三烯二醇得到充分的积累;光照强度100000 lx条件下西柏三烯二醇合成量以及CYC-1和CYP71D16基因表达量明显高于光照强度40000 lx处理,说明光照不足抑制了CYC-1和CYP71D16的表达,较高的光照强度有利于西柏三烯二醇的合成与积累。     

烟草黄酮类物质及其与品质的关系

黄酮类化合物是次生代谢过程中的重要产物之一,不仅对烟草的生长发育起重要的作用,而且黄酮类化合物中的芸香苷也是衡量烟草品质的一个重要因素。黄酮类化合物在次生代谢过程中的合成和积累受到一些关键合成酶和转运蛋白的调控,利用生物合成途径和基因工程技术对控制这些酶和蛋白的基因进行克隆和修饰,促进这些基因的表达,可以获得更多的目标产物。主要介绍黄酮类化合物的次生代谢途径,及利用基因工程技术对调控次生代谢途径的一些重要的酶和相关蛋白的基因修饰的研究概况。