ADD1基因多态性与乌金猪肌内脂肪含量的关系

 利用PCR-单链构型多态性（PCR SSCP）技术检测75头乌金猪和41头长白猪脂肪细胞定向和分化因子1（ADD1）基因第2外显子区的遗传变异,并用最小二乘法模型分析ADD1 基因对乌金猪和长白猪肌内脂肪含量的遗传效应。结果表明：在所检测的样本中均在乌金猪和长白猪ADD1基因的第2外显子上发现多态性,有2个等位基因（A和B）,2种基因型（AA和AB）,缺少BB基因型。AA和AB基因型在乌金猪中的频率分别为0.240和0.760,在长白猪中的频率分别为0.634及0.366。两种猪的优势等位基因均为A,其基因频率在乌金猪和长白猪分别为0.620和0.820。通过对两种猪不同基因型与肌内脂肪含量的相关分析,发现ADD1基因多态性对乌金猪和长白猪肌内脂肪含量的影响显著,且AB>AA (P<0.05),可通过提高AB基因型的频率来增加肌内脂肪含量,达到改善猪肉品质的目的。     

绿色荧光蛋白基因原核表达质粒pET32a-AcGFP1的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a AcGFP1,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达,本研究以pIRES AcGFP1质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因,通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a（+）构成重组子,经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达绿色荧光蛋白,经15% SDS PAGE鉴定,结果显示：重组质粒pET32a AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致,表明本实验已成功构建了含有绿色荧光蛋白基因AcGFP1的原核表达质粒。此外,pET32a AcGFP1转化Rosetta（DE3）,经不同浓度的IPTG诱导,SDS PAGE检测均获得高效表达,为今后构建pET32a(+) TAT AcGFP1融合表达载体以及深入研究TAT的细胞膜穿透作用的机制奠定基础。     

版纳微型猪近交系B4GALNT2基因真核表达载体构建及亚细胞定位分析

【目的】研究异种器官移植免疫排斥相关基因B4GALNT2的亚细胞定位情况。【方法】以版纳微型猪近交系(BMI)为试验对象,通过RT-PCR方法获得B4GALNT2基因cDNA序列,运用分子克隆技术构建B4GALNT2和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,将其转染猪肾上皮细胞PK15进行瞬时表达,同时用Mito Tracker和Hoechst33342荧光染料分别对线粒体和细胞核染色,通过EGFP示踪检测B4GALNT2在PK15细胞中的表达和定位。【结果】成功构建了BMI B4GALNT2基因的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,转染PK15细胞后主要在细胞质中检测到绿色荧光蛋白的表达,试验结果与PSORTⅡserver网站的预测一致。【结论】B4GALNT2蛋白主要定位于细胞质,揭示该蛋白主要在细胞质中发挥其功能作用。     

五种蜂蜜抗氧化性的测定

以野坝子蜜、油菜蜜、苕子蜜、野藿香蜜、茴香蜜等5种单花种蜜为研究对象,测定其总酚含量、还原力以及对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH自由基)、超氧阴离子自由基的体外清除能力。结果显示,5种蜂蜜的总酚含量和还原力有差异。总酚含量范围从143.962±14.600μg/g到376.376±13.180μg/g;0.1g/mL蜂蜜样品浓度的还原力范围从0.209±0.002到0.365±0.031。5种蜂蜜均对自由基具有清除作用,清除率随蜂蜜样品浓度增大而提高。蜂蜜清除自由基的能力与总酚含量、还原力呈现正相关。     

槟榔江水牛胃型LYZ C基因分离鉴定及功能生物信息学分析

【目的】溶菌酶是一种由动物产生的抗微生物酶,构成动物体先天免疫系统的一部分,在反刍动物的皱胃中还具有消化功能。迄今,普通牛溶菌酶C基因家族的分子遗传特征已被深入解析,但有关水牛溶菌酶C的研究报道较少。【方法】采用PCR产物直接测序技术,对槟榔江水牛胃型溶菌酶C基因编码区进行了分段扩增测序、序列组装和开放阅读框的确定,并结合已发表的其他牛科物种同源序列进行了生物信息学分析。【结果】序列分析表明:水牛胃型溶菌酶C基因编码区长444 bp,编码1个由147个氨基酸残基组成的多肽,包含1个N端信号肽和1段由129个氨基酸组成的成熟肽。水牛胃型溶菌酶C成熟肽分子量为14.41 ku,等电点为6.32,含有1个alpha-lactalbumin/lysozyme C保守结构域(19~145AA),不含有跨膜结构域,为亲水蛋白,在胞外发挥生物功能;在三维结构上与普通牛的溶菌酶模板(2z2f.1.A)有99.22%的一致性;在基于氨基酸序列构建的系统树上,水牛与普通牛、瘤牛、野牦牛和野牛聚在一起,且有较高的支持率(88%)。【结论】槟榔江水牛与其他牛科物种的胃型溶菌酶具有相似的功能。