6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S rRNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。     

用RT—PCR方法检测猪瘟与猪蓝耳病混合感染

福建省某规模化猪场暴发一种以保育猪精神沉郁、体温升高、腹泻、消瘦等为主要特征的传染性疾病。利用RT—PCR和PCR分别对采集的病料进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒检测,结果猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒为阳性,其他病毒均为阴性。对病料进行细菌分离鉴定,结果为阴性。根据诊断结果紧急接种疫苗,提高疫病综合防控等措施,疫情最终得到有效控制。     

变异型PRRSV-FJ09A毒株ORF5和NSP2基因的遗传变异分析及致病性

采用RT-PCR方法及动物回归试验,对PRRSV-FJ09A毒株的ORF5与NSP2基因组进行遗传变异分析和致病性研究。结果表明:(1)与PRRSV-VR2332标准毒株比较,ORF5基因片段的核苷酸及推导的氨基酸的同源性分别为87.6%和88.1%,PRRSV-FJ09A毒株存在多个氨基酸发生突变,主要集中在抗原表位、毒力相关位点和糖基化位点;NSP2基因片段的核苷酸及推导的氨基酸的同源性分别为80.9%和77.0%,PRRSV-FJ09A毒株分3处共缺失31个氨基酸。(2)与国内2006年后流行的变异型PRRSV毒株比较,PRRSV-FJ09A毒株ORF5基因片段的核苷酸及推导的氨基酸的同源性分别为98.5%～99.7%和97.5%～99.5%,NSP2基因片段的核苷酸及推导的氨基酸的同源性分别为98.4%～99.3%和97.3%～98.9%,PRRSV-FJ09A毒株在NSP2基因片段多一处缺1个苯丙氨酸(F)。结论:PRRSV-FJ09A毒株为美洲型毒株,与国内流行的变异型PRRSV-FJ06A毒株的亲缘关系比较近。该毒株对30日龄的仔猪具有高致病性。     

猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备及特性分析

为制备猪流行性腹泻病毒(PDEV)的单克隆抗体,并鉴定单克隆抗体特性。本试验采用差速和蔗糖梯度离心纯化PEDV抗原,免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经ELISA方法筛选和细胞克隆,得到能分泌鼠抗PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出相应的单克隆抗体,并分析其特性。试验结果:获得2株能稳定分泌抗PEDV的单克隆抗体,命名为E1和H6株,其中E1单隆抗体为IgG2a亚型,H6单隆抗体为IgM亚型,2株单克隆抗体均具有IFA、ELISA和Western bloting特性。E1杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别26和105,H6杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别24和104。2株单克隆抗体与Vero细胞、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均无交叉反应。Western bloting测定结果表明,E1株单克隆抗体能识别PEDV的M蛋白,H6单克隆抗体能识别PEDV的N蛋白。PEDV单克隆抗体的成功研制,为PEDV免疫诊断、表位识别及蛋白研究奠定了良好基础。     

猪圆环病毒病诊断与综合防控技术

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起的,以系统功能障碍、免疫力下降为特征的一种传染病,猪是唯一的易感宿主,各年龄段的猪均可感染.我国自2001年发现该病以来,全国各地不同规模化的猪场都在发生该病,给生猪养殖行业造成了巨大的经济损失.文中从猪圆环病毒病的病原、流行特点、临床症状、诊断和防控措施进行阐述,为猪圆环病毒病的综合防治提供一定的参考依据.     

伪狂犬病病毒变异株gC抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验,建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法,并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测。结果表明,成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白;建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10 μg·mL^-1和最佳样品血清稀释比例为1∶50,阴性和阳性判定的OD_{650 nm}临界值为0.406~0.438,介于之间的判定为可疑;临床检测结果显示,120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67%、PRV-gB抗体阳性率为95.00%,两种抗体检测结果的整体符合率为95.83%;PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25%(77/80),而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75%(63/80)。因此,建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术,也为开展变异PRV血清学调查奠定基础。     

红叶腊莲绣球生物学特性及引种繁殖试验

腊莲绣球(Hydrangea strigosa Rehd.),虎耳草科(Saxifragaeceae),绣球属(Hydrangea L.),落叶灌木,其花序硕大,一朵花序上红白蓝紫相间,姹紫嫣红,是具有很高观赏价值的野生花灌木,其引种尚未见报道.     

应用双向电泳分析2株不同毒力的副猪嗜血杆菌蛋白质表达的差异

副猪嗜血杆菌是猪常见细菌性疾病的病原之一,临床表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。运用蛋白质组学技术对不同毒力的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)进行比较研究,明确差异蛋白质信息,对揭示其致病机制具有重要意义。本试验通过应用建立的双向电泳方法对选取同为4型的2株不同H.parasuis临床分离株(菌株A和菌株B)进行蛋白质组学研究,二者相互比较,共鉴定出10个差异表达蛋白质,其中菌株A有3个蛋白质表达量为增加,分别是谷氨酰tRNA合成酶、半胱氨酸合成酶和假设蛋白;菌株B有7个蛋白质表达量为增加,包括Yae T蛋白(omp85)、CTP合酶、天冬氨酰tRNA合成酶(有3个)、尿苷激酶、SecB蛋白。差异蛋白质的功能主要集中在蛋白质合成、氨基酸合成和嘧啶合成。研究结果进一步丰富了H.parasuis的毒力因子和致病机制的相关信息,也为今后开展H.parasuis免疫蛋白质组学研究奠定了基础。     

α-短链脂肪酸单甘油酯在白羽肉鸡的饲养效果观察

该研究对α-短链脂肪酸单甘油酯在白羽肉鸡中的饲养效果进行观察,结果表明FraC34在白羽肉鸡饲养环节中全程添加具有明显改善白羽肉鸡生产性能的作用,可作为促生长剂替代抗生素饲料添加剂。     

变异猪流行性腹泻病毒M和N融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的M基因和N基因,将M基因克隆至pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒。利用同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至E2-M片段,转化到Trans 1-T1感受态细胞中,构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化Transetta(DE3),表达出相应的融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况。将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性。结果表明:扩增出M和N基因,成功构建了pE2-M质粒,并将E2-M基因与N基因进行有效连接,构建出pE2-M-N融合双基因质粒,表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白,该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体。变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建,为进一步开展变异PEDV的诊断技术和免疫学等研究,奠定良好基础。