Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（亦称UCH37）的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5 μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。     

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示：本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌（133株）和肠炎沙门氏菌（178株）2种血清型;药物敏感性试验表明：分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0 %(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果：Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。     

Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。以小鼠RTECs为转染对象、脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响;同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异。结果显示,Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性。当质粒DNA∶Lipofectamine^TM 2000为0.66 μg∶2 μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小。最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件。     

鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究

探明鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV）感染鸡胚肾细胞（Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell）,并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。     

抗雌二醇单克隆抗体的制备与鉴定

活化雌二醇（E2）C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白（BSA）偶联,制备得E2的完全抗原,利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,最后获得了E2的单克隆抗体,对纯化的单克隆抗体的性质鉴定,结果显示：其抗体效价为1:106,抗体属于IgG2a型;分子量为179000Da;E2单克隆抗体的亲和常数Kaff＝2.9×108L/mol。     

鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域多克隆抗体的制备

干扰素(IFN)是机体免疫细胞在诱导剂激发下产生的一种细胞因子。自身IFN对感染性疾病尤其是病毒性疾病具有良好的治疗作用,甚至非自身IFN在治疗感染性疾病过程中也能发挥重要作用。研究表明,IFN-β和IFN-γ受体缺损的小鼠对病毒     

猪圆环病毒检测技术研究进展

猪圆环病毒（PCV）具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1无致病性,而PCV2可引起猪断奶后多系统消耗综合征等多种疾病。PCV2相关疾病已给世界养猪业造成了巨大经济损失。因此,建立一套快速、有效的PCV检测方法非常重要。笔者综述了当前PCV的检测技术。     

畜产品中雌二醇检测方法的研究进展

 雌激素包括雌二醇、雌三醇、雌酮，雌二醇(E2)是3种雌激素中活性最强的一种，具有很强的生理功能，对畜禽有广泛的药理作用，但是在动物食品中残留会危害人类健康。研究发现人体中雌二醇含量水平与某些肿瘤，如乳腺癌、子宫癌、肝癌等有显著的相关性。就雌二醇的检测方法和抗体的研究进行简述，为建立雌二醇的ELISA检测方法奠定基础。     

抗热应激中药添加剂对经产母猪繁殖性能的影响

试验选用 30头分娩后 18d的经产母猪 ,随机分为 3组 ,中药方 1和方 2组为试验组 ,对照组饲喂基础日粮 ,试验期为 15d ,日平均温度为 2 7 6～ 33 7℃ ,相对湿度为 2 2 %～ 96 %。结果表明 ,中药添加剂可有效调节高温下产后母猪的繁殖性能。试验组母猪与对照组相比 :①返情率均降低了 2 0 % ;②断乳至再发情的时间提前 ,其中方 1组提前了 18% (p <0 0 5 ) ,方 2组提前了 2 7% (P <0 0 1) ;③产仔头数提高 ,其中方 1组提高了 11% (P <0 0 5 ) ,方 2组提高了 2 2 % (P <0 0 1)。     

室内植物智能养护系统的研发

针对现有植物养护机存在的不适宜阳台农业的问题,研发了新型室内植物生态养护系统,介绍了生态保室内植物智能养护系统的功能和特点。