臭鼻克雷伯氏菌感染鸭胚胎及其防制的研究

在西昌市各养鸭区暴发臭鼻克雷伯氏菌性眼炎的同时,当地产蛋受精卵孵化率明显下降,通过对死胚进行剖检、细菌学检查、病毒分离培养、人工感染试验及抗菌药物治疗试验证明:臭鼻克雷伯氏菌是引起当地鸭胚胎感染死亡的主要原因,该菌广泛存在于圈舍、水塘、蛋盘、孵化器、出雏床等与种鸭活动及孵化有关的环境和器具中,鸡鸭鹅肠道健康带菌情况也较为普遍。通过对蛋壳表面及蛋内细菌分布研究及对不同保存时间种蛋的孵化率比较。人工感染试验证明,该菌对胚胎的水平传染是胚胎感染死亡的主要途径。本文还对该菌的传染周期、感染暴发原因及公共卫生学意义进行了探讨。     

鸭瘟病毒胸苷激酶基因的原核表达及其蛋白间接ELISA检测方法的建立

本研究旨在以表达纯化的鸭瘟病毒胸苷激酶(thymidine kinase,TK)重组蛋白作为包被抗原,建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。根据GenBank上收录的鸭瘟病毒TK基因序列设计出1对引物,采用PCR扩增出鸭瘟病毒TK基因。将TK基因与原核表达载体pET-32a连接,通过PCR、双酶切和测序鉴定,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达。采用切胶纯化的方法纯化蛋白,Western blotting分析鉴定表达产物。用纯化的TK重组蛋白作为包被抗原,并优化其他条件,最终建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组质粒构建成功,经Western blotting检测得到目的蛋白,TK重组蛋白能被阳性血清识别,说明该重组蛋白具有较好的抗原性。确定了最佳反应条件:酶标二抗的最佳稀释度为1:200,最佳抗原、抗体的稀释度分别为1:400和1:200,抗原抗体作用时间为60 min,最佳封闭液为5% BSA,最佳封闭时间为60 min,最佳显色时间为10 min。结果表明,该方法具有良好的稳定性及较高的敏感性,为鸭瘟的检疫、监测和防制工作提供了一种有效的手段。     

牦牛病毒性腹泻病病毒E2基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的多株牛病毒性腹泻病毒的E2基因序列比较分析设计了3对引物,应用RT-PCR方法首次扩增出牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因区637 bp的片段序列,经pMD18-T载体连接后克隆、测序,并与已发表的NADL、Osloss、Oregon C24V等毒株E2基因序列进行系统发育进化树比对分析,结果表明,牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因无插入或缺失,系统发育进化分析表明,与其他毒株核苷酸同源性较低,最高仅为68.8%,推导氨基酸序列为68.4%。较低的同源性表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变或者可能还具有独立的衍化来源。     

安宁河流域鸭瘟鸭霍乱的混合暴发感染

地处安宁河中游的西昌市某种鸭场因混合暴发感染鸭瘟、鸭霍乱，于１８天内该场发病死亡建昌种鸭１４１９只，病死率达８７．６％。对分离的１５株多杀性巴氏菌经血清学鉴定均属ＣａｒｔｅｒＡ群，其中１３／１５株为Ａ：５型，占８６．７％，２／１５株为Ａ：２型占１３．３％；用抗鸭瘟血清与双抗处理过的病料进行中和后接种试验鸭，结果６／６只保护。     

牦牛病毒性腹泻病毒E1基因的克隆及生物信息学分析

参考GenBank中发表的BVDV毒株的基因组序列设计2对引物,利用套式RT-PCR方法首次成功克隆牦牛体内分离鉴定出的牛病毒性腹泻病毒E1基因,并扩增出预期的585 bp目的片段。将扩增产物克隆至pMD18-T Vector,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定获得阳性重组质粒并进行测序。测序结果经BLAST同源性比较分析,克隆得到的E1基因与Osloss株同源性最高,但核苷酸同源性仅为73.3%,推导氨基酸同源性仅为82.6%,表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变。这可能是该病毒为适应牦牛这种特有生物体和牦牛所生活的高原生态环境的结果,或该病毒也可能具有独立的遗传衍化来源。     

致病性沙门氏菌对部分四环素类和氟喹诺酮类药物的耐药性研究

从成都地区的部分规模化鸡场采集疑似沙门氏菌病例50份,通过临床细菌分离并经生化试验和血清学试验鉴定,结果分离到32株禽源致病性沙门氏菌。对部分四环素类和氟喹诺酮类药物进行药敏试验,结果证明:致病性沙门氏菌对盐酸四环素、土霉素的耐药率达100%;对盐酸金霉素的耐药率达74.3%;对强力霉素的耐药率达64.0%;6种氟喹诺酮类药物中,对诺氟沙星和恩诺沙星的耐药率分别达74.0%和60.0%;抑菌作用最强的是洛美沙星和环丙沙星,分别为75.0%和69.0%;二氟沙星和氧氟沙星抑菌作用次之,分别为66.7%和65.5%。所以,针对饲料公司配方中用药的情况和养殖场用药的实际,定期对鸡场进行抗生素敏感性监测,交替使用药物,对防治禽源致病性沙门氏菌病具有重要的治疗意义。