高寒牧区性畜部份传染病调查与防治研究

开展“家庭牧场优化模式”研究以来，对高寒牧区流行的犊牛腹泻病，牦牛粘膜病，布氏杆菌病，羊梭菌性疾病进行调查与防治。病的发病率，死亡率下降８％－１５％，取得了明显的社会效益和经济效益。     

高寒牧区牲畜部份传染病调查与防治研究

开展“家庭牧场优化模式”研究以来，对高寒牧区流行的犊牛腹泻病、牦牛粘膜病、布氏杆菌病、羊梭菌性疾病进行了调查与防治。传染病的发病率、死亡率下降８％～１５％，取得了明显的社会效益和经济效益。     

鸭瘟病毒胸苷激酶基因的原核表达及其蛋白间接ELISA检测方法的建立

本研究旨在以表达纯化的鸭瘟病毒胸苷激酶(thymidine kinase,TK)重组蛋白作为包被抗原,建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。根据GenBank上收录的鸭瘟病毒TK基因序列设计出1对引物,采用PCR扩增出鸭瘟病毒TK基因。将TK基因与原核表达载体pET-32a连接,通过PCR、双酶切和测序鉴定,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达。采用切胶纯化的方法纯化蛋白,Western blotting分析鉴定表达产物。用纯化的TK重组蛋白作为包被抗原,并优化其他条件,最终建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组质粒构建成功,经Western blotting检测得到目的蛋白,TK重组蛋白能被阳性血清识别,说明该重组蛋白具有较好的抗原性。确定了最佳反应条件:酶标二抗的最佳稀释度为1:200,最佳抗原、抗体的稀释度分别为1:400和1:200,抗原抗体作用时间为60 min,最佳封闭液为5% BSA,最佳封闭时间为60 min,最佳显色时间为10 min。结果表明,该方法具有良好的稳定性及较高的敏感性,为鸭瘟的检疫、监测和防制工作提供了一种有效的手段。     

牦牛病毒性腹泻病病毒E2基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的多株牛病毒性腹泻病毒的E2基因序列比较分析设计了3对引物,应用RT-PCR方法首次扩增出牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因区637 bp的片段序列,经pMD18-T载体连接后克隆、测序,并与已发表的NADL、Osloss、Oregon C24V等毒株E2基因序列进行系统发育进化树比对分析,结果表明,牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因无插入或缺失,系统发育进化分析表明,与其他毒株核苷酸同源性较低,最高仅为68.8%,推导氨基酸序列为68.4%。较低的同源性表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变或者可能还具有独立的衍化来源。     

牦牛病毒性腹泻病毒E1基因的克隆及生物信息学分析

参考GenBank中发表的BVDV毒株的基因组序列设计2对引物,利用套式RT-PCR方法首次成功克隆牦牛体内分离鉴定出的牛病毒性腹泻病毒E1基因,并扩增出预期的585 bp目的片段。将扩增产物克隆至pMD18-T Vector,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定获得阳性重组质粒并进行测序。测序结果经BLAST同源性比较分析,克隆得到的E1基因与Osloss株同源性最高,但核苷酸同源性仅为73.3%,推导氨基酸同源性仅为82.6%,表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变。这可能是该病毒为适应牦牛这种特有生物体和牦牛所生活的高原生态环境的结果,或该病毒也可能具有独立的遗传衍化来源。     

安宁河流域鸭瘟鸭霍乱的混合暴发感染

地处安宁河中游的西昌市某种鸭场因混合暴发感染鸭瘟、鸭霍乱，于１８天内该场发病死亡建昌种鸭１４１９只，病死率达８７．６％。对分离的１５株多杀性巴氏菌经血清学鉴定均属ＣａｒｔｅｒＡ群，其中１３／１５株为Ａ：５型，占８６．７％，２／１５株为Ａ：２型占１３．３％；用抗鸭瘟血清与双抗处理过的病料进行中和后接种试验鸭，结果６／６只保护。