非洲猪瘟病毒免疫逃逸分子机制研究进展

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病，至今没有研发出安全有效的疫苗，一旦暴发会造成重大经济损失。ASFV在和宿主长期作用过程中，通过抑制干扰素和炎症反应，调节凋亡、自噬及细胞免疫等多种途径逃逸机体免疫反应促进自身复制，但具体的机制仍不完全清楚。ASFV复杂的免疫逃逸机制可能是阻碍有效疫苗研发的关键因素之一。借助生物信息学技术对ASFV的基因组和蛋白质组深入分析，筛选病毒的免疫调控关键基因和保护性抗原表位，将在ASFV免疫逃逸分子机制的研究与疫苗研发中发挥重要作用。本文主要对ASFV感染引起的免疫应答反应及可能的免疫逃逸机制研究进行概述，以期为ASF疫苗研制及综合防控提供思路。     

NLRP1炎性小体的激活机制

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1（NLRP1）是NOD样受体（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors，NLRs）家族的成员，是人们发现的第一个能形成炎性小体的蛋白。NLRP1的激活可引起半胱氨酸蛋白酶-1前体（pro-caspase-1）的活化并进一步促进炎性因子的成熟和释放，在天然免疫中发挥着重要作用。NLRP1的结构在不同种属间存在差异，目前能引起NLRP1激活的机制，主要包括通过蛋白酶体途径降解并激活NLRP1、通过抑制DPP9激活NLRP1以及弓形虫和部分代谢抑制剂激活NLRP1等。某些病毒蛋白或RNA也能够激活NLRP1，其具体激活机制以及NLRP1在抗病毒感染中发挥的作用尚未明确，还有待于进一步研究。     

欧盟国家兽药残留数据库介绍

比利时建立的兽药残留数据库中包括分析方法库,该库提供了1份经过评估的兽药残留分析方法清单,其中的方法经验证后可以考虑作为候选标准.根据这些方法与欧盟委员会决议93/256/EEC和93/257/EEC规范要求的符合程度,可将方法分为高可靠性和有限可靠性.另外,这个数据库还包括有关消费者健康的药物毒理数据,比利时肉类消费的估算数据,欧洲和比利时关于动物产品中残留的法规库,市场上可获得的检测试剂(抗血清、免疫诊断试剂盒、放射性及同位素示踪试剂等),有关比利时兽医检查所和农业部实施监控计划中的定量和定性数据,有关动物性食品中存在残留物质的理化参数,等等.这个数据库已在因特网上公开,可免费查询相关资料,互联网上的地址为:http://cemu10.fmv.ulg.ac.be/OSTC.     

检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用

为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL,比普通RT-PCR检测下限高100倍;特异性试验结果显示,该检测方法与猫疱疹病毒、猫细小病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应;通用性试验结果显示,针对引物靶位点区间,该方法对所有已知变异位点的人工合成质粒和本实验室保存的不同变异位点的FCV毒株,均能够良好检出;重复性试验结果显示,组内的变异系数为0.09%~0.71%,组间变异系数为0.05%~0.82%,均小于1%。对23份临床样品进行检测,该方法的阳性检出率为60.9%,检出的14份阳性病料分别接种到CRFK细胞中,对细胞病变产物进行扩增并测序,BLAST对比后结果证实为FCV毒株。结果表明,本试验建立的荧光定量RT-PCR检测方法可用于FCV的快速诊断及流行病学的调查。     

猪丁型冠状病毒S1-CTD相互作用宿主蛋白的筛选和鉴定

猪丁型冠状病毒纤突蛋白S1亚基C端结合域(S1-CTD)是诱导中和抗体产生的主要区域，为研究与其相互作用的宿主蛋白，采用HEK-293T真核表达系统表达并纯化了S1-CTD，提取了猪回肠上皮细胞膜蛋白，通过免疫共沉淀筛选了可能与S1-CTD相互作用的蛋白并进行质谱分析，发现32个疑似相互作用的宿主蛋白。构建其中可能与S1-CTD互作的蛋白KIF1 binding protein (KIFBP)的真核表达质粒，通过免疫共沉淀和激光共聚焦验证上述宿主蛋白与S1-CTD是否存在相互作用，结果表明KIFBP和S1-CTD之间存在相互作用，共同转染时在细胞质共定位。进一步研究表明，过表达KIFBP能够有效降低病毒RNA水平和病毒滴度，其中mRNA水平降低了约70%，病毒滴度降低了10^1.6TCID₅₀。综上，本研究筛选并鉴定出一种与PDCoV S1-CTD相互作用的宿主蛋白KIFBP，为了解PDCoV的致病机制提供了理论基础。     

Generation and application of two monoclonal antibodies targeting conserved linear epitopes in the NP protein of influenza A virus

Monoclonal antibodies (mAbs) are widely used in virus research and disease diagnosis. The nucleoprotein (NP) of influenza A virus (IAV) plays important roles in multiple stages of the virus life cycle. Therefore, generating conserved mAbs against NP and characterizing their properties will provide useful tools for IAV research. In this study, two mAbs against the NP protein, 10E9 and 3F3, were generated with recombinant truncated NP proteins (NP-1 and NP-2) as immunogens. The heavy-chain subclass of both 10E9 and 3F3 was determined to be IgG2α, and the light-chain type was κ. Truncation and site-specific mutation analyses showed that the epitopes of mAbs 10E9 and 3F3 were located in the N terminal 84–89 amino acids and the C terminal 320–324 amino acids of the NP protein, respectively. We found that mAbs 10E9 and 3F3 reacted well with the NP protein of H1–H15 subtypes of IAV. Both 10E9 and 3F3 can be used in immunoprecipitation assay, and 10E9 was also successfully applied in confocal microscopy. Furthermore, we found that the 10E9-recognized ₈₄SAGKDP₈₉ epitope and 3F3-recognized ₃₂₀ENPAH₃₂₄ epitope were highly conserved in NP among all avian and human IAVs. Thus, the two mAbs we developed could be used as powerful tools in the development of diagnostic methods of IAV, and also surely promote the basic research in understanding the replication mechanisms of IAV.     

消毒技术在非洲猪瘟防控中的应用现状与问题

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗，我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施进行防控。消毒是生物安全防控ASF的重要手段。目前针对ASFV的灭活方式多种多样，但其灭活效果还有待进一步检验。当前的ASF分子病原学诊断技术无法确定样品的感染性，因此不能用于准确评价消毒剂对病原的杀灭效果。对ASFV的消毒技术及其作用机理、杀灭效果、优缺点、注意事项等进行了总结，并对当前消毒技术存在的问题以及检测技术的局限性进行了分析，在此基础上对ASFV的消毒剂评价技术进行了探讨，旨在为我国ASF检测技术的创新与完善以及现地防控提供参考。