蛋白激酶C抑制剂及激活剂对鸭肠炎病毒增殖的影响

为进一步探究鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）的致病机理，试验采用鸭蛋白激酶C （protein kinase C，PKC）的抑制剂星形孢菌素（staurosporine，SP）和激活剂佛波醇（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）研究PKC/PKCI能否对DEV的增殖产生影响，为阐述DEV致病机理提供新的思路。用SP/PMA处理正常鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast，DEF）后，实时荧光定量PCR方法检测不同时间段PKC/PKCI基因表达；用DEV病毒液感染SP/PMA处理的DEF后，收集不同时间段培养物，以Reed-Muench法计算DEV半数组织培养感染量（TCID₅₀）值，实时荧光定量PCR方法检测分析DEV NP基因转录水平。结果显示，SP处理对宿主细胞PKC/PKCI基因表达水平无显著影响（P>0.05）；而PMA处理可极显著提高宿主细胞PKC基因表达（P<0.01），但对PKCI基因表达水平无显著影响（P>0.05）；SP/PMA处理对DEV复制能力影响显著（P<0.05；P<0.01），且在感染前期可显著或极显著降低DEV NP基因的转录水平（P<0.05；P<0.01）。综上所述，SP和PMA对PKC、PKCI基因表达水平的影响效果不同，且都能有效抑制DEV增殖，本试验结果可为DEV的防控及其致病机理的研究提供基础资料。     

一株鸭源鸡杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确诊贵州省六盘水市某蛋鸡养殖场乌蒙凤鸡发病的原因,无菌采集病鸡的心脏、肝脏、脾脏组织进行细菌分离培养,对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化试验、16S rRNA基因鉴定及序列分析,并进行药敏试验。结果:分离菌在鲜血琼脂培养基上生长出表面光滑、呈β溶血的灰白色小菌落;菌体形态为两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌;能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇,过氧化氢酶、磷酸酶、氧化酶试验呈阳性; 16S rRNA基因与鸭源鸡杆菌参考菌株的核苷酸同源性高达98.2%～99.6%,且与参考菌株GQ423347.1聚为1支;分离菌株对羧苄西林、氧氟沙星高度敏感,对环丙沙星、多粘菌素B中度敏感。结论:分离菌株鉴定为鸭源鸡杆菌,确诊鸡发病原因为鸭源鸡杆菌感染。     

贵州县册亨县“蔗畜（禽）模式”生态养殖现状调查

为了对贵州省册亨县实施的“蔗畜（禽）模式”生态养殖现状有一个系统、全面的了解，笔者通过实地考察调研、搜集相关资料，结合自身工作对比分析，对册亨县“蔗畜（禽）模式”形成的条件、现状问题以及发展对策等进行了调查分析，并提出了可行性建议。     

贵州省肉鸡禽流感免疫防控技术初探

为科学合理防控贵州省肉鸡禽流感的发生,试验采用血清学方法对规模化肉鸡养殖场不同日龄鸡群880份血清样本进行了禽流感H5母源抗体与免疫抗体消长规律的测定,制定了禽流感合理免疫程序并推广应用,对推广应用效果进行了验证。结果显示肉鸡母源抗体于16日龄开始下降,免疫抗体于35日龄、120日龄开始下降,可确定肉鸡首免时间为16~20日龄,二免时间为45~55日龄,三免时间为110~120日龄。免疫程序推广应用效果显示,鸡群禽流感免疫保护率有不同程度提升,总体提高13个百分点,表明所制定的禽流感免疫程序适合贵州省肉鸡养殖生产实际,并具有较好的免疫效果。     

A型产气荚膜梭菌感染鸭回肠代谢组学分析

旨在应用非靶向代谢组学技术探究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type A, CpA)感染鸭回肠差异代谢物变化特征。试验选取CpA感染37日龄健康雏鸭，采用剖检病理观察和PCR检测确定CpA感染成功后，使用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)技术检测对照组和CpA感染组感染66、90、114 h时鸭回肠的代谢组学，筛选并分析潜在的差异代谢物及相关代谢通路，最后选取对照组和CpA感染114 h组差异代谢物验证。结果表明：经剖检病理观察和病原核酸检测确定成功构建了鸭CpA感染模型；PCA图中回肠样本有部分重叠，提示感染组与对照组鸭回肠间可能存在相同的离子化合物；感染鸭66、90和114 h总差异代谢物种类分别有14、16和24种，富集的代谢通路分别有13、14和28条，主要集中在花生四烯酸代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、酪氨酸代谢等；同时差异代谢物验证结果显示，感染114 h回肠缬氨酸和丙氨酸含量变化趋势均与非靶向代谢组学检测结果一致。综上所述，CpA感染鸭的致病机制可能...     

山羊痘病毒增殖与沉淀抗原制备

取山羊痘分离野生强毒H—GZ株通过Vero—E6细胞传代增殖，经硫酸铵盐析与Sephadex G-200层析制备了山羊痘病毒沉淀抗原。该抗原在琼脂扩散反应和对流免疫电泳的试验中能够与山羊痘参考阳性血清、山羊痘免疫阳性血清出现沉淀线，所形成的沉淀反应能够被山羊痘参考阳性血清特异性地抑制，与其它常见的动物病血清不发生交叉反应。本次制备的山羊痘病毒沉淀抗原和山羊痘免疫阳性血清，可以用于兽医临床诊断、免疫效果监测和流行病学调查。     

PRRSV-GP5基因的克隆及其蛋白结构和B细胞表位预测

应用RT-PCR扩增PRRSV-GP5目的基因,将纯化DNA与pMD18-T载体连接并转化入DH5α菌株,将阳性重组质粒进行测序和同源性对比。以此基因为材料,应用同源模型化的方法建立其3D结构和DNAStar软件预测其二级结构、亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性,并综合分析了其B细胞抗原表位。结果表明,该基因高度保守,同时PRRSV-GP5蛋白呈现较规则的空间结构,其肽段32～36、51～53、140～142、146～151和196～197可能是其优势B细胞抗原表位区域,该结果将为PRRSV-GP5基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供理论依据。     

山羊传染性胸膜肺炎病例分子病原学诊断

对贵州省某规模化养羊场出现疑似山羊传染性胸膜肺炎（CCPP）症状的山羊采用分子生物学方法进行CCPP病原核酸检测,并通过生物信息学分析对病原进行确定性诊断。结果表明,本次疫情确诊为CCPP,临床病料经分子生物学和生物信息学分析认为病原基因与绵羊肺炎支原体（Mo）Y98标准株在分子进化上一致,表明引起该场CCPP的病原为...     

鲟源荧光假单胞菌的分离鉴定及药敏特性分析

从患病鲟体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA基因序列分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,采用纸片扩散法对分离菌进行药物敏感性分析。结果显示:分离菌为革兰阴性杆菌;可分解葡萄糖和木糖,氧化酶和鸟氨酸脱羧酶试验阳性;16SrRNA基因测序分析与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)同源性大于99%,在系统发育树上与荧光假单胞菌聚为一枝;药敏结果显示,分离菌对氧氟沙星、多西环素、复方新诺明等敏感,对氟苯尼考、卡那霉素、阿莫西林等耐药;人工感染试验结果显示,该菌对小鼠有致病力。本研究为贵州地区鲟细菌性疾病预防及合理用药提供依据。     

RT-PCR对新城疫病毒强弱毒株的快速鉴定

根据新城疫病毒(NDV)F蛋白基因结构的特点及强、弱毒株F蛋白基因裂解位点的序列差异设计了4条引物,并将其配成3对引物,采用RT-PCR试验对来自鸡和七彩山鸡的9株NDV野毒分离株,F48E8和LaSota 2株标准强、弱毒株进行了快速鉴定;并将RT-PCR鉴定结果与NDV常规致病性试验结果进行了比较。结果表明,RT-PCR试验能够快速将11个参试毒株区分为强毒株和弱毒株,其结果与传统致病性试验测定结果基本一致,该方法可以用于ND的快速诊断和强、弱毒株的快速鉴定。