一种基因编辑位点特异性PCR方法的开发和应用

为了对基因组编辑产品进行精准定性和定量检测，以水稻SP1 基因的编辑植株为材料，在编辑位点上下 游设计通用引物，在编辑位点处设计基因编辑位点特异性TaqMan探针，建立了编辑位点特异性PCR方法。利用该 方法可准确鉴定特异基因组编辑产品，检测灵敏度达到5~10拷贝，可在实时荧光PCR（qPCR）和微滴数字PCR （ddPCR）平台上对基因组编辑产品进行定量检测。由于数字PCR的微反应单元可消除野生型DNA对通用引物的 竞争性消耗，与qPCR的定量结果相比，ddPCR定量结果具有更高的定量准确性。     

转基因玉米NK603转化体/zSSIIb内标基因二重微滴数字PCR方法的建立及应用

【目的】批准进口的转基因玉米NK603是中国转基因生物安全监管的主要对象。转基因安全监管需要标准物质和标准检测方法,建立转基因玉米NK603的数字PCR（dPCR）方法将为转基因玉米NK603的定量检测和标准物质研制提供精准测量技术。【方法】采用人工合成技术构建标准质粒分子pUC57-NK603;将NK603转化体与不同的玉米内标基因引物/探针一一组合,遴选与NK603转化体特异性PCR具有相同扩增能力的玉米内标基因PCR方法;设置二重微滴数字PCR（ddPCR）的退火温度梯度和引物/探针浓度梯度,优化二重ddPCR的反应体系和反应条件;用梯度稀释的标准质粒溶液作模板,考察二重ddPCR的检测极限、定量极限和动力学范围;将转基因玉米NK603种子粉末和非转基因玉米种子粉末混合,配制质量分数分别为100%、10%和6%的盲样,考察二重ddPCR的定量准确性。【结果】用标准质粒分子pUC57-NK603作为二重ddPCR的质控对照,通过考察二重ddPCR反应热图的微滴信号强度、阳性微滴与阴性微滴分辨率、雨滴数量、NK603转化体与内标基因拷贝数比值测量值与预期值的一致性,确定将NK603转化体特异性PCR方法与内标基因zSSIIb PCR方法组合,建立NK603/zSSIIb二重ddPCR方法。二重ddPCR反应体系中NK603转化体和zSSIIb内标基因的引物/探针浓度相同,均为400 nmol·L^-1/200 nmol·L^-1,在60℃退火延伸。NK603/zSSIIb二重ddPCR的检测极限是2 copies DNA模板,定量极限是48 copies DNA模板,动力学范围是10—60 000 copies DNA。应用NK603/zSSIIb二重ddPCR方法可准确定量玉米盲样中的NK603转化体含量,定值结果变异系数小于25%;dPCR定量结果与荧光定量PCR（qPCR）定量结果无显著差异,且具有更高的精确性。【结论】内标基因的选择会影响dPCR定量结果的准确性,在建立dPCR方法的过程中,要用具有准确量值的样品作为质控对照,评估内标准基因的适用性。以人工合成的标准质粒分子pUC57-NK603为质控对照,建立了NK603/zSSIIb二重ddPCR方法。应用建立的二重ddPCR定值方法进行标准物质的研制和定值,已成功研制出转基因玉米NK603有证标准物质。     

耒阳市菜油两用油菜防冻丰产栽培技术

菜油两用油菜是耒阳市冬季主要的作物之一,低温冻害是影响其产量和品质的重要因素。据世界气象组织预测,拉尼娜事件将在2023年冬季达到峰值,有可能连续3个冬季发生拉尼娜事件,将是21世纪首次“三峰”拉尼娜现象。受其影响,湖南冬季气温偏低的概率较高,由此对油菜薹和油菜籽的产量及品质造成的影响将会较为严重。     

转基因玉米MON87427/zSSIIb 二重微滴数字PCR方法建立及应用

实施转基因产品定量标识制度需要建立准确可靠的定量检测技术和方法。数字PCR（dPCR）不依赖标准 物质，实现对DNA分子的绝对定量，已成功用于转基因含量检测和标准物质定值。为建立可靠的dPCR方法，获得 准确测量结果，本研究以耐除草剂玉米MON87427为材料，探索建立二重微滴数字PCR（ddPCR）的策略。以构建的 聚合MON87427转化体和5个玉米内标基因的重组质粒pUC57-M为质控样品，将5个不同的玉米内标基因分别与 MON87427组合，通过优化退火温度，根据阳性微滴与阴性微滴分辨率、中等信号强度雨滴数量及测量值与理论值 的一致性等，确定了二重ddPCR组合为MON87427/zSSIIb，最适退火温度为58.4℃。MON87427/zSSIIb 二重ddPCR的 动力学范围为10～60 000拷贝。对盲样进行定量检测，二重ddPCR的定量结果与荧光定量PCR有良好的可比性， 表明MON87427/zSSIIb 二重ddPCR可取代qPCR方法进行转基因玉米MON87427的定量检测及标准物质定值。     

园林植物设计思路及色彩的运用探究

随着时代发展,我国城市建设发展越发迅速,园林植物建设也上升到新的层次。园林设计是一座高质量城市园林的核心,其中色彩又是园林植物设计中的重点,能很好地体现出人类和植物的关系,并反映了人们在心灵和感官上的体验。所以,应以植物为对象,运用色彩去切合人的身心需要,寻找并维持人身心与园林植物色彩之间的平衡,赋予色彩传递性,更好地表达人的情感。     

伽师瓜栽培技术

<正>伽师,在维吾尔语中称排孜阿瓦提,意为美丽富饶的地方,位于新疆维吾尔自治区西南部喀什噶尔冲积平原中下游、塔里木盆地西缘、克孜河下游。伽师具有适宜的独特气候和水土条件,生产的伽师瓜     

不同药剂防治棉花黄萎病药效试验

1试验材料1.1参试品种棉花:中棉57号。1.2供试药剂(1)特效萎必治(10%混合脂肪酸),由北京市瑞宝生物技术开发公司研制生产;(2)锰锌.腈菌唑(可湿性粉剂),由江苏生花农药有限公司研制而成;(3)2%宁南霉素,由四川金珠生态科技有限公司提供。     

百泰防治棉花枯萎病药效试验研究

进行百泰防治棉花枯萎病药效试验,结果表明:百泰不仅对棉花的枯萎病具有很好的防治效果,而且能提高棉花的品质、单产,是一种较为理想的叶面喷施药剂。     

对张家口市人民公园植物景观应用现状的思考

本文分析了张家口市人民公园植物应用现状及配置类型,归纳出植物的配置原则;找出植物应用中存在的问题。为下一步制定详细发展计划打下基础。     

肉苁蓉人工种植技术

介绍了肉苁的人工种植技术，包括土壤与寄主植物选择、繁殖、接种、田间管理、病虫害防治、采收等内容，以期为肉苁蓉的人工种植提供参考。