规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的药敏区系调查

仔猪黄痢、仔猪白痢是由致病性大肠杆菌引起仔猪的一种疫病。其病原菌主要为肠产毒性大肠杆菌( ETEC) ,每年在死亡的幼猪中约有 5 0 %与 ETEC有关[1] 。王红宁等[2 ] 1 995— 1 999年在四川等地规模化猪场通过流行病学调查发现 ,仔猪黄、白痢的发病率可达 2 0 %～ 60 % ,如果仔猪黄、白痢与其它猪病混合感染 ,其死亡率可达 60 %以上。随着养猪业向规模化发展 ,由大肠杆菌引起的仔猪腹泻有明显上升趋势 ,仔猪死亡率增高 ,存活率降低 ,断奶窝重降低 ,严重制约了养猪业的发展。大肠杆菌用药物治疗效果不理想 ,且因盲目用药使用药成本增高。…     

四川规模化猪场仔猪黄、白痢的分子流行病学研究

在系统鉴定、药敏试验和血甭型鉴定的基础上,对52株致病性大肠杆菌和4株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析,结果表明,菌株的质粒得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱,质粒DNA分析为四川规模化猪场致病性E.coli的分子流行病学调查提供了科学依据。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。     

"自杀性"DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍.     

禽传染性支气管炎DNA疫苗在鸡体内的分布和安全性

采用本实验室构建的3种禽传染性支气管炎病毒基因的真核表达质粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN,按各50 mg/L配制成质量浓度为150 mg/L的DNA疫苗,经腿部肌肉分点注射免疫1周龄SPF雏鸡。分别在免疫后24 h,73、0及60d,采集试验鸡的血液、心、肝、脾、肺、肾、胸腺、性腺（卵巢/睾丸）及注射部位肌肉进行组织总DNA抽提,以组织总DNA为模板进行PCR扩增。另外,在对照组DNA模板中加入不同拷贝数的质粒,确定PCR反应的灵敏性。以纯化后的组织总DNA为模板,PCR法检测质粒DNA整合到鸡细胞染色体基因组上的可能性,评价疫苗的安全性。结果表明,该疫苗在24 h内迅速分布于全身,并能在血液及所有检测的组织器官内持续分布60 d;纯化后的组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性,未发现整合现象,证实该DNA疫苗的安全性好。     

兔病毒性出血症基因工程疫苗的研究进展

兔病毒性出血症俗称兔瘟,它是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种急性、烈性、高度接触性、致死性传染病。1984年中国首次报道了该病。RHDV曾是兔的一种毁灭性传染病,因给养兔业带来巨大的经济损失而备受养兔业的关注。1989年,世界动物卫生组织(OIE)将该病正式列为B类传染病,我国将其列为二类传染病。     

一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析

从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。     

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法，选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物，对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果有28株菌（93．3％）至少对一种药物有耐药性；对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉索和氯霉素有耐药性的菌株较普遍，在所有菌株中占比例分别为83．3％、80％、80％、76．7％、60％、56．7％和56．7％。设计了25对引物，对耐药基因进行了扩增及序列测定，结果扩增到13种耐药基因，与GenBank中的相应基因有很高的同源性（≥98．1％）。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株（93．3％），sul1、aph（3′）-Ⅱa、tetC、Catl、tetA和aadAl耐药基因较为普遍，检出率分别为76．7％、60％、60％、43．3％、40％和36．7％。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性（≥88％）。     

鸡传染性支气管炎病毒基因工程疫苗研究进展

鸡传染性支气管炎（IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,是严重危害养禽业的重要传染病之一.IBV为冠状病毒科（Coronavirdae）,冠状病毒属（Coronavirus）的代表成员,病毒粒子有囊膜和纤突,基因组为一条单股正链RNA,具有27kb,分为10个开放阅读框架（ORF）;基因组主要编码3种结构蛋白：纤突（S）蛋白、膜（M）蛋白和核衣壳（N）蛋白,其中S蛋白由S1和S2两种糖蛋白组成,血凝抑制和大多数中和抗体由S1蛋白引起.     

冠状病毒的反向遗传学研究进展

目前,反向遗传技术在动物RNA病毒的研究中已经得到了广泛的应用并取得了很大的成就。已经成功获得了口蹄疫病毒、猪瘟病毒、狂犬病毒、牛瘟病毒、新城疫病毒等病毒的感染性克隆。冠状病毒是目前已知的最大基因组长度的RNA病毒,也被认为是最难拯救的正链RNA病毒。随着长片段RT-P