猪病毒病抗体及病原的检测及分析

[目的]研究猪场猪病毒病的抗体水平及感染情况,为猪病的防制提供理论依据。[方法]抽样采集各类猪只血液和组织样品,分别应用酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）及反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法对猪瘟（CSF）、猪伪狂犬病（PR）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）及猪圆环病毒病（PCV-2）的抗体、病原进行检测分析。[结果]结果表明,猪场存在CSF、PR野毒感染;PRRS免疫抗体水平不太理想,阳性感染率为3.3%～17.3%;PCV-2阳性感染率为0～9.6%。[结论]试验猪场病毒病,应采取完善的综合措施才能获得理想的效果。     

开展实验室认证认可,提升动物疫病检测能力

本文介绍了实验室认证认可制度的发展现状及主要内容,论述了实验室认证认可工作对于提高实验室的质量管理水平及促进畜牧产业和社会发展的重要意义,着重分析了动物疫病检测实验室通过实验室认证认可对人员培训管理、检测设施设备、环境条件及检测结果质量的保障等方面的提升作用。     

动物沙门氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药性及GyrA基因的突变研究

用纸片扩散法和微量稀释法测定动物沙门氏菌(Salmonella)对氟喹诺酮类抗菌药物的耐药性,PCR扩增沙门氏菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区(Quinolone resistance determining regions,QRDR),扩增的片段长度为487bp,PCR产物直接测序,用DNAstar软件分析氨基酸序列.结果显示,盐酸环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙星和烟酸诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)范围分别为16～128μg·mL-1、32～128 μg·mL-1、32～256μg·mL-1、128～512 μg·mL-1和64～512 μg·mL-1.GyrA基因QRDR的突变位点均位于83和87位氨基酸位点,主要的变异方式为Ser83→Phe(12/15)和Asp87→Asn(10/15),其次为Asp87→Tyr(5/15)和Ser83→Gly(3/15).同时发现QRDR外的119位氨基酸也发生了变异(Ala119→Val),说明试验用菌株对氟喹诺酮类药物均表现为多重耐药,其GyrA基因QRDR的突变表现为多种形式.     

母猪接种PRRS疫苗预防PRRSV垂直传播的效果

用灭活疫苗和减毒活疫苗分别对10头母猪进行免疫.选择20头后代,在20日龄、30日龄、40日龄时分别采集血样进行跟踪监测.结果PRRS的抗体阳性率分别为30%、15%、5%和35%、20%、5%.显示用两种疫苗免疫的母猪后代体内获得性母源抗体水平均不高,且持续时间较短.因此,仅靠对母猪进行免疫难以预防PRRSV的垂直传播.     

规模猪场种猪伪狂犬病血清抗体和病原检测与分析

采集武汉市两个规模猪场的370头份种猪血液和鼻拭子样本,运用ELISA方法对血清样本进行猪伪狂犬病抗体检测,结果两个猪场种猪的伪狂犬病gB抗体平均阳性率分别为77.1%和77.9%,猪伪狂犬病gE抗体平均阳性率分别为2.4%和3.9%;运用PCR方法对种猪鼻拭子样本进行猪伪狂犬病病原检测,结果显示,猪伪狂犬病病毒的阳性率分别为1.2%和5.4%.检测结果对猪场伪狂犬病的控制和净化具有指导意义.     

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用

将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的质粒pET-ApxⅡ转化到大肠杆菌BL21(DE3)。挑选出表达量最高的克隆子，于37℃经IPTG诱导表达。对表达条件进行优化，并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原，建立了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接ELISA，试验的最佳反应条件为：最佳抗原稀释度为1：160，抗原包被液用Tris-HCl(pH8．0)，封闭液用含0．4％BSA的PBST，血清稀释度为1：40，二抗稀释度为1：6000，稀释液用含0．4％BSA的PBST，血清反应时间为30min，二抗反应时间为45min，底物反应时间为20min。与间接血凝(IHA)检测结果比较，建立的ELISA诊断方法具有良好的稳定性和可重复性，并具有较高的特异性和敏感性。用建立的间接ELISA对2503份临床送检血清进行了血清流行病学调查，结果表明，胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性率为63％。     

猪圆环病毒2型感染的血清学调查与分析

2004年1月～2005年12月我们用国产ELISA试剂盒,对湖北省部分规模猪场猪圆环病毒2型抗体进行了检测,共检测1816份血清,阳性402份,阳性率22.14%。其中哺乳仔猪148份,全部阴性,断奶仔猪733份,阳性82份,阳性率11.19%,肥育猪145份,阳性46份,阳性率31.72%,后备母猪310份,阳性72份,阳性率23.23%,经产母猪480份,阳性202份,阳性率42.08%。共检测猪场97个,血清学阳性猪场66个,占68.04%。对43份PCV-2阳性和94份PCV-2阴性的PRRS未免血清进行PRRSV病原学检测,PRRSV感染率分别为72.09%、12.77%,表明PCV-2感染会加剧猪群PRRSV感染;对77份PCV-2阳性和114份PCV-2阴性的PRRS已免血清进行免疫抗体检测,PRRS免疫合格率分别为32.17%、72.81%,表明PCV-2感染对PRRSV的免疫应答有明显的抑制作用。     

全球气候变暖对动物疫病的影响

分析了全球气候变暖对动物病原生物学特性、疫病传播、公共卫生以及对畜禽生存环境的影响,同时就如何减小全球气候变暖对动物疫病的影响提出了科学的应对措施。     

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断方法的建立

为建立一种方便快捷的检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因设计一对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了特异性、敏感性和重复性检测。结果显示,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低检测阈为10 TCID50/mL,扩增产物的特异性良好,重复性良好,可用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及流行病学调查。     

仔猪大肠杆菌·C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺

[目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可产生较高含量的纤毛抗原;当接种剂量为1%～2%,C型产气荚膜梭菌C59-2菌株在35℃条件下培养16～20 h,可产生大量致死性毒素。[结论]该研究为研制具有较好效果的仔猪红痢、黄痢预防疫苗提供了依据。