肾型IBV山东分离株S1高变区(HVR)的基因克隆与序列分析

根据Genbank上发表的IBV病毒的S1基因序列,用Oligo6．0设计了一对用于扩增HVR基因的引物,经RT-PCR扩增得到了预期大小的产物。将目的条带纯化回收后克隆到PMD18-T载体上,对插入的目的片段进行序列测定,并与已发表的IBV HVR基因序列进行比较,发现与ARK-1592-29株的血清型较近,其同源性为91％,从基因序列比较来看可初步把SF株定为ARK株的变异株。     

猪气喘病蜂胶灭活疫苗的研制

猪气喘病（Mycoplasma pneumonia of swine MPS），亦称猪地方流行性肺炎（Swine enmotic pneumonia），是由猪肺炎支原体（Mycoplasnm hyopneumoniae Mhp）引起的一种接触性、慢性呼吸道传染病，以咳嗽、喘气、生长发育迟缓及饲料转化率低为特征。本病具有发病率高、死亡率低的特点。在同一猪场的发病率可达100％，特别是在集约化猪场，一旦发病，将造成严重的损失。     

禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(LPAI-H5N2)株HA全基因克隆与序列分析

为进一步分析禽流感病毒(AIV)H5N2分离株血凝素(HA)基因的特性,参照已发表H5亚型禽流感HA基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR技术,以禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(D96)RNA为模板,扩增了HA全基因并进行核苷酸同源性比较,氨基酸编码分析,绘制系统发育进化树。结果表明,扩增片段长1737个核苷酸,包含了完整的HA基因的开放阅读框架,与Genbank已发表的H5N1和H5N2分离株的HA基因序列比较,发现与国内H5N1分离株同源性较低,只有80%左右,而与H5N2各株序列具有很高的同源性,最高达97.5%,印证了AIV基因组8个片段间频繁的重组及AIV高变异性的特点。推导的氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点上游丢失了4个连续碱性氨基酸(R-R-R-K),裂解位点处氨基酸序列为E-T-R,仅包含一个碱性氨基酸(R-)残基,符合低致病性毒株的特征,证明为低致病性毒株。其HA推导后氨基酸序列与H5N1AIV的同源性接近90%,以其研究的疫苗,可以有效抵御我国流行的H5亚型AIV病毒的感染,同时因为是弱毒株,以其研制的疫苗具有更好的安全性,也更符合公共卫生学的要求。     

反向遗传学操作技术在禽流感研究中的应用

反向遗传操作技术的建立为负链RNA病毒的研究开创了新的途径,使负链RNA病毒的许多特性得以深入认识。禽流感近年在全球的广泛暴发,使得对流感病毒的深入研究更加迫切,反向遗传操作技术的应用,使禽流感病毒的基因结构、致病机理、与宿主细胞的相互关系等各方面的研究工作都取得了巨大进步。笔者就国内近几年反向遗传操作技术在禽流感研究中取得的进展做一综述,并对该技术的发展趋势做一分析,提出对策思考。     

泊洛沙姆-辛酸法对鸡卵黄脱脂条件的研究

本文就泊洛沙姆浓度、辛酸浓度、泊洛沙姆沉淀法沉淀离心条件对泊洛沙姆-辛酸法对鸡卵黄脱脂的影响进行了探讨。实验结果表明:泊洛沙姆浓度、辛酸浓度分别对卵黄脱脂存在不同程度影响,卵黄稀释液沉淀离心条件对卵黄脱脂影响不大。蛋黄稀释液不经离心直接纱布过滤,辛酸浓度为0.2%,泊洛沙姆浓度分别为0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%的7个处理中,以1.2%浓度的提取效果最好;泊洛沙姆浓度为1.2%,辛酸浓度为0.2%,蛋黄稀释液经离心处理和纱布过滤处理对卵黄脱脂影响不大;泊洛沙姆浓度为1.2%,蛋黄稀释液纱布过滤处理,辛酸浓度分别为0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的6个处理中,以0.2%浓度的提取效果最好。     

芝麻主要性状的遗传力分析

本文以9个芝麻品种(系)为试验材料,估算了10个性状的遗传力,遗传变异系数、遗传进度和遗传相关。结果表明千粒重和每蒴粒数的遗传力高,株高和分枝部位的遗传力低;单株蒴果数和单株产量的遗传变异系数和遗传进度大,株高、分枝数和千粒重遗传变异系数和遗传进度小;单株蒴果数、每蒴粒数、千粒重与单株产量的相关都达到显著水平,但三者之间存在不同程度的负相关。     

基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H5N1亚型禽流感病毒

针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR Green Ⅰ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因.熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(795±03)℃和(833±03)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列.该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰.AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA 无扩增信号.本法最低可检测210拷贝·μL-1和195拷贝·μL-1 H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍.本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于H5N1亚型AIV的检测.     

两种叶轮型式潜水排污泵的内流特征与通过能力

为了比较具有不同叶轮型式的2台潜水排污泵的通过性能,采用计算流体动力学方法和SST湍流模型,分别选用清水和固液两相流体为液体介质,模拟双流道污水泵与双叶片污水泵在3种不同流量工况(0.8Q,1.0Q,1.2Q)下的流动特征.对比2台污水泵在输送清水与固液两相流体时的流动参数分布,并对输送这2种介质时的固体颗粒速度和固相颗粒体积分数分布进行分析.结果表明:与双叶片污水泵相比,双流道污水泵内的流动参数分布更加均匀.双流道污水泵叶轮进口存在1个大尺度旋涡,在一定程度上提高了双流道污水泵的通过能力.对比双流道污水泵与双叶片污水泵内固相颗粒分布规律,发现双流道污水泵内固体颗粒的速度更快,局部固体颗粒聚集程度较小,因而双流道污水泵的通过能力强于双叶片污水泵.     

新农村是我们的美好家园：我心目中的新农村

按照党的十六届五中全会提出的建设“生产发展、生活宽裕、乡风文明、村容整洁、管理民主”的社会主义新农村的要求，各地都在立足实际，扎实稳步地推进社会主义新农村建设。本刊今年第9期刊登的关于“新农村建设”的讨论话题一经刊出，立即引起极大反响，读者朋友纷纷寄来稿件，描绘他们心中的新农村图景，同时反映了对新农村建设的观感、呼声、建议和意见，我们从中遴选出几封具有代表性的来信，与读者分享。[编者按]     

1株基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性研究及全基因组序列分析

为研究当前流行的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因型、致病性及其与传统新城疫病毒疫苗株(La Sota等)的核苷酸差异,试验从某发病鸡场病死鸡体内分离到1株疑似NDV毒株,经红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI)初步确定为鸡源NDV。参照GenBank公布的NDV F基因部分片段(登录号:JF950510.1)设计1对引物,通过RT-PCR技术扩增分离株的F基因并克隆、测序,测序结果与NCBI中NDVF基因序列进行比对,构建系统进化树并分析其基因型;通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)判断病毒致病性;参照GenBank公布的NDV全基因组序列(登录号:JF950510.1)设计9对引物对分离株进行全基因组序列测定,并分析其基因组结构。结果表明,RT-PCR扩增得到F基因长约500bp,基于F基因构建的系统进化树显示分离株为基因Ⅶ型NDV;MDT、ICPI和IVPI分别为52.8h、1.675和2.46,表明分离株属于强毒株。全基因组序列分析显示,分离株全基因组全长15 192bp,与传统La Sota株基因组相比,序列多出6个碱基,核苷酸序列同源性82.8%。本研究成功分离到1株基因Ⅶ型NDV强毒株,且与传统疫苗毒株La Sota的核苷酸序列同源性差异较大。