刺参机体酵母菌组成及其拮抗活性的研究

采用PDA、YPD、MEA培养基从刺参Apostichopus japonicus的体表、肠道和呼吸树分离出23株酵母菌,使用玻璃珠破碎方法提取其DNA,然后用酵母菌通用引物NL-1/NL-4从DNA中成功扩增出26S rDNA片段,将PCR产物迸行测序,将各菌株序列在GenBank数据库中进行检索,从Blast比对结果中取相似性最高的序列,用Mega 4.0软件对所有序列进行聚类分析,采用邻接法构建系统发育树.结果表明:从大连柏岚子海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、梅奇酵母属和丝孢酵母属,从大连市黑石礁海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、假丝酵母属、德巴利氏酵母属、有孢汉逊酵母属和毕赤酵母属;以8株刺参病原菌作为指示菌,采用双层琼脂扩散法对分离菌株的拮抗活性进行测定,获得拮抗酵母菌17株,占总测试菌株的73.9％,从刺参机体的体表、肠道和呼吸树可以筛选出不同得率的活性菌株,其抗菌谱和活性强度各不相同,其中C11菌株的抗菌谱最广,抗菌活性最强;从肠道分离出的拮抗菌C11、C14和C21菌株的胞外产物经硫酸铵沉淀后也具有抗菌活性,C14菌株胞外产物经65％硫酸铵沉淀获得的粗提物对热和蛋白酶K敏感,表明其拮抗物质为蛋白质.     

仿刺参稚参"脱板病"超微病理的研究

利用电镜负染技术对2006年夏季大连地区养殖场患脱板病的仿刺参Apostichopus japonicus稚参组织匀浆液进行了检测。结果发现,提取液中存在大量病毒样粒子,该病毒粒子近似球形,具有囊膜。应用超薄切片电镜技术对患病刺参的超微病理进行研究,并与正常组进行了对照观察,结果发现:在病变细胞内存在大量直径80~100 nm的具有囊膜的球形病毒样粒子,该病毒粒子以团聚或散落形式存在于细胞质内,并由质膜包被;病变细胞内内质网肿胀,部分核糖体脱落,其周围散落着大量明显呈六边形的病毒核心结构,并出现大量溶酶体残余体形成的髓袢样结构;高尔基体明显肿胀、膨大,线粒体界限模糊,出现嵴脱落;在病变严重的细胞内,可见细胞器崩解后形成的大量空泡结构。但未发现细菌和其他类可疑病原。     

仿刺参体腔液中酚氧化酶活性的分析

在(22±1)℃下抽取体质量为95.0～ 105.0 g的仿刺参Apostichopus japonicas体腔液,制备体腔液及体腔细胞溶解上清液(CLS),分别测定其酚氧化酶(PO)活性,检测分析不同刺激物(CaCl2、MgCl2、LPS、SDS、Trypsin和甲醇)对酚氧化酶原(proPO)系统的激活效果,并比较了不同规格仿刺参体腔液的酚氧化酶活性.结果表明:仿刺参体腔液中的PO活性个体差异较大,平均为(146.90±55.60)U,体腔液与不同激活剂作用后PO活性均无明显变化;CLS中的PO活性为31.82 U,其在100 mmol/L MgCl2作用后PO活性大幅度提高,proPO比活为43.9U,CLS与LPS、CaCl2和甲醇作用后PO活性无明显增加,与SDS和Trypsin作用后PO活性表现出一定的抑制.研究表明,仿刺参体腔液中的PO主要存在于体腔液中,CLS中的PO活性较低,proPO主要存在于体腔细胞中,可被Mg2+大幅度激活.52.4～68.5、20.7 ～24.4、4.9～5.6 g3种规格的仿刺参体腔液中的PO活性分别为(42.18±7.62)、(34.10±9.28)、(33.29±7.42)U,表明不同规格仿刺参体腔液中的PO活性存在一定差异,总体呈现随规格的增大PO活性增强的趋势,其中100 g左右的仿刺参与3个较小规格的仿刺参体腔液中的PO活性存在显著性差异(P＜0.05).     

刺参苗种体尺与体重的相关性分析

随机抽取120头不同大小的刺参苗种,分别暂养于水槽中,在刺参自然伸展的状态下,用电子游标卡尺测量其体尺,电子天平测量其体重。利用相关分析计算了刺参体长、体宽和体重性状间的相关系数,采用回归分析方法以体尺性状作自变量,体重作因变量,对二者间关系进行拟合。结果表明,刺参体长、体宽和体重三者间呈极显著相关（P〈0．01）,相关系数大小依次为体长与体重（0．954）〉体宽与体重（0．936）〉体长与体宽（0．886）。多种回归分析方法分析表明,刺参体重与体尺间关系以二次项函数拟合最优。     

静水压法诱导虾夷扇贝多倍体的研究

为了探究采用静水压法诱导虾夷扇贝多倍体的适宜条件,研究了在不同的处理时机和压力强度条件下,静水压处理对虾夷扇贝受精卵多倍体诱导效果的影响。试验结果表明:(1)在授精后80 min内处理,所得的多倍体以三倍体为主。在授精后75 min,以60 MPa持续处理5 min,所得的三倍体率最大,达100%。(2)在授精后150~190 min处理,既能获得三倍体也能获得四倍体,但获得的四倍体率要高于三倍体率。其中,在授精后170 min,以65 MPa持续处理3 min时得到的四倍体率最大(54.39%)。     

九孔鲍不同器官DNA相对含量与细胞周期的分析

应用流式细胞术测定了30只九孔鲍Haliotis diversicolor supertexte不同器官DNA的相对含量,比较了各器官的细胞周期差异。结果表明,相同条件下生长的2龄九孔鲍足、上足触手、上足、头触角、外套膜、鳃和眼柄组织的DNA含量存在差异,其中头触角的DNA含量较外套膜组织低15．19％。从各器官细胞周期的时相比例分析看,九孔鲍各器官细胞的同步性较好,G1期时相比例都高于80％,其中鳃G1期比例最高,达到88．62％,头触角中G2／M期时相比例最高,达到11．18％,不同器官各细胞时相的比例存在差异。     

用流式细胞仪检测活体鲍倍性

分别取皱纹盘鲍（Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ）足肌和血液制样,经ＤＡＰＩ染色后,用ＰａｒｔｅｃＰＡＳ－Ⅲ型流式细胞仪测定其倍性,试验证明三倍体鲍的ＤＮＡ相对含量是二保体的１．５倍,切足法和抽取血液法两种制样方法均得到满意结果,用流式细胞仪法检测鲍倍性适应鲍多倍体产业化的需要。     

虾夷马粪海胆反季节繁育技术的研究

对虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius的反季节繁育技术以及繁育过程中亲胆的生殖调控、夏季高温对策等进行了研究.结果表明:当积温达到880℃·d时,亲胆性腺部分成熟;当积温达到1 950℃·d时,亲胆性腺成熟并可自然排放精、卵.利用反季节繁育技术可以使海胆繁殖期提早5个月,且受精卵孵化率≥98%,幼虫平均附着变态率为15.1%.对海水采用多次过滤加药物处理的新方法防除桡足类,效率可提高35%,采用海藻诱导法剥离稚胆,成活率可提高14%.     

硬壳蛤的人工育苗技术

硬壳蛤 (Mercenariamercenaria)亲贝于 2 0 0 0年由美国引入大连 ,采用阴干和温度变化刺激对其进行人工催产 ,亲贝诱导排放比例可达 80 %。水温 18～ 2 6℃ ,2 0 .5～ 2 4 0h胚胎发育到面盘幼虫 ,孵化率达 94 %。浮游幼虫前期饵料以湛江等鞭金藻 (Iscochrysiszhanjiangensis)为主 ,逐渐添加新月菱形藻 (Nizschiaclosterium) ,后期以新月菱形藻为主。硬壳蛤幼虫温度、盐度的适宜范围分别为 19～ 2 7℃、2 5 .0～ 3 3 .6。饵料以混合投喂效果最佳 ,湛江等鞭金藻次之。浮游幼虫培养 12～ 17d ,幼虫壳长达 2 0 0～ 2 10 μm ,采用在培养池底铺砂做附着基 ,幼虫变态率达 2 1% ,稚贝培养 3 0d后可达 1mm左右     

杂交育种技术在海水养殖贝类中的应用及研究进展

我国是世界上最大的水产养殖大国,同时也是海水养殖大国。2001年海水养殖产量达1.13×108t,其中贝类养殖产量占海水养殖总量的80%以上[1],贝类养殖在整个海水养殖业中占有十分重要的地位。但是长期以来,我国贝类只是进行单一的野生品种的养殖,很多养殖品种一直处于野生状态。长期近亲繁育、累代养殖,导致了近交衰退,种质逐年下降,表现为生长缓慢、经济性状下降、抗逆性降低等等。再加上病害的发生、养殖海区环境恶化等因素,致使近些年几种重要的养殖贝类均发生了大规模的死亡事件,造成巨大经济损失,其中仅1997、1998年的扇贝死亡,山东省…