12 种杀虫剂对桉小卷蛾的室内毒力测定

采用浸叶法测定了12种常用杀虫剂对桉小卷蛾3龄幼虫的毒力．结果表明：阿维菌素对桉小卷蛾的毒力最大,其‰为0．040mg·L^-1;氰氟虫腙对桉小卷蛾的毒力最小,‰为469．307mg·L^-1．12种杀虫剂对桉小卷蛾的毒力表现为阿维菌素〉氯虫·噻虫啉〉毒死蜱〉乙基多杀菌素〉顺式氯氰菊酯〉氯虫苯甲酰胺〉茚虫威〉吡虫啉〉氟虫双酰胺〉杀虫双〉虫螨腈〉氰氟虫腙．以氰氟虫腙为标准药剂,桉小卷蛾对阿维菌素的敏感性最高,相对毒力指数为11732．675;氯虫·噻虫啉、毒死蜱、乙基多杀菌素、顺式氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺、茚虫威次之,相对毒力指数分别为1130．860、717．595、619．956、607．124、373．355、272．220;其余4种杀虫剂的相对毒力指数均小于100,其中,桉小卷蛾对虫螨腈最不敏感,相对毒力指数仅为1．160．     

植物油替代二甲苯配制的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油对天敌的影响

[目的]了解新型植物油药剂对非靶标生物天敌安全性的影响。[方法]采用试管药膜法和接触法,测定棕榈油、松树油2种植物油和二甲苯为溶剂分别配制的1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油对2种天敌的急性毒性。[结果]与二甲苯配制的1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油相比,2种植物油分别配制的1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油都提高了对小菜蛾绒茧蜂(Cotesia plutellae)、欧洲玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)的毒性。[结论]2种植物油1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油都是极具开发价值的新型环保农药。     

猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

用PCR法扩增猪圆环病毒1型（PCV1）全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalI酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1／G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）在病毒感染细胞中检出病毒抗原,其抗原性仅与PCV1／Cap蛋白单价特异性抗体发生反应,而与抗PCV2／Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalI酶切位点,可用PCR结合限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,病毒滴度达10^4.8 TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆,为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆.培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达107.5TCID<,50/mL.采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50 nm～55 nm.分离株Nsp2基因序列中第483位和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株.该毒株Nsp2基因序列比较发现,经细胞传40代后第3 115位核苷酸处插入12个碱基序列(GAGATCGCCTTT).用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1.0×104.5TCID<,50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9 d～12 d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10).研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础.     

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株（Sf-21）接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2＋亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

猪流行性腹泻灭活疫苗的研究

用猪流行性腹泻(PED)沪毒株研制氢氧化铝灭活疫苗.接种途径为后海穴位。以0.1ml/头主动免疫接种3日龄仔猪,保护率为77.28%;以0.5ml/头主动免疫接种3～22日龄仔猪,保护率为85%;以3ml/头被动免疫接种妊娠母猪,其所产3日龄仔猪的保护率为97.06%。接种疫苗后14天开始产生免疫力。免疫期可达6个月.疫苗在室温(19～26℃)保存226天仍保持较好的免疫原性.     

猪流行性腹泻灭活疫苗区域性试验

应用猪流行性腹泻灭活苗在9个省、市、区40多个猪场进行了区城性试验、共预防接种10.3万余头猪,与实验室试验结果是一致的,取得了较好的效果。在疫苗的试用中,要先进行定性诊断,并注意混合感染及适时的使用疫苗。     

兔出血症病毒结构蛋白及其降解产物的分析

采用弗里昂１１３抽提结合庶糖梯度密度离心法从人工感染兔出血症病兔肚脏组织中纯化ＲＨＤ病毒，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＲＨＤＶ由一种结构蛋白构成，分子量为６０ＫＤ，称为ＶＰ６０。应用抗ＲＨＤＶ单克隆抗体进行免疫印迹试验表明，ＶＰ６０可发生蛋白降解，其产物有３８ＫＤ、２８ＫＤ和２６ＫＤ几种多肽成分。     

传染性喉气管炎病毒在鸡胚肾细胞上的增殖特性

用电镜对鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）强毒（王岗株），弱毒（疫苗株）感染鸡胚肾细胞进行了观察。观察到一些特殊的毒浆结构、管状结构及呈“二分裂相”的核衣壳结构，探讨它们形成的可能机制和功能，描述了核内、胞质中核衣壳获得囊膜过可能过程。发现ＩＬＴＶ可能存在胞质装配途径。通过电镜手段比较了强、弱毒株正在感染细胞内增殖差异情况。     

猪传染性胃肠炎免疫的研究 Ⅰ.猪传染性胃肠炎弱毒株的培育

当培养液中加二甲基亚砜处理细胞的方法,已使27—4代华毒株强毒适应于胎猪肾细胞,并传至165代。自92代进行了5批克隆纯化,并自116代开始选直径1mm以内小空斑传代。第100代以后的病毒度为10~(4.67)～10~(6.0)TCID50/0.3ml。以鼻内途径免疫接种的母猪中和抗体价最高,持续期最长可答13个月,三日龄哺乳仔猪主动免疫的安全性为76.9～94.3％,被动免疫的保护率可达97％以上。第120及135代毒分别作猪体连续传代5及6代,均未见毒力增强。接种102代毒的后备猪群有28.2％水平感染。以5ml剂量经肌肉、鼻内途径接种三头母猪,免疫持续期可达两产。几年来在几个大型养猪场试用证明,本弱毒安全有效,收到了防制本病的效果。