玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR 检测方法的建立与应用

【目的】由大斑突脐蠕孢（Exserohilum turcicum）和玉蜀黍平脐蠕孢（Bipolaris maydis）引起的玉米大斑病和小斑病是玉米生产上重要的叶部真菌病害,本研究旨在建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和有性生殖研究提供技术方法。【方法】根据GenBank中已登录的玉米大斑病菌（登录号MAT1-1：GU997138和MAT1-2：GU997137）和小斑病菌（登录号MAT1-1：X68399和MAT1-2：X68398）交配型基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计2种病原菌交配型多重PCR检测特异性引物,采用单因素法对引物的退火温度以及扩增程序中延伸时间和循环数等重要参数进行优化,建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,并对2种病原菌的交配型多重PCR检测灵敏度和特异性进行检验。同时,对田间采集的129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌单孢菌株的交配型进行多重PCR检测,以明确建立的交配型多重PCR检测方法的适用性。【结果】建立的多重PCR方法和设计的交配型特异引物StMAT01-2F/R、StMAT02-3F/R、ChMAT01-3F/R和ChMAT02-2F/R可分别扩增出MAT1-1、MAT1-2型菌株大小为816、132 bp（大病斑菌）与490、136 bp（小病斑菌）的特异性目的条带。25 μL多重PCR扩增体系：2×Multiplex PCR Mix 12.5 μL,引物各10 pmol,DNA模板100 ng,退火温度为57.2℃（大病斑菌）和55.0℃（小斑病菌）,35个循环。该多重PCR对玉米大斑病菌MAT1-1、MAT1-2型单孢菌株的检测灵敏度分别为0.1、0.01 ng基因组DNA,而对玉米小斑病菌MAT1-1、MAT1-2交配型的检测灵敏度均为0.1 ng基因组DNA。该交配型多重PCR检测方法对玉米大斑病菌和小斑病菌特异性很强,能够很好地区分玉米大斑病菌和小斑病菌相应的近缘种和14株其他真菌菌株。不同地理来源的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型检测结果表明,该多重PCR能够准确地检出129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌的交配型,且检测结果与随机抽取的菌株杂交验证结果完全吻合。【结论】构建的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法灵敏度高、特异性好、操作简便,能够准确、快速地检测出玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和监测及有性生殖研究提供了可靠的技术方法。     

关于大棚油桃树发生火灾损失价值的鉴定案例

此案,是被告小学校的锅炉烟囱火星飘落到原告大棚上所引发的一起火灾经济损失纠纷案件。在火灾发生时,原告及时报警,消防机关及时灭火,公安机关接案侦查破案,作出发生火灾原因认定书。在此期间,原告查清大火烧毁大棚设施和油桃树损失基本情况,并向人民法院提交起诉状,依法维权。经人民法院鉴定委托,对原告大棚及棚内栽培的油桃树烧毁损失情况进行全面勘验调查和鉴定评估工作。     

玉米大豆间作种植密度耦合数学模型及其优化方案研究

云南省大豆的种植主要以与玉米间作为主,适宜的种植密度是获得高产的前提,为研究种植密度对群体产量和经济产值的影响,找到最佳种植密度组合。采用二次饱和D-最优设计,分别在云南嵩明县（A）、会泽县（B）和鲁甸县（C）等3个点进行试验。研究了玉米和大豆种植密度对群体产量和经济产值的影响,并分别建立二元二次数学模型。结果表明：玉米和大豆密度对间作群体产量和经济产值影响显著,均呈凸抛物线型变化,在低密度水平下,群体产量和经济产值随密度的增加而增加。通过模型解析表明,玉米+大豆密度组合分别为64 110株/hm ²+147 013株/hm ²（A）、63 068株/hm ²+147 116株/hm ²（B）、64 059株/hm ²+145 077株/hm ²（C）时,各试验点可分别达到最高群体产量。玉米+大豆密度组合分别为62 909株/hm ²+149 852株/hm ²（A）、61 499株/hm ²+151 807株/hm ²（B）、62 762株/hm ²+147 108株/hm ²（C）时,各试验点可分别达到最高产值。经模拟得出,在本试验条件下,各试验点玉米大豆间作群体产量≥12 270kg/hm ²、经济产值≥24 000元/hm ²的最佳密度组合分别为玉米59 251~66 437株/hm ²、大豆140 075~161 495株/hm ²（A）,玉米58 927~65 366株/hm ²、大豆144 159~169 203株/hm ²（B）,玉米58 821~66 703株/hm ²、大豆139 315~154 886株/hm ²（C）。合理的密度搭配能有效提高群体产量,获得较高经济产值。     

广播电视安全播出技术的维护

近些年,科技技术的快速发展推动了广播电视产业的进步,广播电视的规模得到了很大程度的扩大。但是,随之产生了广播电视安全运行维护管理的问题。尤其是近期,人们对广播电视安全播出提出了新的要求,所以广播电视安全播出技术维护面临的问题和挑战也是与日俱增。因此,广播电视安全播出技术的维护与管理要给与充分的重视,从而确保广播电视的正常运行。本研究简单介绍了广播电视安全播出的内容,同时针对这些内容对广播电视安全播出技术进行维护提出了相应的措施。     

避雷器的选型和分析

探讨电压等级6~110kV的避雷器参数选择。介绍了碳化硅阀式避雷器、金属氧化物避雷器和避雷器的安装位置,并特别分析了旋转电机的避雷器的选用及安装位置。通过6~110kV的避雷器参数的具体计算,得出了优先考虑系统中性点直接接地方式为直接接地或接地故障切除时间为10s以内的运行方式;如果系统中性点接地方式允许带接地故障运行,推荐采用串联间隙金属氧化物避雷器的结论。     

家蚕彩色茧的研究进展

家蚕是一种产业化生产的经济昆虫,彩色茧的开发与产业化利用,有望为丝绸业带来新的绿色活力。对家蚕色素的吸收和转运机制,彩色茧的色素形成和调控机理,培育家蚕优良彩色茧品种、利用生物工程手段培育彩色茧、色素添食法获得彩色茧方法及其资源综合利用等方面进行了综述,为有效利用家蚕彩色茧的研究提供参考。     

蛋种鸡初次人工授精如何避免输卵管炎症

<正>现在笼养种鸡使用人工授精技术较为普遍,人工授精技术不仅可以减少饲养公鸡的费用和场地,还能提高受精率,增加养殖利润。但在实际生产过程中,如果操作不当,初次人工输精会引起鸡的输卵管炎、腹膜炎等疾病,造成不必要的经济损失。下面简单谈谈蛋种鸡初次人工授精时如何避免造成鸡的输卵管炎症。1蛋种鸡人工输精前准备1.1对所有公鸡进行白痢检测,阳性一律淘汰1.2训练1.2.1种公鸡在使用前3~4周分开单笼饲养,便于管理。1.2.2使用前2~3周开始训练公鸡,将     

小型农田水利工程中河道的治理与对策

水利是农业的基础,也是农业的命脉,在我国这样一个农业大国,而且是水资源分布不均衡的国家,兴修水利以保证农业生产的正常运行十分必要。水利工程设施的标准直接影响到农业生产的稳定与提高,但现阶段,由于方面的原因,我国水利工程建设中仍存在"抓大放小"的情况,也就是只注重大型水利工程的建设,忽视了小型农田水利建设,在"最后一公里"建设方面没能真正重视起来,以致于在一些地方,对于农田的河道管理及维护方面出现了诸多问题,严重影响了农业生产的稳定与提高,本文对此进行分析,并提出了治理的对策。     

东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达

本试验旨在通过克隆东北虎γ-干扰素(IFN-γ)基因,研究其分子特征并预测蛋白生物学功能,为后续研究干扰素抗病毒活性做前期准备。通过RT-PCR从ConA诱导过的东北虎血淋巴细胞中扩增东北虎IFN-γ基因并测序,应用生物信息学方法进行序列分析。结果表明:东北虎IFN-γ编码区由504个核苷酸组成,共编码167个氨基酸,蛋白相对分子质量为19.59 ku,等电点为9.03,所编码的蛋白为碱性亲水性蛋白,其中前23个氨基酸可能为信号肽,IFN-γ编码蛋白保守结构域为IFN-γ超家族,且存在跨膜结构,其中1-6位氨基酸为胞内区域,7-28位氨基酸为跨膜区域,29-167位氨基酸为胞外区域;IFN-γ编码蛋白二级结构主要以α-螺旋(58.08%)和无规则卷曲(33.53%)为主,存在5个潜在的B细胞抗原表位,3个潜在的N-糖基化位点;分子进化分析显示,东北虎IFN-γ与GenBank上发表的东北虎、非洲狮、金钱豹、美洲狮、猎豹、家猫、加拿大猞猁、野猪等的核苷酸相似性为80.4%~99.8%,氨基酸相似性为70.5%~100%,东北虎IFN-γ与非洲狮、金钱豹亲缘关系最近,美洲狮、猎豹、家猫、猞猁次之,野猪最远。通过合成改造后的东北虎IFN-γ基因,构建能表达IFN-γ蛋白的重组质粒pPIC9K-IFN-γ,将其导入高效表达系统-毕赤酵母中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达蛋白的分子量约17.8 ku,与预期大小相符,表明东北虎IFN-γ成功表达。     

红薯贮藏烂薯原因及防控技术

乡文章阐述了红薯贮藏发生烂窖的原因。大棚窖对红薯种薯、商品薯贮藏的关键技术，收挖、入窖、窖内管理的整个过程，以及注意事项，贮藏期监测，病虫鼠防治等。