Generation of monoclonal antibodies specific for ORF68 of koi herpesvirus

Outbreaks of koi herpesvirus (KHV) infection in carp are still a serious problem worldwide. KHV is closely related to other two cyprinid herpesviruses, pox herpesvirus (CHV) and haematopoietic necrosis herpesvirus (CyHV-2) in goldfish. In this study, two major KHV antigenic proteins (ORF62 and ORF68) were identified by immunoscreening using a KHV-specific polyclonal antibody, and then monoclonal antibodies were generated for immunodiagnostic studies. After screening hybridoma cells, one mAb against ORF68 (mAb-7C6) was obtained but no mAbs against ORF62. mAb-7C6 specifically reacted with a lysate of KHV-infected koi fin cells (KF-1 cells) but not with lysates of CHV- or CyHV-2-infected KF-1 cells in an immuno-blotting analysis. Similar results were shown in the following tests: (1) a indirect fluorescent antibody test using infected KF-1 cells and (2) an immunohistochemical investigation by fast red stain (infected liver) or FITC detection (infected spleen). These results suggested that mAb-7C6 specifically reacts with KHV ORF68 protein.     

锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测方法的建立

本文根据锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus,KHV)保守的DNA聚合酶(Sph)基因,设计一组单交叉扩增引物,以构建的Sph基因重组质粒作为标准DNA模板,采用单交叉引物等温扩增技术(Single cross priming amplification,SCPA)进行扩增及优化反应体系,并结合核酸试纸条技术(Nucleic acid test strip detection method),建立了快速可视化检测锦鲤疱疹病毒的单交叉引物等温扩增检测方法(KHV-SCPA)。KHV-SCPA法可在63℃下60min内实现循环扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,可特异性地检测出KHV,灵敏度较之常规PCR方法提高约1000倍。结合核酸试纸条检测技术,在3~5min内可对反应产物进行可视化检测。KHV-SCPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于锦鲤疱疹病毒的现场快速检测中,为锦鲤疱疹病毒病的准确快速诊断和有效防控提供了技术支撑。     

日本锦鲤池塘高效养殖效果分析

日本锦鲤为一种大型观赏鱼类,贵州省水产研究所进行了日本锦鲤池塘高效养殖试验,结果表明:经过145 d的饲养,平均尾重从4.68 g增长至126 g,尾日增重0.837 g/(尾.日)。每667m2净产量670 kg,平均成本7 405.6元/667m2,纯收入为7 958.65元,较常规的大宗水产品(如鲤鱼等)养殖增收4 978.09元/667m2,投入产出比达1∶2.07。池塘高密度养殖日本锦鲤经济效益较好。     

葡萄糖酸铬对锦鲤生长、部分血液生化指标及肝胰脏抗氧化指标的影响

为研究饲料中葡萄糖酸铬添加量对锦鲤Cyprinus carpio生长、部分血液生化指标和抗氧化指标的影响,选取体质量为(4.18"0.38)g的锦鲤进行为期8周的饲养试验,试验鱼共525尾,随机分成7组,每组设3个平行,分别投喂添加不同含量葡萄糖酸铬的试验饲料,其中Cr3+含量分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/kg(饲料)。结果表明:在葡萄糖酸铬添加量为0.4 mg/kg时,锦鲤增重率(BWG)、特定生长率(SGR)和蛋白质效率(PER)显著升高(P0.05),饲料系数(FCR)显著降低(P0.05);添加葡萄糖酸铬能显著提高锦鲤血清中总蛋白(TP)含量(P0.05),血糖(GLU)含量在葡萄糖酸铬添加量为0.4~1.6 mg/kg时显著降低(P0.05),甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量在葡萄糖酸铬添加量为0~0.4 mg/kg时无显著性差异(P0.05),添加量超过0.8 mg/kg时TG和TC含量显著高于对照组(P0.05);锦鲤肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-PX)活力均随葡萄糖酸铬添加含量的升高呈先升高后降低的趋势,最高值分别出现在0.4、0.8、1.6 mg/kg葡萄糖酸铬添加组且显著高于其他组(P0.05),丙二醛(MDA)含量在葡萄糖酸铬添加量超过0.4 mg/kg时显著升高(P0.05)。研究表明,在饲料中添加葡萄糖酸铬能促进锦鲤生长,降低血糖含量,提高肝胰脏抗氧化能力,以增重率为指标,根据折线模型得出锦鲤饲料中最适Cr3+含量为0.24 mg/kg(饲料)。     

锦鲤酪氨酸酶基因序列分析及在不同锦鲤品系的组织表达

为了解色素控制基因与体色分布的关系,实验用分子克隆技术得到了锦鲤酪氨酸酶(tyrosinase, Tyr) cDNA 基因序列, 并利用半定量PCR的方法分析了酪氨酸酶基因在锦鲤不同品系和组织中的表达差异。实验得到了长约1 779 bp锦鲤酪氨酸酶cDNA基因, 其包括长1 608 bp开放阅读框, 编码535个氨基酸。cDNA、蛋白水平序列分析和系统发育分析都表明酪氨酸酶在鱼类间的保守性要高于鱼类与其他脊椎动物间的保守性。半定量分析研究显示,酪氨酸酶基因在皮肤、肝、心、脑和眼中都有表达, 其中眼部和黑色皮肤表达最高, 其次是脑, 红色和黄色皮肤, 肝和心的表达最低。不同品系同组织间眼、肝、心、脑的酪氨酸酶基因表达差异不显著, 但是在皮肤中有差异表达, 黑色皮肤表达最高, 其次是红色和黄色皮肤, 在白色皮肤中也有少量表达。酪氨酸酶基因在非黑色组织中有较高表达可能与存在多种形式酪氨酸酶有关, 也有可能非黑色素细胞能转化为黑色素细胞。