缢蛏新品种“申浙1号”ScHsc70 基因SNPs筛查与耐高温性状的关联性分析

为获取缢蛏ScHsc70基因单核苷酸多态性位点与耐高温性状的相关性,通过直接测序方法克隆了ScHsc70基因全长序列,长度为4 048 bp,包括6个内含子和7个外显子,编码区1 950 bp,从其外显子区域筛查到6个潜在的SNPs,分别命名为Rs1(g. 588 CT)、Rs2(g. 840 CT)、Rs3(g. 885 TA)、Rs4(g. 1233 AG)、Rs5(g. 1467 TG)、Rs6(g. 1482TC)。利用Sanger测序方法,对缢蛏新品种"申浙1号"耐高温群体和对照组群体潜在SNPs进行基因分型,遗传多样性分析结果显示,两个群体的多态信息含量(PIC)值在0.111 2～0.371 8之间,对照组群体的平均多态信息含量(0.267 0)高于耐高温群体的平均多态信息含量(0.236 5)。ScHSc70基因SNPs与耐热性状关联分析结果显示,Rs1、Rs3和Rs4的基因型频率和等位基因频率在对照组和耐高温群体之间存在显著性差异;单倍型连锁不平衡分析结果显示,ScHsc70基因SNPs可形成2个单倍体块,7种单倍型,其中CCT单倍型与耐高温性状显著相关;本实验发现,Rs2和Rs3处于连锁状态(r~2=0.86,LOD=25.56,Dx=1.0),可以作为缢蛏与耐高温遗传育种的SNP标签。综上所述,Rs1、Rs3、Rs4和单倍型CCT均可作为缢蛏耐高温遗传育种的候选辅助分子标记,为后续的抗逆性相关SNPs筛选与功能验证奠定了理论基础。     

四种微藻对缢蛏稚贝暂养效果研究

采用实验生态学方法研究了小球藻、牟氏角毛藻、绿色巴夫藻和亚心形扁藻对缢蛏稚贝的暂养效果.结果表明:在20 d的实验时间内,4种单胞藻对缢蛏稚贝的暂养成活率为小球藻(0.91±0.05)＞亚心形扁藻(0.80±0.06)＞牟氏角毛藻(0.79±0.05)＞绿色巴夫藻(0.76±0.09),方差分析表明终末成活率并无显著性差异(P＞0.05).4组稚贝的仞始壳长无显著性差异(P＞0.05),但最终壳长差异显著(P＜0.05),就日生长率而言,绿色巴夫藻明显高于小球藻和亚心形扁藻(P＜0.05).牟氏角毛藻和小球藻之间差异显著(P＜0.05),其他各组问差异不显著(P＞0.05).因此,绿色巴夫藻和牟氏角毛藻对缢蛏稚贝的暂养效果优于小球藻和亚心形扁藻.     

缢蛏选育系F5的生长优势比较及育种效应分析

以6个缢蛏(Sinonovacula constricta)自然群体(浙江象山群体、浙江乐清群体、福建霞浦群体、福建长乐群体、江苏射阳群体和上海崇明群体)为材料,构建基础群体F_0,采用群体选育方法进行多代连续选育(选择强度2.063),比较了选育系F_5与对照群体的生长差异,并估计F_5的选择反应、现实遗传力和遗传获得。结果表明,F_5的卵径及受精率与对照组无显著差异(P0.05),但F_5的变态率、存活率及后期壳长生长明显优于对照组(P0.05);7~360日龄F_5壳长的选择反应、现实遗传力与遗传获得的变化范围分别为0.30~0.78,0.14~0.37和4.83%~42.18%,平均为(0.49±0.06),(0.23±0.08)和(26.49±11.73)%。研究结果表明,对缢蛏的连续多代选育是有效的,可以明显提高其存活能力和主要经济性状。     

急性pH和碳酸盐碱度对缢蛏存活率、Na+/K+-ATPase活性及血淋巴吞噬能力的影响

采用静态毒理学实验方法,分析了2种规格缢蛏(小规格SSc和大规格LSc)在pH和碳酸盐碱度(C_A)急性胁迫条件下的存活率,Na~+/K~+-ATPase(NKA)活性以及血淋巴的吞噬能力。结果显示,当C_A浓度为2.5 mmol/L、pH值为7.5～9.5时,2种规格缢蛏的存活率均接近100%;当pH值大于9.5时,2种规格缢蛏的存活率均显著下降。当C_A浓度为0～44.58mmol/L、pH值为9.0～10.0时,随着C_A浓度的上升,缢蛏的存活率明显下降;在pH值为9.5条件下,LSc的鳃组织NKA活性,随着C_A浓度的上升而升高,LSc血淋巴的吞噬能力随着C_A浓度的上升而下降。由此可见,缢蛏在高pH或高C_A下表现出较强的耐受性,但高pH和高C_A协同胁迫下对缢蛏的存活率具有较大的影响,研究结果为进一步探索缢蛏在盐碱地的养殖提供了一定的理论参考。     

低温无水保活对缢蛏活性氧代谢、糖原及乳酸的影响

为探究无水保活期间双壳贝类活性氧代谢、糖原及乳酸的变化，以缢蛏(Sinonovacula constricta)为试验材料，将缢蛏分别在4 ℃、10 ℃和15 ℃下无水保活，测定其存活率、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性、过氧化氢酶(catalase，CAT)活性、还原性谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、过氧化氢(hydrogen peroxide，H₂O₂)含量、糖原及乳酸含量。结果显示，保活前3 d各组缢蛏均维持90 %以上的存活率；保活7 d后4 ℃组存活率仍可达到84 %，高于10 ℃组的67 %，15 ℃组存活率最低，仅为52 %。在整个无水保活期间，4 ℃组缢蛏SOD活性、CAT活性以及GSH含量均显著高于同时期其他各组(P<0.05)；在保活后期，相较于其他处理组，4 ℃组缢蛏有着显著最低的MDA含量和H₂O₂含量 (P<0.05)；此外，保活1～3 d时10 ℃组缢蛏体内糖原含量下降幅度仅有3.7 %，为各组最低；随着保活时间的延长，各组缢蛏体内的糖原含量持续减少，乳酸含量则不断增加，且同时期4 ℃组缢蛏比其他各组糖原消耗量更少，乳酸积累的速率也更慢。以上结果表明，在缢蛏短途运输(2 d)时，10 ℃和15 ℃能维持缢蛏较高的存活率，是较适宜的保活温度；而4 ℃在保活后期能有效地诱导了缢蛏机体SOD活性、CAT活性和GSH含量的增加，同时抑制MDA和H₂O₂的含量，并减缓糖原的消耗和乳酸积累的速率，具有更好的保活效果，更利于缢蛏的长途运输(7 d)。     

山东缢蛏人工繁育试验及高盐对幼虫生长的影响

研究了山东地区缢蛏人工繁育过程及盐度对幼虫生长的影响。结果发现，山东地区能够顺利培育缢蛏苗种，其受精卵在23℃条件下发育24 h便可进入D形幼虫阶段，浮游期约为8 d,每天生长约15μm,变态后生长速度稳步加快；将幼虫在14、21、28盐度梯度下培育发现，随着盐度的升高，其壳长生长速率显著下降(P<0.05)。该研究结果可为山东地区开展缢蛏人工繁育提供参考。     

浙江缢蛏群体糖原含量变化与gys基因多态性的关联分析

为了探讨缢蛏糖原含量与糖原合酶基因(sc-gys)的特性及其用于分子标记辅助育种的可行性,实验检测了浙江缢蛏群体糖原含量的周年变化,克隆获得糖原合酶基因的cDNA全长序列,分析其在不同组织、不同月份的表达差异,并进一步筛选出与糖原含量相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点。结果显示,养殖缢蛏在2—6月糖原含量较高,4月达到最大值。sc-gys基因的cDNA全长为2 402 bp,开放阅读框为2 136 bp,编码711个氨基酸。荧光定量PCR结果显示,sc-gys基因主要在外套膜和足中表达,其不同月份的表达水平与糖原含量周年变化规律一致,4月表达量显著高于其他月份,表明该基因与糖原合成关系密切。在"甬乐1号"品种和台州野生群体sc-gys基因的外显子区共筛选到2个与糖原含量相关的SNP位点,且两位点之间没有连锁不平衡,优势基因型组合个体的糖原含量比群体均值提高11.8%,这些位点和优势基因型组合可为缢蛏糖原含量的遗传改良提供候选标记。