辽宁省仔猪病毒性腹泻的病原学调查

为了解辽宁省仔猪病毒性腹泻病原的流行情况,从而制订有针对性的防控措施,采用RTPCR方法对2013年4月份至2014年3月份辽宁省9个市采集的228份腹泻病料进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRo V)的检测,根据采集病料的时间和地点进行统计。结果显示PEDV和TGEV的阳性率分别为37.72%和15.79%,说明辽宁省仔猪病毒性腹泻主要病原是PEDV,其次是TGEV;PEDV和TGEV在辽宁省感染分布广泛,污染程度较高,并且全年持续存在。     

副猪嗜血杆菌病的诊疗报告

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)病是一种表现为多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等多种病症的猪传染性疾病,由具有多种血清型的革兰氏阴性杆菌——副猪嗜血杆菌引起。世界各主要养猪国家和地区都有关于该病流行和暴发的报道。该病常表现为散发性和继发性发病,当环境发生变化时或引起免疫抑制的因素存在时,会导致发病[1-2]。近年来,由于现代化养猪流通范     

猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白原核表达载体的构建

为消除M蛋白抑茵现象使其得到稳定表达,本试验采用两种策略:一是将M基因截短得到编码M蛋白膜外区的基因序列(M'),构建重组表达载体pGEX-6p-M';二是将M基因改造,在其N端和C端同时加上GST基因,即构建pGEX-6p-M-GST重组表达栽体.     

猪流行性腹泻病毒M基因及其片段原核表达效果分析

将猪流行性腹泻病毒的M基因及编码M蛋白膜外区M基因片段（M’）分别亚克隆到原核表达载体pJLA605和pGEX-6p-1中，构建了重组质粒pJLA605-M、pGEX-6p-M-GST、pGEX-6p-M和pGEX-6p-M’，转化大肠杆菌后。探索了M蛋白在N端和C端不带有谷胱苷肽巯基转移酶（GST）、N端和C端均带有GST、只在N端带有GST以及只含有M蛋白的膜外区M’蛋白的表达情况。SDS-PAGE分析结果表明，N端和C端带有GST的pGEX-6p-M-GST和只含有膜外区M’基因的重组质粒pGEX-6p-M’获得了高效表达，经Bandscan5．0软件分析，其表达产物分别以融合蛋白GST-M和GST-M’形式存在，表达量分别为20％和45％。在对重组质粒pJLA605-M转化的大肠杆菌诱导表达过程中发现菌体生长的抑制现象，说明M蛋白对宿主菌有一定的毒性，进一步提取包涵体进行SDS-PAGE发现M蛋白以包涵体的形式得以表达。猪流行性腹泻病毒M蛋白的毒性作用可能与M蛋白具有的出芽功能有关，因而表现出对大肠杆菌的细胞壁的破坏作用。     

猪流行性腹泻病毒重组M蛋白膜外区的原核表达及鉴定

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)是引起猪呕吐、腹泻和脱水为主要临床症状特征的猪肠道传染病病原。尤其PED与猪传染性胃肠炎在流行病学、临床症状、病理剖检等变化上非常相似,给该病的快速诊断带来了一定困难。目前很多用于诊断PEDV的免疫学检测方法多以全病毒抗原或由其制备的抗体制剂为基础。而在生产实践中由于人工培养或提取大量PEDV的技术难度及经济成本均很高,因此极大地限制了利用天然PED病毒作为诊断试剂的应用。本研究的目的就是通过基因重组表达技术获得大量重组PEDVM蛋白进而将其应用于大规模…     

副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析

为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明:检测到的羊副结核分枝杆菌MAP0862基因与GenBank中K10菌株基因完全相同;重组表达载体pET28a-MAP0862经IPTG诱导表达出约40 ku的目标蛋白,与预期结果相符;Western-blot对比分析显示, MAP0862蛋白只与羊副结核阳性血清发生显色反应。说明MAP0862蛋白具有良好的免疫反应原性和特异性。     

猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体免疫梳检测方法的建立及应用

为建立猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体(SRV1)的快速检测方法,本试验采用基因工程技术制备SRV1的SRV1-30基因原核表达产物重组SRV1-30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法用于特异性检测实验猴血清中抗SRV1的抗体IgG。结果显示,最佳抗原包被量为100 mg/L;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴SRV1病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SRV1-30蛋白能够敏感地检测到1∶200倍稀释的SRV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对12份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。     

辽西地区猪伪狂犬病的病理学特征及病毒组织嗜性

应用PCR方法结合病理剖检和组织学观察对辽宁省辽西地区猪伪狂犬病流行病例进行诊断和病理学观察。结果表明:该地区猪伪狂犬病表现多种病理类型,包括脑炎型、脑炎兼内脏型、母猪繁殖障碍型和公猪睾丸炎型4种;主要特征性剖检病变:脑炎,肺、肝、肾、脾、淋巴结的出血和灰白色坏死斑点;主要特征性组织病理变化:非化脓性脑炎,间质性肺炎,肺、肝、肾、脾、淋巴结的局灶性核碎裂性坏死和出血。患猪临床死亡率很高,其病理变化发生于脑和多种内脏器官,并呈现显著的坏死和出血变化,免疫组化试验显示该株伪狂犬病毒(PRV)可侵袭脑、肺、脾等多种器官,说明该地区的PRV流行毒株属于强毒株,可能出现新的变异而毒力增强。     

戊型肝炎病毒RT-RPA快速检测方法的建立与应用评价

在建立高效快速检测猪肝样品中戊型肝炎病毒(HEV)的RT-RPA检测新方法并调查分析锦州市零售猪肝中HEV的污染情况。试验以基因4型HEV参考毒株的ORF2/3保守序列为靶序列设计符合RPA检测的特异性引物,建立HEV RT-RPA检测方法,并评估该方法的敏感性及特异性。使用该方法与目前HEV RNA检测金标准RT-qPCR方法对锦州市零售猪肝中的HEV RNA进行同步对比检测,并配合HEV IgM ELISA检测,最终综合统计分析锦州市零售的猪肝被HEV污染的情况。结果显示,本次研究成功建立了HEV RT-RPA检测方法,该方法在39℃恒温条件下30 min即能完成扩增,具有良好的敏感性和特异性。本次研究共收集猪肝样品358份,HEV RNA阳性检出率为0.6%(2/358),该结果与参考方法一致。HEV IgM阳性检出率为44.13%(158/358)。试验结果表明,说明锦州市零售猪肝中普遍存在HEV污染。虽然在屠宰上市后的猪肝样品中检测到HEV RNA的概率较低,但仍然提示本地生猪产业链中HEV流行普遍,因此需要做好公共卫生防范。     

一株猪源屎肠球菌的分离及其种属鉴定

为分离出可用作猪用微生态制剂的肠道益生菌株,本研究选择锦州市凌海大业乡生态猪场为试验采样点,采集10日龄左右健康仔猪肠道粪样12份。利用MRS琼脂培养基分离培养初筛目标分离菌株的形态特征和培养特性,再通过生理生化鉴定法和16SrRNA基因分子鉴定法,最终确定1株分离菌为屎肠球菌,并命名为LN/EF1312株,为后续肠道益生球菌的益生功能研究奠定了物质基础。