洛阳地区猪弓形虫病血清流行病学调查和PCR检测

为了解洛阳地区规模化养猪场和散养户猪弓形虫感染的情况,采集洛阳地区规模化养殖场和散养户母猪、育肥猪、保育猪血清样品410份,应用ELISA方法检测抗弓形虫IgG抗体。采集河南科技大学动物医院接诊的病死猪54头及洛阳某食品公司屠宰猪105头的肺门淋巴结,用PCR方法扩增弓形虫特异性遗传标记529 bp基因序列进行检测。结果发现,洛阳地区猪弓形虫血清抗体阳性率达35.4%,母猪、育肥猪和保育猪的分别是50.4%、34.5%、22.2%。病死猪PCR检测阳性率18.5%,屠宰猪阳性率6.7%。说明洛阳地区猪弓形虫的感染较为普遍。     

断奶仔猪小球隐孢子虫与Ⅱ型猪圆环病毒混合感染

对一群3月龄腹泻仔猪以常规组织病理学方法诊断出了小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),同时又以免疫组织化学方法证实了具有圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染。在有大量小球隐孢子虫寄生的肠道区域,其粘膜和粘膜下层存在大量被PCV2感染的细胞。小球隐孢子虫很少为断奶仔猪和生长猪的原发性肠道病原,而小球隐孢子虫和PCV2混合感染表明机体处于免疫抑制状态时提高了猪对隐孢子虫的易感性。     

基于ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列兔肝球虫PCR检测方法的建立

通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18S rRNA和28S rRNA进行序列比对分析,在18S rRNA 3’端和28S rRNA 5’端保守区设计艾美耳属通用引物,以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列,其大小为1178bp,其中ITS1序列长度为423bp,5.8S rRNA为155 bp,ITS2为600 bp,斯氏艾美耳球虫LY株ITS1/2序列高度变异,与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列同源性低于60%。然后在斯氏艾美耳球虫ITS1/2序列超变区设计种特异引物,建立了灵敏、特异的PCR检测方法。本研究结果将为兔球虫强致病种的临床诊断和揭示兔球虫种群遗传特征提供有效的分子工具。     

RSS培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的效果观察

目的利用实验生态学的方法,研究了结肠小袋纤毛虫在RSS培养基中种群生长情况。方法在不同米粉含量,不同血清含量,不同PH值的RSS培养基中接种相同量的结肠小袋纤毛虫滋养体,以及在同样的RSS培养基中接种不同量的结肠小袋纤毛虫,进行培养观察,计算其种群自然增长率及世代时间。结果米粉含量为20mg组的种群自然增长率最高;血清含量对种群自然,增长率影响不大,但在最高峰时,20％～25％血清组虫体密度最大;培养基在PH值为7．0和7．5条件下,虫体密度均在d4达到高峰,之后下降。结论培养基中适宜的米粉含量为20-30mg／安瓿,血清含量为20％～25％,最适宜的pH值范围为7．0～7．5。     

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。     

猪源隐孢子虫对仔猪致病性研究

为确定我国猪源隐孢子虫的危害性，采用光镜、扫描电镜和透射电镜等技术研究了猪源隐孢子虫sucp株对5日龄仔猪的致病性。结果：感染仔猪出现水样腹泻和脱水，粪便中混有肠黏膜碎片，潜伏期为3～5d，排卵囊持续期33-43d，虫体寄生于盲肠、结肠和直肠，并且盲肠和结肠杯状细胞增生，有炎性细胞浸润，结肠和直肠黏膜微绒毛萎缩、倒伏和脱落。结果表明sucp株对新生仔猪有一定致病性。     

犬蛔虫及钩虫感染致死的病例报告

1 发病情况和临床症状 黑背犬，雄性，年龄4个月，体重12kg。2005年8月6日来我院动物医院就诊，病犬精神高度沉郁，体质消瘦，体温40．3℃，被毛粗糙，便中带血、黑红色，口腔黏膜苍白，腹部松软，触诊不敏感，呼吸、心跳正常。主诉：这只犬5天前开始拉血便，呕吐，但能吃能喝，在当地宠物诊所就诊，诊断为犬瘟热，进行了抗犬瘟热血清注射以及对症治疗，但未见好转，后出现严重贫血，转来我院治疗。     

猪等孢球虫纯种卵囊扩增及生物学特性研究

应用单卵囊分离技术,获得猪等孢球虫纯种卵囊,给6头3日龄长大二元仔猪每头经口一次人工感染30个纯种猪等孢球虫孢子化卵囊,收集纯种后代,再对6头3日龄长大二元仔猪每头人工感染2 000个孢子化卵囊继代扩增.观察人工感染仔猪的排卵囊规律包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数（OPG值）和仔猪感染后的临床症状,进行了扩增卵囊的孢子化过程及形态结构观察和显微照像.结果表明,感染30个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在感染后第8d（8 days post-inoculation,DPI 8）从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 17～21,持续4～5 d,显露期15～18 d;感染2 000个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在DPI 5从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 8～13,持续4～6 d,显露期7～13 d.潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小;反之亦然.感染30个卵囊的仔猪无临床可见病征;感染2000个卵囊的仔猪呈现腹泻甚至黄色水样腹泻等明显症状.常规培养新收集的猪等孢球虫卵囊,2 h时胚孢子开始分裂,8 h分裂成2团,12 h形成2个孢子囊,20h开始形成子孢子并可见内残体,最早26 h卵囊完全孢子化;72 h时孢子化率达50%,96 h达80%.本试验扩增和继代扩增所获球虫卵囊,与亲本和文献报道的猪等孢球虫生物学特性相一致.     

百球清对仔猪等孢球虫病治疗效果观察

为了研究百球清（Toltrazuril）对猪等孢球虫病的治疗效果,用15 mg/kg.bw和7.5mg/kg.bw2个剂量的百球清口服治疗感染猪等孢球虫（Isospora suis）的7日龄仔猪,用粪便性状及腹泻持续时间、OPG值及排卵囊持续时间、增重率、死亡率及剖检病变等指标来判定百球清治疗效果。结果显示,首次给药后第5—6天给药组（Ⅰ、Ⅱ组）仔猪粪便性状全部恢复正常,首次给药后第3—4天Ⅰ、Ⅱ组仔猪粪便卵囊转阴率达100%,仔猪精神、食欲等明显好转,除Ⅰ组死亡1头外,组其余仔猪全部存活。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仔猪2周内增重率分别为65.1%、61.9%和34.7%,Ⅰ、Ⅱ组仔猪增重率提高显著（P<0.01）。而感染不给药组（Ⅲ组）仔猪首次给药后1周仍有少量卵囊排出,死亡2头,存活仔猪明显消瘦。表明百球清对仔猪等孢球虫病具有良好的治疗效果。     

表达黄色荧光蛋白和乙胺嘧啶抗性基因的转基因柔嫩艾美耳球虫的发育和致病性分析

为了研究外源基因表达对转基因柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)生物学特性的影响,对转基因球虫(TE1)和BJ株(野生强毒)的发育和致病性进行比较分析.结果显示,相对于BJ株,转基因球虫TE1株繁殖力下降约4倍,低剂量感染时致病性下降明显,但是高剂量感染时依然保持较强的致病性.另外,在荧光显微镜下发现,TE1有滋养体、第一代裂殖体/裂殖子、第二代裂殖体/裂殖子和大小配子体等内生发育虫体.孢子化卵囊内4个孢子囊并非全部表达黄色荧光蛋白.这些结果说明黄色荧光蛋白和乙胺嘧啶抗性基因的表达在一定程度上降低了转基因柔嫩艾美耳球虫致病性和繁殖力.在柔嫩艾美耳球虫合子减数分裂过程中,存在同源或异源染色体重组现象.