貉α-卫星DNA的克隆及序列分析

根据蓝狐、银狐及犬口_卫星DNA序列设计引物RSP1和RSP2在貉基因组中经PCR扩增获得5条分子质量大小不同的DNA片段,分别命名为RSP1～RSP5,经克隆及测序获得14个RSP序列;序列分析表明,除RSP4外,同类RSP片段的不同序列的长度差异很小且同源性大于90%,不同种类的RSP片段的长度差异很大,最大为1 815 bp,最小为495 bp,但所有序列的3'端约500 bp序列都具有高度的同源性,大于90%;经Blast检索,所克隆的RSP序列的部分区域与蓝狐、银狐及犬α-卫星DNA序列具有约75%的同源性,证明所克隆的RSP序列为貉α-卫星DNA序列,但其单体大小及亚重复的组成还需进一步研究.     

荧光标记通用引物在银狐微卫星基因分型中的应用

微卫星又称短串联重复序列(STR)或简单重复序列(SSR),由侧翼序列和串联重复核心序列组成,一般其串联重复核心序列长度为1～6 bp[1]。由于微卫星遗传标记具有多态信息含量高、基因组内分布广泛及呈共显性遗传等优点,因而已被广泛应用于遗传图谱的构建[2-3]、QTL定位[4]、亲缘关系鉴定[5]及遗传多样性评估等[6]。微卫星标记的基因分型主要     

家兔MC1R基因5'-侧翼序列的克隆及测序

毛色作为家兔的一种遗传标记,在品种特征、纯度鉴定及品种选育中均具有重要的作用。MC1R基因作为控制动物毛色的重要基因之一,其核苷酸序列多态性与多种动物的毛色表型相关。本试验根据GenBank中已知的兔MC1R基因核苷酸序列(登录号:AM180881)设计引物RMCR₁和RMCR₂,采用PCR-末端加尾法获得了兔MC1R基因5'端930 bp的未知序列,该序列与GenBank数据库中的已知序列同源性为99%。     

PPP1CB基因多态性与西门塔尔牛肉质性状相关性分析

选用134头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对PPP1CB基因的第一内含子进行检测,利用SPSS软件对该基因内含子1的多态性与肉质性状进行相关性分析。分析结果表明:PPP1CB基因的第一内含子第14 434bp碱基处存在C/T基因突变,该基因多态性与屠宰率呈显著相关,对其他性状的影响差异不显著。本文首次揭示了PPP1CB基因与牛肉质性状的相关性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。     

猪pGH基因真核表达载体的构建及其表达

从120日龄的长白猪脑垂体组织中扩增出pGH基因的cDNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-pGH重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组DNA进行鉴定,并将其转染PK15细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度.结果表明,成功构建了pEGFP-N1-pGH真核表达载体,为转基因猪的研究奠定了基础。     

家猪Fosmid基因组文库的构建

本研究采用蛋白酶K和苯酚抽提法提取基因组DNA，通过物理方法随机剪切DNA，经T₄DNA聚合酶和T₄多聚核苷酸激酶末端修饰，琼脂糖凝胶电泳回收大小为25~40 kb的片段，与pCC1FOS载体连接，噬菌体包装蛋白体外包装，转染大肠杆菌EPI300，构建了家猪Fosmid基因组文库。文库容量为8.50×10⁹CFU/ml，平均插入片段大小约25 kb，用家猪MC1卫星DNA做探针对文库进行初步筛选，获得含该卫星DNA的阳性克隆，该文库的构建为进一步筛选并研究猪卫星DNA序列奠定了基础。     

猪单条13/17罗伯逊易位染色体的显微分离与LA-PCR扩增

以13/17罗伯逊易位纯合子猪［2n=36，XY或XX，rob(13;17)］为试验材料，制备其有丝分裂中期染色体，利用显微分离技术对13/17罗伯逊易位染色体进行分离，并将单条染色体进行LA-PCR扩增，其扩增片段大小主要在200~2800 bp；对LA-PCR扩增产物用猪13、17号染色体近着丝点微卫星标记SWR1941和SWR1120与Southern杂交2种方法进行鉴定，结果表明LA-PCR产物来源于13/17罗伯逊易位染色体。该方法的成功建立为进一步从分子水平上研究家猪13/17罗伯逊易位所引起的表型效应的遗传机制以及筛选猪13和17号染色体上新的分子遗传标记奠定了基础。     

猪NCOA1基因PCR-RFLP多态性分析

[目的]研究猪NCOA1基因的PCR-RFLP多态性,为猪的分子育种和标记辅助选择提供理论依据。[方法]以81头山东寿光六和原种猪场的长白猪为研究对象,采取常规酚-氯仿抽提法从猪耳组织提取基因组DNA,以基因组DNA为模板进行PCR扩增获得440bp的NCOA1基因目的片段,利用限制性内切酶RsaⅠ对PCR产物进行酶切和琼脂凝胶电泳检测,并计算各等位基因频率和基因型频率。[结果]琼脂糖电泳检测酶切产物出现3种基因型：AA型（1条带：440bp）、AB型（3条带：440、282、158bp）、BB型（2条带：282、158bp）;基因型频率分别为0.54、0.43和0.03;A和B2个等位基因的基因频率分别为0.76和0.24。[结论]该研究猪群中,A为优势等位基因,AA基因型频率较高。     

13/17罗伯逊易位猪CMYA 3基因多态性分析

[目的]对13/17罗伯逊易位杂合子猪[2n=36,rob（13;17）]互交后代中的148个个体进行了CMYA3基因的多态性分析。[方法]采用PCR-RFLP方法。[结果]通过PCR扩增所有个体均能获得507bp的目的片段,PCR产物经限制性内切酶Bsh1236I酶切,琼脂糖凝胶电泳结果表明该基因在此群体中具有A和B2个等位基因,基因频率分别为0.699和0.301;具有AA、AB和BB3种基因型,基因型频率分别为0.615、0.169和0.216。因此,该试验猪群中,A为优势等位基因,AA基因型频率最大。[结论]该研究为13/17罗伯逊易位猪的分子育种和标记辅助选择提供理论依据。     

基于50K SNP芯片的夏洛来羊遗传结构及选择信号分析

为了分析中国夏洛来羊繁育群的遗传结构及其在引入我国后因环境和人为因素所发生的改变，试验利用绵羊50K单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)芯片对75只中国夏洛来羊进行了SNP检测，分析中国夏洛来羊繁育群的亲缘关系及家系构成；同时将50K芯片数据与24只法国夏洛来羊芯片数据进行整合，分析中国和法国夏洛来羊群体遗传多样性及选择信号。结果表明：75只中国夏洛来羊的状态同源(identity by state, IBS)遗传距离在0.149 8～0.337 1之间，大部分个体之间的遗传距离较远，划分为5个家系；与法国夏洛来羊相比，中国夏洛来羊群体遗传多样性相对较低；从75只中国夏洛来羊基因组中筛选到8个候选SNPs位点(chr5:96209980、chr3:102592698、chr16:27817793、chr19:41609459、chr10:25335663、chr10:25565841、chr22:30954815、chr1:116966008),这些位点分别在乳蛋白率、产奶量、乳脂率等产奶性状和最大日增重、体重、胴体重、体内脂肪含量等...