替米考星体内抑制猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒复制的效果研究

前期研究表明替米考星可在体外抑制猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的复制，为进一步了解替米考星在体内抑制PRRSV复制的效果，本研究选取健康仔猪为试验动物，使用添加替米考星的饲料和无添加的饲料分组饲养，仔猪饲喂7 d后人工感染PRRSV高致病性毒株，对比分析饲喂替米考星对猪感染PRRSV后的临床表现、体内病毒复制情况、病死率以及生长性能等方面的影响。结果显示，替米考星可显著抑制PRRSV在猪体内的复制，减轻发病症状，降低20%的病死率，并提升仔猪的日增重。相关结果可为临床使用替米考星防控PRRSV感染提供参考。     

稳定表达3种猪腹泻病毒嵌合抗原的CHO细胞系构建与鉴定

为构建稳定表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪胃肠炎病毒(TGEV)和猪Delta冠状病毒(PDCoV)主要抗原的CHO细胞系，为猪病毒性腹泻三联疫苗的研发提供基础材料，本研究将PEDV的S基因的COE区域、TGEV和PDCoV的S基因的受体结合区域(RBD),通过同源重组的方式进行融合，克隆到慢病毒表达质粒pLV-EF1a-IRES-Puro中，包装得到重组慢病毒。使用重组慢病毒感染CHO细胞，经过嘌呤霉素和单克隆细胞筛选，基因水平和蛋白水平表达验证，成功构建了稳定表达3种猪腹泻病毒抗原融合蛋白的CHO细胞系，为进一步研制PEDV-TGEV-PDCoV的亚单位疫苗奠定了基础。     

1～28日龄三穗鸭粗蛋白质需要量研究

本试验旨在研究日粮粗蛋白质水平对1～28日龄三穗鸭生产性能的影响，并估算三穗鸭的粗蛋白质需要量。试验采用单因子完全随机试验设计，挑选420只健康雄性三穗鸭，随机分为6个处理组，每个处理7个重复，每个重复10只，不同处理组试验鸭分别饲喂粗蛋白质水平为17%、18%、19%、20%、21%、22%的试验日粮。试验期为28 d。结果表明：日粮粗蛋白质水平对28日龄体重、平均日增重具有显著影响，且随着日粮粗蛋白质水平的提高呈线性升高（P <0.05），Ⅰ组体重、平均日增重最低，Ⅴ组的体重、平均日增重最高，Ⅴ组体重及平均日增重分别比Ⅰ组提高25.51%、28.49%。日粮粗蛋白质水平对1～28周龄三穗鸭料重比具有显著影响，且随着日粮粗蛋白质水平的升高呈线性降低（P <0.05），Ⅵ组的料重比最低，Ⅰ组的料重比最高，Ⅵ组比Ⅰ组降低了11.59%。日粮粗蛋白质水平对1～28日龄三穗鸭平均日采食量无显著影响（P> 0.05）。以日增重为评价指标，利用直线-折线模型估算1～28日龄三穗鸭的粗蛋白质需要量为18.75%。     

核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用

为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respir-atory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达的影响,以及过表达或敲减RPL12对PRRSV复制的影响.结果显示,PRRSV感染可上调Marc-145细胞中RPL12基因的表达.过表达RPL12可促进PRRSV的复制,而敲减RPL12可抑制PRRSV的复制.通过免疫共沉淀和共聚焦显微镜检测,进一步研究发现RPL12蛋白与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,并共定位于细胞质中.本研究首次发现了宿主蛋白RPL12能够促进PRRSV复制,并与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,为进一步研究PRRSV的感染与复制机制以及与宿主的相互作用提供了新的切入点,为抗病毒药物的研发提供了有益的探索.     

非洲绿猴FILIP1L真核表达质粒的构建及其抑制PEDV复制的研究

为探究FILIP1L(filamin A-interacting protein 1-like)蛋白对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的影响，以Vero细胞中提取的总RNA反转录的cDNA为模板，PCR扩增出FILIP1L基因，克隆到p3×FLAG-CMV-10真核表达载体上。过表达或沉默FILIP1L基因，通过免疫印迹和定量PCR检测FILIP1L蛋白的表达情况，并研究其抗病毒功能。结果：成功构建3×FLAG-CMV-10-FILIP1L重组质粒，转染后能够正常表达。PEDV感染Vero细胞后，FILIP1L基因的mRNA表达显著上调；过表达FILIP1L基因显著抑制PEDV的复制；下调FILIP1L的表达可显著促进PEDV的复制。综上，FILIP1L蛋白能够抑制PEDV在Vero细胞的复制，研究结果为寻找新的抗PEDV药物靶点和研发新型疫苗提供理论依据。