枯草芽孢杆菌B1⑥菌株胞外多糖的提纯和初步分析

以枯草芽孢杆菌B1⑥菌株为材料,在前期优化发酵条件和胞外多糖提取的基础上,经过DEAE-52柱层析,分离出两个胞外多糖成分,对其中含量较高的胞外多糖EPSI进行单糖组分分析。EPSI组分纸层析和气相色谱分析结果显示,EPSI不具有Glu、Gal、Man、Xyl、Rha、Sor和Fuc 7种单糖成分,含有少量Ara,成分较简单。这个研究结果可为枯草芽孢杆菌胞外多糖的功能研究提供参考。     

蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT - PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18 -T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析.结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95％,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927...     

蛹虫草固态发酵杜仲的工艺优化

为提高蛹虫草转化杜仲发酵产物中虫草素和松脂醇二葡萄糖苷的产量,并获得最优发酵条件,在预试验的基础上,通过Plackett-Burman实验,对培养基中虫草素和松脂醇二葡萄糖苷进行评价,筛选出显著因素,并通过最陡爬坡实验进一步确定较优组合,最后应用Box-Benhnken试验设计确定最优发酵条件。Plackett-Burman实验结果表明,添料(杜仲粉)量、培养时间、硫酸铵对蛹虫草转化杜仲固体培养具显著性影响;经响应面法优化后最佳培养基组成及发酵条件为:维生素E 4 g/kg,葡萄糖4 g/kg,硫酸铵8g/kg,初始pH8,添料(杜仲粉)量27%,接种量40%,培养温度25℃,培养时间18 d,优化后,虫草素和松脂醇二葡萄糖苷固体发酵单位产量分别达2.92、90.03μg/g,比优化前分别提高60.44%、52.90%,表明蛹虫草菌株B1 528能以杜仲为药性基质成分进行固体发酵,并影响主要活性成分的含量;响应面法用于蛹虫草转化杜仲的固体发酵优化效果显著。     

抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库的构建及筛选

为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。     

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A（SPA）,根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验（AGP）阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。     

凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析

为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肤基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RTPCR技术扩增抗真菌肤基因(guf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 by;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%.此研...     

应用间接血凝试验(IHA)诊断猪蛔虫病

以猪蛔虫抗原致敏绵羊红细胞制备检测猪蛔虫特异性抗体的间接血凝诊断试剂,与猪蛔虫抗体发生特异性凝集反应.结果表明,用间接血凝诊断试剂对3 000份猪血清进行现场检测,阳性率为30.00%;而琼脂扩散试验(AGP)的阳性率为13.00%,表明,间接血凝试验(IHA)比GAP敏感,间接血凝诊断试剂可用于猪蛔虫病的快速诊断.     

高效液相色谱法测定4种中药材乐果残留

采用高效液相色谱法测定4种常用中药材金银花、枸杞、吴茱萸、天仙子中的乐果农药残留.结果显示,在0～5.0mg/L浓度范围内,乐果加入量和峰面积间呈线性关系,回归方程为y=83.1x-12.7,R2=0.9893,相对标准偏差RSD为1.64%,平均回收率为97.03%,检出限为2.07μg/kg.表明采用高效液相色谱法测定中药材中的乐果农药残留方法简便、准确,所测数据对药材种植、药品生产和农药残留检测具有借鉴意义.     

黄连解毒汤对小鼠血清中Trp、Kyn、5-HT及粪便中短链脂肪酸代谢的影响

为了探讨黄连解毒汤对KM小鼠血清中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、5-羟色胺(5-HT)和粪便中短链脂肪酸代谢的影响,将KM小鼠随机分为空白对照组(16只)和黄连解毒汤组(16只),通过对小鼠灌胃黄连解毒汤,分别在干预7,14 d后,每组随机处死8只并分别采集粪便和血清样本,运用高效液相色谱法(HPLC)测定血清中Trp、Kyn和5-HT浓度,采用气相色谱法(GC)测定粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量。结果表明:与空白对照组相比,黄连解毒汤组小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸以及血清中Kyn、5-HT浓度均极显著升高(P0.01),而血清中Trp浓度无显著变化(P0.05)。说明黄连解毒汤对KM小鼠血清和粪便代谢有一定的影响。