短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析

S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出L.brevis的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示L.brevis样品在44~55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因, 经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。     

微小隐孢子虫p23基因在干酪乳杆菌中的表达及其表达产物的鉴定

应用DNA重组技术把微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)子孢子抗原p23基因克隆入表达载体pMG36e当中,成功构建了可在干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)胞浆中表达的重组载体pMG-p23。并以SDS-PAGE、Western blotting以及IFAT试验方法,分别在破碎菌体组分和活菌体当中鉴定p23基因表达产物并确定其在细胞中表达的位置。本试验为进一步构建分泌型或锚定型干酪乳杆菌(L.casei Zhang)活菌载体奠定了基础。     

用PCR技术快速鉴别肉质品

本研究以猪肉、羊肉和牛肉等不同生鲜肉细胞线粒体中提取DNA,设计合成引物,进行PCR扩增得到目的DNA片段,进行琼脂糖凝胶电泳,根据DNA片段的大小来判断肉种。结果表明：猪、羊和牛肉扩增产物DNA片段分别为443 bp、314 bp和271 bp,大小相差明显,分离明确,容易识别。并且3种动物DNA没有交叉反应,特异性较强。此方法能准确、快捷地鉴别出畜肉。     

鸡白介素-17 cDNA基因的克隆、序列分析及表达

用RT-PCR方法,分别以ConA体外刺激培养12、24、48 h的鸡脾脏淋巴细胞(SP)和经人工感染2次堆型艾美尔球虫(E im eria tenella)孢子化卵囊(约3.6×104个/鸡)的鸡盲肠扁桃体/肠上皮淋巴细胞(IELS)总RNA为模板,成功扩增出预计大小的鸡白介素-17 cDNA基因,并克隆入pM D 18-T载体,进行序列测定。测序结果显示其阅读框(ORF)为507 bp,与G enB ank上鸡IL-17基因已知序列(A J493595)BLA ST的比较表明:核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.4%和82.4%。将cDNA基因克隆入pET-32a质粒,构建了pET 32a-IL-17原核表达载体,IPTG诱导后表达出的融合蛋白大小为36 000左右。     

应用表达微小隐孢子虫P23的重组干酪乳杆菌建立微小隐孢子虫IFAT诊断方法

本试验旨在建立IFAT和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法.应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,用电转化方法将其转入干酪乳杆菌中,称为重组活干酪乳杆菌(含pMG-P23),以此为已知抗原,建立IFAT诊断方法.应用ELISA和IFAT方法检测来自内蒙古地区的508份牛血清、187份绵羊血清和197份山羊血清:其中ELISA方法在各种动物血清中阳性率依次分别为0.59%、5.88%和4.57%,而IFAT方法则为0.19%、5.88%和4.57%.2种检测方法阳性符合率在牛血清样品中为33.33%,在绵羊和山羊中则均为100%.试验结果表明,重组抗原P23具有良好的反应原性,2种诊断方法的结果基本吻合,显示出良好的一致性和敏感性,可在微小隐孢子虫病的诊断实践中推广应用.     

动物检疫监督管理工作中存在问题

<正>伴随着社会经济的快速发展和生活水平的提高,推动了畜牧业的发展进程。动物检疫监督管理工作直接关乎着动物疫病的控制情况和肉制品安全,它在畜牧业的发展中发挥着决定性的作用。近年来,伴随着安全事故的频繁发生,动物检疫监督管理得到了越来越多人的关注,然而,由于多种因素的影响,在动物检疫监督管理工作中仍然存在一定的问题。笔者将结合自身工作经验,浅谈动物检疫监督管理工作中存在的问题,并针对这些问题,提出了相应的解决对策,希望能     

牛微小隐孢子虫子孢子表面抗原p23基因的克隆及原核表达

从已构建的牛微小隐孢子虫子孢子cDNA文库中,用PCR方法扩增出子孢子表面抗原p23基因,将其插入到编码谷胱肽转移酶(GST)的质粒(pGEX-4T-2)多克隆位点,构建原核表达载体pGEX-p23。重组质粒经EcoRI/Sal I酶切、测序鉴定后转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达蛋白。结果成功构建了pGEX-p23原核表达载体,经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出分子质量为47kDa的GST融合蛋白,且该蛋白能与抗p23抗体发生特异性结合反应。本研究为进一步研究p23的生物学功能和临床应用奠定了基础。     

不同气候区4种典型地带性植被土壤水文功能比较

以中国生态系统研究网络长期定位观测的西双版纳热带季节雨林、鼎湖山亚热带常绿阔叶林、哀牢山中山湿性常绿阔叶林和长白山阔叶红松林为基础,分析比较4种森林类型土壤水文功能的差异。研究结果表明:土壤容重随土层深度增加而增大,土壤孔隙度、有效含水范围、饱和含水量和月均含水量随土层深度增加而降低;鼎湖山地表径流量及其占总降雨量的比例最大,哀牢山蒸散量及其占总降雨量的比例最大;4种森林类型0~50 cm厚度土壤最大吸水能力为哀牢山>鼎湖山>长白山>西双版纳,蓄水量则为鼎湖山>长白山>哀牢山>西双版纳。     

不同月龄乌珠穆沁羊骨骼肌中 Myostatin表达量的分析

为研究自然放牧乌珠穆沁羊成长过程中骨骼肌内M STN基因及其蛋白表达量的变化。分别采用实时荧光定量和ELISA技术测定乌珠穆沁羊生长过程中骨骼肌MSTN基因相对表达量和蛋白表达量。 MSTN基因相对表达量为6月龄＞3月龄＞9月龄＞1月龄＞12月龄＞18月龄,6月龄的基因表达量最高,与其他月龄之间相比有显著差异（P＜0．05）。1,3,9,12月龄之间基因表达量无显著差异（P＞0．05）。 MSTN蛋白表达量为1月龄＜3月龄＜6月龄＜9月龄＜12月龄＜18月龄,1,3,6月龄的表达量之间有显著差异（ P＜0．05）,9,12,18月龄的表达量之间无显著差异（ P＞0．05）。 MSTN基因相对表达水平1～6月龄之间有上升趋势之后又下降。 MSTN蛋白表达水平一直为上升趋势。