山东省猪瘟流行毒株E2基因主要抗原编码区序列差异分析

用RT-PCR方法对山东省猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的E2基因进行克隆,用DNAstar软件对获得的CSFV及已发表的CSFV毒株E2基因核苷酸和氨基酸序列进行了比较和分析,构建了CSFV遗传发生树.结果表明:扩增的12株猪瘟流行病毒的E2基因长度均为270bp,与预期大小一致;12株病毒株均属于1个组群中的2个亚群,其中,病毒株SDTA-1、SDTA-2属于同一个亚群,E2基因与疫苗株HCLV相比,核苷酸、氨基酸同源性分别为83.5%、88.9%,其余10株病毒株属于同一个亚群,E2基因与疫苗株HCLV相比,核苷酸、氨基酸同源性分别为80.5%～83.5%、82.2%～84.4%.     

新霉素阻断ELISA试剂盒的研制与应用

本研究旨在建立新霉素(Neomycin,NEO)免疫学检测试剂盒.以制备的抗NEO单克隆抗体(NEO mAb)为基础,建立阻断ELISA分析方法,组装新霉素阻断ELISA试剂盒,并对试剂盒的性能进行鉴定.结果表明,NEO试剂盒(NEO-kit)标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.990 3;检测范围为1.0～64.0μg·L-1,半数抑制浓度(IC50)为2.59 μg·L-1,灵敏度为0.75 μg·L-1,检测限为1.0 μg·L1.试剂盒除了和NEO阳性样品反应呈阳性外,与庆大霉素、链霉素、土霉素、沙丁胺醇、环丙沙星、二氟沙星、磺胺嘧啶及磺胺甲噁唑等其他药物均无交叉反应性.奶样、饲料样及肉样的平均添加回收率为89.50%、89.58%和87.92%;平均批内和批间变异系数均小于15%,而且批间变异系数小于批内变异系数;基质对NEO-Kit的检测结果影响比较小;NEO-Kit在4℃可保存6个月以上.试剂盒和HPLC-MS-MS对牛奶中新霉素回收率没有显著差异(P≥0.05).试剂盒和HPLC-MS-MS对饲料样检测结果也无显著差异(P≥0.05).本研究成功研制出敏感、特异、准确的NEO检测试剂盒.     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导血管内皮细胞融合

 猪链球菌2型（SS2）主要引起人和猪的脑膜炎，但其毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)对构成血脑屏障的微血管内皮细胞有何致病作用迄今不明。为此分离仔兔脾微血管内皮细胞（SMEC），纯化后用SV40-T抗原转化后用作试验的细胞模型。将单层SMEC和电泳纯MRP溶液共孵育，染色后，光镜观察，发现MRP可诱导SMEC发生两种典型形态学变化：致密细胞单层中出现巨大空洞而呈网状；空洞内有细胞融合，形成多核巨细胞，随后巨细胞核极度浓缩释出，巨细胞消失。研究结果表明， MRP单独足以破坏大脑的血管内皮细胞屏障。     

拟南芥钾吸收调控基因AtCIPK23、AtCBL9和AtAKT1农杆菌介导共转化甘蔗

本研究通过农杆菌介导方法将拟南芥调控钾离子吸收的三个重要基因At AKT1、At CBL9和At CIPK23共转化到甘蔗品种粤糖00-236中,以期提高甘蔗耐低钾能力。PCR分析结果表明共获得36份携带At CBL9、At CIPK23和At AKT1三个基因的转基因无性系;Southern blot分析结果表明外源At CBL9基因在甘蔗基因组中的拷贝数为2~5个;在钾离子浓度为200μmol/L的营养液中进行低钾胁迫试验,转基因品系的根系和地上部的平均钾含量分别比对照高37%和23%,叶片平均相对电导率比对照低6%,说明超表达At CIPK23、At CBL9和At AKT1显著提高了甘蔗耐低钾胁迫能力,降低了因低钾胁迫造成的质膜伤害,是创制耐低钾甘蔗种质的有效途径。     

甘蔗渣栽培平菇的配方优化

以甘蔗渣为栽培主料，添加不同类型氮源栽培平菇，研究不同配方对菌丝长势、生长速度以及子实体产量和生物转化率的影响。结果表明，硝酸铵为影响平菇生物转化率的主要因素，而硫酸铵和氨基酸对其影响不明显。配方1（A1B1C1），即硝酸铵1％、硫酸铵0．5％、不添加氨基酸时，平菇菌丝长势好，生长速度快，产量高，为甘蔗渣栽培平菇的最佳组合，生物转化率为57．6％。     

施肥水平对甘蔗/大豆间作体系中植株 生长及养分积累的影响

采用盆栽方法研究了不同施肥水平下间作对甘蔗和大豆生长的影响以及间作优势。结果显示：间作大豆的各项植株指标与单作大豆差异不显著,不施肥可以刺激单作和间作大豆根系的生长,增加大豆根瘤数和根瘤重,而间作甘蔗各项指标大多数显著低于单作甘蔗,在不施肥的情况下下降幅度加大,但总根长两者间差异不显著;间作甘蔗的氮、磷、钾积累量均小于单作的甘蔗,以钾的降低幅度最大,而间作大豆仅在不施肥的情况下磷、钾的积累量显著低于单作大豆,氮素在四种处理间差异不显著;两种施肥水平下间作的土地当量比（LER）均大于1,说明间作有明显的优势,并且间作的氮、磷、钾总养分累积量高于单作,由此可见甘蔗与大豆间作优势不是表现在个体上,而是表现在提高土地利用率上。     

用单克隆抗体展示猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白在茵体表面的形态和分布

用猪链球菌2型江苏分离株HA9801全苗免疫BMb／c小鼠，取其脾细胞和Sp2／0细胞融合，以电泳纯溶菌酶释放蛋白(MRP)为抗原，间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化，剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆，获得3株特异针对MRP的单克隆抗津细胞株3A3、4D5和6B4。将HA9801和HEp-2细胞共孵育，使细菌粘附于细胞表面，用3株MRP单克隆抗体联合介导FITC标记HA9801菌体表面的MRP，激光共聚焦显微观察，代表MRP的荧光图像显示，MRP是一线形表面大分子，一端锚定在细胞壁，另一端向空中伸展，其分布状态有单在和丛集2种。     

藏药甘青虎耳草总黄酮对小鼠抗炎作用的研究

目的:观察甘青虎耳草总黄酮的抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、棉球致小鼠肉芽肿模型,观察甘青虎耳草总黄酮对小鼠的抗炎作用。结果:甘青虎耳草总黄酮能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,甘青虎耳草总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制率分别为21.76%,65.29%和75.295%;明显抑制冰醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增强,并且能有效抑制小鼠肉芽肿的作用。结论:甘青虎耳草总黄酮具有明显的抗炎作用。     

猪链球菌2型MRP与FBPS部分片段串联基因的原核表达

根据猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)和纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)的基因序列,选取可能含有抗原决定簇的两片段,各设计合成一对引物,使之含有共同的酶切位点。通过T4DNA连接酶串联两片段,构建原核表达载体pET32a-mrp-fbps,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),经不同时间、不同温度,不同浓度IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳,表达约为80kD的融合蛋白。Westernblot结果表明重组蛋白可被SS2阳性血清所识别。证实串联表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,是重要的保护性抗原,本试验为进一步研究猪链球菌亚单位疫苗奠定了基础。     

奶牛肺外结核病的综合诊断与病原分离鉴定

为揭示牛型提纯结核菌素(PPD)检测阳性牛与剖检肺脏病变不吻合的真实原因,综合运用皮内变态反应(SIT)、比较变态反应(SICCT)、IFN-γ试验,以及牛型PPD点眼反应、ELISA抗体检测等5种免疫学方法,对我国西部5个奶牛场进行牛结核病综合诊断,然后对锁定的后期感染牛进行扑杀、剖检,采集病料进行病理学和病原学诊断。结果显示:用5种方法综合检测确诊的95头后期感染牛中,有84头(88.42%)剖检可见明显结核病变,其中12头(14.29%)的病变发生在肺和肺门淋巴结,72头(85.71%)的病变发生在肝、脾、肠系膜淋巴结等肺外组织器官;95头后期感染牛中,有54头病料培养阳性;阳性菌经Xpert MTB/RIF和Enigma鉴定,均为牛分枝杆菌。该研究结果表明:我国牛结核病存在肺结核和肺外结核两种,因而增加了牛结核病的诊治难度;牛结核病确诊仅靠单一检测方法十分困难,需运用多种免疫学方法进行综合诊断;该结果可以解释目前出现的检测阳性与肺部剖检病变结果不一致的困惑。