翘嘴红鲌精原干细胞的分离培养及鉴定

通过制作、观察翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)各生长阶段的精巢切片,确定翘嘴红鲌精原干细胞最佳分离时间。采用两步酶消化法分离其精原干细胞,并进行体外初步培养研究,最后通过碱性磷酸酶染色、干细胞标志基因Oct-4 RT-PCR扩增进行鉴定。结果显示:7月龄翘嘴红鲌精巢为分离精原干细胞的最佳时期,所分离的精原干细胞符合干细胞的形态、增殖及表达特征,且细胞碱性磷酸酶染色呈阳性,支持细胞碱性磷酸酶染色呈阴性,Oct-4基因表达呈阳性。     

不同冷冻液对鸡精原干细胞冷冻-解冻后存活力的影响

采用两步酶解和差异贴壁法分离、纯化鸡精原干细胞(SSCs),比较了6种冷冻保护液对其冷冻保存效果,结果表明:FBS浓度为10%时,10%DMSO与10%甘油解冻后细胞存活率分别为54.05%和37.49%,差异显著(P<0.05);以10%DMSO为冷冻保护剂时,FBS浓度从10%增加到20%,解冻后细胞存活率分别为54.05%和69.06%,差异显著(P<0.05);在冷冻液Ⅰ基础上,添加3种不同浓度的蔗糖溶液,解冻后细胞存活率分别为52.49%、47.65%和51.94%,三者之间差异不显著(P>0.05),且与冷冻液Ⅰ组差异也不显著(P>0.05);将解冻后细胞接种饲养层上培养,除甘油组外,SSCs均能增殖并形成AKP阳性集落,但10%DMSO加上20%FBS组细胞增殖速度和集落数优于其他组合,表明10%DMSO加上20%FBS为鸡SSCs最佳冷冻保护剂。     

不同促性腺激素对家兔超排效果的影响

超数排卵简称"超排",是以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子的过程,它既能提高良种母畜的繁殖潜力,又能为胚胎学、生殖生理学等提供一种研究手段[1].     

聚乙烯亚胺及睡美人转座酶对基因免疫效果的影响

基因免疫是指把外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组质粒DNA直接注射到动物体内,使外源基因通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,激活机体的免疫系统,引发特异的免疫应答以达到预防和治疗的目的[1].     

早期胚胎发育中基因调控的研究进展

早期胚胎发育过程中,有着许多影响因素的参与,这些因素或促进或抑制早期胚胎的生长分化。在着床前胚胎中,检测到很多基因的表达调控,都是与胚胎生长发育有关的基因,为信号转导所必需或编码生长因子或生长因子受体蛋白,或促使发育异常的胚胎发生凋亡,它们均对胚胎早期发育起着十     

多聚磷酸盐激酶(PPK)基因植物表达载体的构建

[目的]枸建融合表达PPK和绿色荧光蛋白的融合表达载体pCAMBIA1302-PPK.[方法]根据GenBank中登录的大肠杆菌PP基因序列(L03719)设计引物,以E.coli DH5α基因组DNA为模板,通过PCR扩增得PPK基因,然后用In-Fusion@HD Cloning Kit将PPK基因克隆到pCAMBIA1302载体的Nco Ⅰ酶切位点.[结果]序列测定结果显示,pCAMBIA1302-PPK含有约2.0kb的PPK基因片段,说明PPK基因已插入植物表达载体pCAMBIA1302的绿色荧光蛋白基因前.[结论]成功构建了融合表达PPK和绿色荧光蛋白的融合表达载体pCAMBIA1302-PPK.     

开菲尔粒中发酵优势菌混合发酵生产开菲尔饮品的研究

[目的]考察各菌株对酸乳各项发酵指标的影响,为开发稳定的开菲尔饮品生产工艺提供理论基础。[方法]采用从开菲尔粒中筛选获得的6株优势菌进行单菌及混合发酵,以1×104个/ml的接种量,分别接种单菌或多种菌以等比例混合至新鲜牛奶中,30℃培养30 h后于4℃储存10 h,测定各项发酵指标。[结果]利用2种菌混合发酵过程中,高加索乳杆菌与德氏乳杆菌混合发酵所得的酸乳风味最佳,高加索乳杆菌与肠膜明串珠菌混合发酵和肠膜明串珠菌与克鲁维酵母混合发酵的风味较好。3种菌混合发酵过程中,利用克鲁维酵母、乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌混合发酵所得的酸乳风味最佳,利用假丝酵母、乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌混合发酵以及利用克鲁维酵母、高加索乳杆菌和德氏乳杆菌进行发酵所得的酸乳风味较好。[结论]利用酵母菌和乳酸菌混合发酵能有效提高牛奶中脂肪的降解率,但是抑制发酵乳中芳香物质的产生。2种菌混合发酵条件下所得酸乳的乳酸含量及黏度显著高于3种菌混合发酵,这可能与菌的共生过程中各菌的生长、代谢之间的相互作用有关。     

聚磷激酶基因克隆及其植物表达载体构建

利用试剂盒法提取E.coli DH5α基因组DNA,根据GenBank中登录的大肠杆菌聚磷激酶(PPK)基因序列(L03719)设计引物,通过PCR扩增得PPK基因,然后将其克隆到pMD20-T Vector上并测序,测序结果与GenBank登录的序列相比对,同源性达99.9％.用限制性内切酶XbaⅠ、BamH Ⅰ将目的片段和植物表达载体pBI121进行双酶切,T4连接酶连接,然后转化到E.coli BL21感受态细胞,获重组植物表达载体pBI21-PPK,从而为研究转PPK基因植物的聚磷能力奠定基础.     

6株浮萍的污水处理能力与淀粉积累能力的差异性分析

收集了浙江省不同地方的6株浮萍(HN-YG-3、HZ-YXY-1、HZ-HZY-2、HA-LP-4、HA-HSD-5、ZS-DH-6)用于污水处理,分别在0、5、10、15、20 d时测定各水样的pH值、溶解氧(D0)、铵氮(NH4+-N)、硝态氮(NO3--N)和亚硝态氮(NO2--N),并比较了6株浮萍在处理污水20d以及在液体培养基纯培养条件下的淀粉积累能力.结果表明:各水样pH值和溶解氧含量总体上都比对照组低,且差异显著.铵氮在经浮萍处理15 d时,含量均上升,其中对照组和HZ-YXY-1上升幅度较小,其余各水样上升幅度较大,与对照组差异极显著.各水样硝态氮含量均上升,其中HA-LP-4含量最低,与对照组差异显著.亚硝态氮在经浮萍处理10 d时变化最显著,其中HA-LP-4含量最低,与对照组差异显著.在处理污水能力和积累淀粉能力方面,HZ-HSD-5和HZ-HZY-2均较强.     

人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建

[目的]以小鼠基因组为模板克隆乳清酸蛋白(whey acidic protein gene,WAP)5′和3′调控区,并构建人乳铁蛋白(Human Lactoferrin,hLTF)乳腺特异性表达载体。[方法]以高保真PCR技术扩增WAP5′和WAP3′长度分别为3.5 kb和4.6 kb的DNA片段,并克隆测序,应用体外连接技术连接pcDNA3.0、WAP5′、WAP3′和hLTF,转化连接产物,以限制性内切酶酶切、PCR验证和琼脂糖电泳鉴定阳性克隆。[结果]内切酶酶切及PCR鉴定结果显示,WAP5′和WAP3′基因克隆成功,其hLTF乳腺特异性表达载体构建正确。[结论]成功克隆WAP5′和WAP3′调控区;成功构建了hLTF乳腺特异性表达载体pW2-hLTF。