Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及免疫效果评价

为研究Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及其免疫原性,本研究基于酵母细胞内表达载体pPICZA,利用独立编码三个衣壳蛋白表达盒构建质粒pPICZA-vp031,重组质粒经BglⅡ线性化后进行电转化,获得重组有三个独立表达盒重组酵母菌。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明衣壳蛋白均得到正确表达且具有良好抗原性。重组酵母菌经口服免疫小鼠后,机体能够产生血清特异性IgG抗体和黏膜sIgA抗体,淋巴细胞增殖结果显示免疫小鼠淋巴细胞特异性增殖指数显著高于灭活疫苗组,细胞因子检测结果显示经特异性抗原刺激免疫小鼠淋巴细胞分泌IL-4和IL-10与灭活疫苗组无显著差异,显著高于PBS对照组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。本研究为口蹄疫基因工程疫苗研制奠定基础。     

虹鳟IPNV分离株VP2蛋白的表达及免疫原性检测

为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白VP2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能性,对其特定区段进行了原核表达,并利用表达蛋白制备鼠抗血清及免疫学鉴定。结果表明:本实验室得到的分离株与中国已报道的毒株具有不同的来源;SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP2蛋白为单一条带,相对分子质量约为45 000;ELISA分析显示,利用表达蛋白制备的鼠抗血清与IPNV分离株细胞培养物的效价为1∶20 000,与VP2蛋白的效价为1∶40 000;间接免疫荧光分析显示,细胞感染IPNV病毒24、48 h后,该鼠抗血清均能与IPNV毒株发生特异性反应,并呈现出特异性绿色荧光。研究表明,本研究中表达的VP2蛋白与IPNV病毒的VP2蛋白具有相近的免疫原性,这一结果为IPNV检测方法的建立及疫苗的构建提供了重要的试验依据。     

虹鳟肠炎红嘴病病理模型的构建

为探讨鲁氏耶尔森菌侵染虹鳟的致病机制,本实验建立了鲁氏耶尔森菌感染虹鳟引起的肠炎红嘴病的病理模型,制定相应的临床症状及组织病理学评分系统,并对该模型进行研究。将43尾平均体质量约为12 g的健康虹鳟随机分成5组:3个实验组(n=30)、对照组(n=10)和哨兵组(n=3)。3个实验组分别采用2.0×106、2.0×107和2.0×108 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌感染浓度,通过腹腔注射方式进行人工感染试验。对感染鲁氏耶尔森菌的虹鳟肠、肝脏、脾脏和肾脏组织进行镜检及临床症状、剖检病变判断,结合细菌学检测,按制定的评分系统评价各组肠炎红嘴病造模效果,确定最佳造模方案。结果显示,各攻毒组虹鳟感染后72 h均出现不同程度死亡,临床症状表现为红嘴、肛门红肿、鳍(胸鳍、腹鳍、臀鳍)等出现不同程度充血,下颌部、腹部出现出血点等。组织病理学可见肝脏、脾脏、肾脏及肠组织均有炎性细胞浸润现象出现,肝细胞、肠上皮细胞和肾小管上皮细胞等实质细胞变性、坏死,脾脏部位淋巴细胞减少、红细胞死亡堆积。综合各组得分发现,2.0×107 CFU/m L组的鲁氏耶尔森菌感染虹鳟造模效果最佳,患病虹鳟的临床症状显著且组内差异较小,病程迁延较长,便于研究。研究表明,对体质量约12 g的虹鳟幼鱼腹腔注射0.1 m L浓度为2.0×107 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌可成功构建肠炎红嘴病病理模型。     

牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B(g B)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,大小约为40 ku。Western blot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的g B蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法,该方法敏感性好,特异性强,与其他病原血清无交叉反应,其组内组间变异系数均低于11%。与IDEXX公司的g B-ELISA试剂盒进行对比,阳性符合率为84.28%,阴性符合率为85.71%。采用本研究建立的方法对黑龙江省10个农场的血清样品进行了IBR的流行性调查,阳性率最高为65.52%,最低为5.56%,平均阳性率为18.01%。本研究建立的ELISA方法为进出口检疫和该病防制工作提供一种可选方法。     

国家种质资源数据库应用的宏观分析

本文通过对国家农作物种质资源数据库的研究分析,展示种质资源在育种和生物技术研究中的应用前景。1.早熟近年来由于气候变化异常,作物的布局和耕作制度也随之发生变化,生产上对品种的熟期不断提出新的要求,特别是早熟的资源信息,以便选择合     

云南作物资源特征特性及生态地理分布研究Ⅱ.云南地方稻种资源的营养品质

应用GIS平台统计整理云南省128个县所属的气候类型,并结合云南省的5个稻作分区,分析研究了云南地方稻种资源营养品质的生态地理分布。从总的趋势看,初步摸清了营养品质主要包括蛋白质和赖氨酸的生态地理分布习性,在云南省亚热带以及滇中一季籼粳交错区和滇南单双季籼稻区,高蛋白质或低蛋白质以及高赖氨酸的品种资源出现频率都较高;而在北热带以及滇东北和滇西北的稻作地区,蛋白质和赖氨酸的含量相对高于云南的其它地区,但针对营养品质不同的成分和特性还有着各自的分布侧重区域等,其结果可为优异资源挖掘和利用、优质稻育种研究、生产等领域提供参考依据。     

普通小麦核心种质抽样方法的比较

利用穗部、病害、农艺和品质的14个性状，比较了5种不同抽样方法所形成样品的性状多样性指数、性状类别分布和优良类别的频率与基础种质总体的差异。结果表明，来源地－性状类别法有利于小麦核心种质遗传多样性的增加，来源地百分比例法较好地代表了小麦性状类别的分布，来源地平方根法和来源地对数比例法则较明显地增加了优良类别的频率。研究还表明运用来源地和性状进行分层的抽样效果好于完全随机法。     

国家作物科学数据结构组织模式研究

研究了国家农作物资源数据结构组织模式的架构,设计了国家作物科学数据管理远程控制平台,构建了国家农作物品种资源数据管理工具,包括农作物资源信息规范视图处理器、数据结构生成器、数据视图生成器,从而提升远程数据管理和存储管理能力,实现国家作物科学数据的安全性和完整性,达到可持续发展的运行目标。     

云南稻作资源特征特性及生态地理分布研究Ⅶ. 稻白叶枯病抗性资源的多样性分布研究

采用GIS、BioDiversity等技术分析了4062份云南地方稻种资源白叶枯病抗性多样性在云南不同气候类型和各类稻区的表现.结果表明,稻白叶枯病抗性与气候环境因素呈显著相关.稻白叶枯病抗性多样性从南亚热带→北亚热带→中亚热带→北热带→南温带→中温带逐渐减小,反之增大;随海拔的升高、温度的降低而减少,反之增大.亚热带是稻白叶枯病抗性多样性富集气候带.单双季籼稻区和水陆稻区的稻白叶枯病多样性高于其他稻作区,稻作复杂地区稻白叶枯病抗性多样性较高.发掘了198份值得研究利用的优异的稻白叶枯病抗性资源.