金属络合剂酸性络蓝K在TNOS-LAMP可视化检测体系中的应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种快速、灵敏度高和特异性强的等温核酸扩增技术,已被广泛用于各领域.与此同时,高灵敏度也使得扩增时极易出现交叉污染,而利用闭管检测技术能有效降低其污染机率.本研究引入了一种新型的金属指示剂-酸性络蓝K (acid chrome blueK,ACBK),建立了闭管LAMP扩增和检测结果可视化检测技术.首先,本研究分别在LAMP 扩增的起始体系中,先后分别测试ACBK与缓冲液、dNTPs、引物和Mg2+等组分反应,确定了含有ACBK的LAMP体系中的颜色变化由Mg2+决定,化学方法也进一步验证了这一结论.随后,对LAMP检测体系中的ACBK指示剂的浓度及Mg2+的浓度进行了选择和优化,最终选定25 μL扩增体系中ACBK的检测浓度为:2 μL 0.04％ ACBK,Mg2+浓度为:6 mmol/L.以胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,TNOS)为靶基因,建立了TNOS-ACBK-LAMP检测体系.建立的体系的检测灵敏度针对转基因水稻的检测限为100拷贝,在分别含有50 ng的水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、油菜(Brassica napus)和玉米(Zea mays)基因组中能检测出0.1％的转基因含量.同时,利用不同转化事件及不同作物的转基因材料验证了其检测特异性,结果表明,构建的TNOS-ACBK-LAMP的检测系统具有很强的检测特异性.最终,将该检测体系成功用于对实际玉米样品转基因成分的检测,检测结果既可以裸眼直接判断也可以借助紫外可见光谱分析.该方法的建立为可以加快转基因成分检测的速度,同时也为等温扩增方法的判断提供了新的思路.     

豹纹鳃棘鲈类结节症病原的分离鉴定

为查明养殖豹纹鳃棘鲈类结节症的病因,自患病豹纹鳃棘鲈内脏中分离到1株优势菌株061101,人工感染试验证实,该菌具有强毒力,能够引起被感染鱼内脏出现白色结节并死亡,为引起此次豹纹鳃棘鲈类结节症的病原菌。采用形态学、生化特性测定对菌株061101进行鉴定,同时采用细菌16S rRNA通用引物进行PCR扩增得到该菌的16S rRNA基因序列,测序后比对,构建系统发育树。试验结果表明,菌株061101与发光杆菌属中的美人鱼发光杆菌杀鱼亚种基本特征相符;基于16S rRNA基因序列构建的系统发育树将菌株061101与美人鱼发光杆菌杀鱼亚种聚为一支,置信度达100%。据此确定,此次豹纹鳃棘鲈类结节症的病原为美人鱼发光杆菌杀鱼亚种。药敏结果显示,该菌株仅对链霉素(300μg/片)、庆大霉素(120μg/片)敏感,对多黏菌素B、阿洛西林等中度敏感,对氟苯尼考、恩诺沙星、强力霉素等均耐药。     

滨州市水肥一体化技术应用现状及发展对策

水肥一体化技术被公认为是世界上提高水肥资源利用率的最佳技术，以其为核心的节水农业现已得到有关部门的高度重视，越来越多的农业生产开始应用水肥一体化技术，但这一技术在滨州市尚未全面推广，部分县区更是鲜有应用。为摸清山东滨州市水肥一体化技术应用情况及存在问题，特在全市开展了水肥一体化技术调查研究，以期为今后水肥一体化项目规划和发展推广提供依据。     

豹纹鳃棘鲈致病性哈维氏弧菌的分离鉴定与系统发育分析

为探明养殖豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病因,从患病豹纹鳃棘鲈血液及内脏、体表溃疡处分离到2株优势菌,其中编号为1031的菌株经人工感染证实能够引起被感染鱼的死亡,为引起该豹纹鳃棘鲈溃疡病的病原菌。采用形态学、生理生化特性鉴定,结果表明菌株1031与弧菌属的基本特征相符,分别基于16SrDNA序列及热激蛋白60基因(hsp60)序列构建的系统发育树将菌株1031与哈维氏弧菌聚为一支,置信度均为97%,以1031为模板特异性扩增哈维氏弧菌toxR基因,也得到了预期382bp的核酸片段。综合以上结果,最终确定此次豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病原为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。药敏结果显示,该菌株仅对氟苯尼考、庆大霉素(120μg)、菌必治敏感,对诺氟沙星、恩诺沙星、阿奇霉素、强力霉素等均不敏感。     

番茄灰霉病的发生与防治

近几年来。随着蔬菜栽培面积的不断扩大，尤其是保护地蔬菜栽培面积不断扩大的同时，蔬菜灰霉病的发生也更为普遍，蔓延速度更为加快，危害更为猖獗。 番茄灰霉病就是蔬菜灰霉病中的一种重要病害，一般可造成番茄减产20％。30％，严重时可高达50％以上，而且在蔬菜产区有发生越来越重的趋势，严重影响番茄的产量和品质。     

苹果锈果病韵发生与防治

苹果锈果病俗称花脸病，山东滨州市各苹果产区均有发生，一般多为零星发生，有的果园病株率高达10％以上，并有扩展蔓延的趋势。[第一段]     

红尾皇冠鱼无乳链球菌病LAMP检测方法的建立与应用

以cfb基因保守序列的6个区域设计4条特异性引物,利用链置换DNA聚合酶( BstDNA polymer：ase)在恒温(65℃)下保温40 min,建立了无乳链球菌 Streptococcus agalactiae 的 LAMP 技术。建立的LAMP方法能够特异性地检测无乳链球菌,检测灵敏度为3·7×101~3·7×102 cfu/mL,反应前加入显色剂钙黄绿素避免二次污染。现场应用中采用FTA卡采集红尾皇冠鱼Aequidens rivulatus病鱼肝脏组织病原菌,操作简便、快捷。研究表明,针对无乳链球菌cfb基因建立的LAMP检测方法具有较高的特异性及稳定性,尤其是具有快速、简便、成本低等优点,可用于无乳链球菌的野外现场快速检测。     

天津地区南美白对虾产业发展调查与分析

正多年来,南美白对虾养殖作为天津地区渔业发展的主导产业,从养殖规模占比、渔业经济效益产出、渔民增收途径等方面都占据着十分重要的地位。2014年,天津市南美白对虾主套养面积达2万多hm2,超过全市水产养殖面积的一半,是除大宗淡水鱼以外的养殖优势品种。但由于近些年受到种质退化、养殖病害频发、产出率降低的影响,我市乃至全国对虾产业都遇到了极大的问题和挑战。1南美白对虾养殖总体情况目前,天津市南美白对虾养殖区域涉及除蓟     

绿色农业种植技术推广存在的问题与策略

正近年来,我国经济增长速度逐渐加快,农业的良好发展得到有效促进。由于我国居民的生活水平不断提升,人们对食品安全问题给予了越来越多的重视。绿色食品的出现消除了人们对食品安全的担忧,也满足了人们日益增长的安全饮食需求。绿色农业种植是绿色食品产生的重要环节,人们对绿色食品的迫切需求使绿色农业种植技术的推广势在必行。但在实际推广绿色农业种植技术时,常常由于多种原因致使推广过程存在问题,部分不利于绿色农业种植技术     

淡水鱼中铅含量的测定

[目的]测定锦州市淡水鱼中铅的含量。[方法]使用石墨炉原子吸收光谱法测定淡水鱼中铅的含量。[结果]结果表明,白鱼、鲫鱼、鲇鱼、花鲢和鲤鱼的含量未超标;黑鱼、白鲢中铅的含量超标。[结论]该研究为食品质量控制提供依据。