甘蓝一代杂种高产制种技术

甘蓝是结球甘蓝的简称，属十字花科芸薹属二年生蔬菜，是春、夏、秋季的主要蔬菜之一。随着种植业结构调整，近几年全国各地种植面积逐年扩大。因此，我们进行了甘蓝的制种试验，经过几年的试验探索，基本掌握了甘蓝的高产制种技术，由原来的亩产45-50kg，提高到90-100kg。现将制种技术要点介绍如下。     

猪链球菌2型溶血素基因的检测

根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出相应的条带。PCR扩增产物的测序结果与GenBank的猪链球菌sly基因(Z36907)核苷酸序列完全一致。该方法可快速、敏感、特异地检测SS2的溶血素基因。     

产毒微囊藻PCR检测方法的建立

[目的]建立产毒微囊藻的PCR检测方法。[方法]根据GenBank上发表的mcyA基因序列保守区域设计一对引物,建立和优化检测产毒微囊藻的PCR方法,并以此方法检测产毒和非产毒微囊藻参考株系。[结果]经PCR检测,产毒藻株出现特异性扩增条带,而不产毒株未出现特异性条带;以10倍系列稀释纯培养的蓝藻细胞作为PCR反应的模板,检测限均为2.46×103细胞/ml;运用建立的方法从天然水体中检测到了产毒微囊藻,对PCR产物序列进行比对,发现PCR扩增片段与铜绿微囊藻(PCC7806)核苷酸序列的同源性为98%。[结论]该研究为水华产毒微囊藻的监测提供了一种新方法。     

牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立

为了建立一种快速诊断牛白血病(BLV)的检测方法,本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因,经测序后克隆于表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-gp51。将其转化受体菌BL21,用IPTG诱导后表达出约42ku的目的蛋白,经western blot检测表明目的蛋白具良好的反应原性。以胶体金标记的羊抗牛IgG(Fc)抗体作为标记抗体,将纯化的His-gp51重组蛋白和羊抗牛IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,各部件按序装配形成快速诊断试纸条。对22份样本分别用试纸条和ELISA试验进行检测,2种方法的阳性符合率为88.9%(8/9),表明本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快捷,具有较好的特异性和一定的敏感性,适宜基层初筛诊断和现场应用。     

OIE《陆生动物卫生法典》(2005年版)关于禽流感的规定

国际动物卫生组织（OIE）2005年版的《陆生动物卫生法典》与2004年版相比,有着重大变化：首先该章的题目就由2004版中的高致病性禽流感改为2005版中的禽流感,正式引入须申报的禽流感、须申报的高致病性禽流感、须申报的低致病性禽流感的概念,表明OIE对禽流感的关注已经不再局限于高致病性禽流感;其次删除了2004版中的2.7.12.1条至2.7.12.4的4条正式条款,而将2004版中很多不需强制执行的研究中条款变成了正式条款,同时还增加了全新的正式条款.     

猴痘研究进展

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性人畜共患传染病,通过直接密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传染。其主要发生于中非和西非的热带雨林,在美国也曾暴发过。虽然在我国至今尚无猴痘的报道,但未雨绸缪,做好技术储备,很有必要。     

2株鸽源新城疫病毒的毒力鉴定和基因型分析

2008年从临床鸽病例中分离到2株新城疫病毒毒株,经测定,鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为48h和46h,8周龄SPF鸡静脉接种指数(IVPI)分别为2.88和2.91,一日龄雏鸡脑内接种指数(IPCI)分别为1.88和1.89,按照OIE推荐的标准均为强毒株。RT-PCR扩增出融合蛋白(F)基因片段,测序,推导的氨基酸序列中蛋白酶裂解位点附近的氨基酸序列均符合强毒特征序列。根据F蛋白的部分基因序列绘制的系统进化发生树和F基因片段中3种限制性内切酶(RE)位点分布判定这2个毒株均为基因Ⅶc型。     

出口活虾的检验检疫与运输保存技术

本文阐述了出口活虾的临床检验检疫和对养殖场及其暂养场地管理工作的重点，同时介绍活虾运输保存、活虾捕捞、暂养、包装前的预处理、包装、运输后的恢复等关键性技术。     

猪圆环病毒血清I型和II型的PCR鉴别

根据基因库中猪圆环病毒 (PCV)的基因序列 ,设计并合成了 3条引物 ,建立复合PCR,对 2株 PK-1 5细胞及一些疑似 PCV感染的病料进行了 PCV检测。结果 2株 PK-1 5细胞和所有病料都可扩增出 PCV-1的基因片段 ,其中 1株 PK-1 5细胞和一些病料还扩增得到了PCV-2的 DNA片段。证明应用设计的引物进行复合 PCR快速检测 PCV可行 ,为 PCV的检测分型及 PCV相关疾病的诊断奠定了基础     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离和初步鉴定

传染性喉气管炎（ILT）是鸡的一种急性疾病，以呼吸困难、气喘、咳出血样渗出物为特征。本病在美国、澳大利亚、欧洲等养鸡密集地区流行。“’国内山东、天津、北京、辽宁、黑龙江等地区也有此病发生。‘’、’嘴近，江苏一些地区发现疑似ILT流行，我ff］从死亡率达9．08％的ILT发病成年鸡群中分离到一株ILTV，现将结果报告如下。1．村温与方法1．l鸡胚：山东家禽研究所SPF鸡场提供SPF种蛋，在本实验室孵化成10日龄鸭胚。1．2诊断试剂：传染性喉气管炎、传染性支气管炎、禽流感、病毒性关节炎、腺病毒及鸡痘的阳性血清和抗原均由哈…