cDNA文库构建方法的研究进展

cDNA文库的构建是一种重要的基因克隆的手段,主要用于新基因的发现及基因功能的研究。作者主要介绍cDNA文库的构建方法及cDNA文库的一些实际应用,为研究cDNA文库的构建提供一些有价值参考意见。     

土拉菌病国内外流行情况与诊断的研究进展

了更好地检测和预防土拉菌病,介绍了土拉菌病的国内外流行情况。综述了土拉菌的细菌学、免疫学、分子生物学检测方法,并对上述检测方法进行总结和分析。旨在为土拉菌的深入研究检测提供思路和科学依据。     

雪被厚度对土壤温湿度的影响

以牡丹江森林生态系统国家定位观测研究站为平台,针对雪被覆盖期（积雪形成期、积雪稳定期、积雪融化期）雪被厚度、土壤温度、土壤含水量三者间的相关关系开展研究。结果表明,土壤含水量在积雪期呈现先降低再升高趋势,同一时期的不同雪被厚度土壤含水量无显著差异;积雪形成期及稳定期,雪被厚度与土壤温度呈显著正相关,随着雪被厚度增加,土壤温度升高。该研究对加深非生长季土壤生态认知、解释温度升高、林窗或林冠下生境变化等规律具有重要意义。     

单核增生性李氏杆菌病研究进展

李氏杆病是一种重要的食源性人畜共患传染病,主要由单核增生性李氏杆菌引起单核细胞增多,该病呈世界性分布。文章通过对李氏杆菌的生化特性、致病机理、毒力有关基因功能及现有检测方法等方面的研究,来更深的了解李氏杆菌病,做好免疫预防工作。     

框镜鲤致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

为鉴定一株致框镜鲤发病病原菌的生物学特性,本研究由濒死框镜鲤体内分离到一株细菌CY0806,对形态学、培养特性、理化特性等生物学特性以及药物敏感性和16S rRNA序列进行检测和分析。结果显示:细菌株CY0806为革兰氏阴性菌,其理化特性与维氏气单胞菌基本相同。系统进化树分析表明,细菌株CY0806序列与维氏气单胞菌模式株ATCC35624无差异,同源性为100%,因此,鉴定该菌株CY0806为维氏气单胞菌。药物敏感性试验结果显示,庆大霉素、新霉素等11种药物对细菌株CY0806有较好的抑菌效果。     

甜樱桃授粉与花果管理技术

授粉和花果管理是甜樱桃优质丰产栽培的重要环节。从花粉采集与保存、授粉品种选择、花期放蜂、人工授粉等方面总结了授粉技术,从疏花芽、疏花和疏果总结了花果管理技术。     

长期施用有机肥对草甸碱土碳库管理指数的影响

基于1995年在黑龙江省大庆市肇州县进行的长期定位试验,研究了长期施用有机肥对草甸碱土活性有机质和碳库管理指数的影响。采用3种浓度的KMnO₄(33,167,333mmol/L)氧化法测定了土壤高活性有机质、中活性有机质和活性有机质3部分含量。结果表明,长期施用有机肥能增加草甸碱土活性有机质各组分含量和碳库管理指数。活性有机质各组分含量和碳库管理指数在施用有机肥1~5a的处理间均呈上升的变化趋势,并与玉米产量趋势相一致,在施用有机肥第5a时,均达到最高值,施用有机肥5~16a的处理间,均呈现逐渐下降趋势,最终趋于稳定。中活性有机质和活性有机质与总有机质均达到极显著性正相关,而高活性有机质与总有机质无显著性相关,活性有机质各组分与碳库管理指数也均达到极显著性正相关。研究表明,总有机质不能很好地评价草甸碱土的土壤肥力,而中活性有机质、活性有机质和碳库管理指数能更为客观地反映草甸碱土的土壤肥力,可作为草甸碱土改良的良好评价指标。     

副溶血弧菌现场快速检测方法的建立及初步应用

为了实现副溶血弧菌的现场快速筛查,降低副溶血弧菌引起的食品安全问题,保障食品安全,试验利用副溶血弧菌tdh基因建立了可以快速检测水产品中副溶血弧菌的恒温环介导扩增(LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定水产品中是否存在副溶血弧菌,同时利用建立的方法对螃蟹及贝类共40份水产品进行检测。结果表明:试验建立的方法具有良好的特异性,灵敏度可达7.92×10~(-3) ng/μL,实时浊度仪观察只有副溶血弧菌扩增出曲线,采用钙黄绿素法观察只有副溶血弧菌的扩增体系见到黄绿色。检测方法初步应用结果显示,从1例板蟹和1例蛤蜊中检测到副溶血弧菌核酸,证实2例水产品中存在副溶血弧菌。说明试验建立的方法可用于水产品中副溶血弧菌的现场检测。     

鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建

为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。     

沙门氏菌现场快速检测方法的建立

为了适应基层检验检疫部门对沙门氏菌的现场快速筛查,保障食品安全,试验利用沙门氏菌inv A基因建立了可以快速检测食品中沙门氏菌污染的恒温环介导扩增(LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定食品是否受到沙门氏菌的污染。结果表明:建立的方法具有良好的特异性和灵敏性,灵敏度可达8.37×10~(-3)ng/μL。说明建立的方法可用于沙门氏菌的现场检测。