小麦白粉病菌闭囊壳萌发及其对三唑酮敏感基线的建立

在没有甾醇脱甲基抑制剂 (DMI)类药剂用药历史的湖北利川山区麦田采集小麦白粉病菌闭囊壳 ,带回室内萌发 ,从每样本单孢子堆中分离得到61个野生菌株。采用叶段法测得每个菌株的EC₅₀,建立起小麦白粉病菌对三唑酮的相对敏感基线EC₅₀=(0.1090±0.0048)μg/ml。     

我国几种植物病害抗药性监测情况

病害和虫害一样可造成农作物毁灭性危害。目前,采用化学农药防治植物病害已成为我国保证农作物高产稳产的重要措施。然而,一些重要植物病原物极易产生抗药性,常常在部分地区导致杀菌剂防治效果下降或完全失效。因此,对病原菌的抗药群体动态进行监测和检测,是预测和治...     

抗苯并咪唑的小麦赤霉病菌β-tubulin基因序列分析与特性研究

 本研究用真菌U-微管蛋白基因的通用寡聚核苷酸引物B1和B3,扩增并克隆了一段821 bp的小麦赤霉病菌Fusarium graminearum的U-微管蛋白基因片段,并进行了序列测定。根据该序列设计了F.graminearum U-微管蛋白基因的特异性测序引物,测定了赤霉病菌对多菌灵不同抗感菌株的U-微管蛋白基因核苷酸序列,结果表明不同F.graminearum菌株的U-微管蛋白的165,198,200和257位氨基酸未发生突变,在克隆的片段内也未发现核苷酸突变引起的氨基酸改变。表明该菌对多菌灵产生抗性的分子机制与目前已知的其它真菌有所不同,有待进一步研究。     

核盘菌对菌核净的抗药性机制初探

经药剂筛选获得对菌核净不同表型的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum ) 抗药性突变体。与敏感亲本菌株相比, 抗药突变体MN 61 (MR ) 和MN 91 (HR) 在含1% 和8% 葡萄糖的PDA 上生长受到抑制,MN 113 (LR) 只对1% 葡萄糖敏感。通过测定抗药突变体MN 61 和野生敏感菌株PN 061 的电导率, 发现抗药突变体能在更短的时间里渗出更多的电解质。抗药突变体苯丙氨酸解氨酶活性比敏感亲本菌株高出1 倍以上, 当用不同浓度菌核净处理或饥饿处理时, 抗药突变体和敏感亲本菌株PAL 活性均上升, 但抗药突变体的酶活始终高于敏感亲本菌株。     

水稻白叶枯病菌对拌种灵抗药性分子机制研究

  通过紫外诱变获得了抗拌种灵水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae）的突变体，这些突变体可以在含100 μg·ml-1拌种灵平板上生长，而敏感菌株在10 μg·ml-1浓度下则不能生长。敏感菌株琥珀酸脱氢酶活性受拌种灵强烈抑制，而抗药突变体的酶活性较低，且不受药剂抑制。应用6对引物，从水稻白叶枯病菌野生敏感菌株和室内诱导抗药性菌株中扩增到琥珀酸脱氢酶基因全序列。该基因全长3 616 bp，编码1 115个氨基酸，含有2个内含子。与柑橘溃疡病菌（Xanthomonas axonopodis pv. citri）琥珀酸脱氢酶核苷酸同源性93%，氨基酸同源性97%；与其它6种病原细菌琥珀酸脱氢酶基因编码的氨基酸序列同源性为43%～95%。敏感菌株和抗药菌株的琥珀酸脱氢酶序列分析表明，琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白亚基中229位氨基酸由组氨酸（CAC）突变为酪氨酸（TAC）是导致X. oryzae对拌种灵产生抗药性的主要原因。     

用等位基因特异性寡核苷酸（ASO）-PCR快速检测抗多菌灵的油菜菌核病菌

 通过3对兼并性引物扩增获得与S.sclerotiorum抗药性相关的β-微管蛋白基因，全长1 685 bp，包含4个内元，相应的编码447个氨基酸。该基因与其它6种线状真菌的β-微管蛋白基因相比，氨基酸序列同源性达95.78%～97.66%，但内元数目和大小不同。比较S.sclerotiorum敏感型和抗药性菌株的β-微管蛋白基因，发现该基因第198位氨基酸由谷氨酸突变为丙氨酸，从而导致田间抗药性的产生。为了快速、准确监测田间抗药性频率，根据S.sclerotiorumβ-微管蛋白基因的突变位点设计了2对等位基因特异性寡核苷酸（ASO），直接以菌核的基因组DNA为模板扩增，所需时间约为6 h，抗药性检出率为100%，与传统菌丝直径法的测定结果相比检测准确率为96%，而传统的检测方法至少需要1～2周。     

玉蜀黍赤霉的营养亲和性及其对多菌灵的抗性在菌丝融合过程中的遗传

利用硝酸盐营养缺陷突变体(nit)标记，对采自浙江、江苏、上海等地的33个玉蜀黍赤霉菌株的营养亲和性进行研究。结果发现，这些菌株分别属于30个不同的营养亲和群(VCG8)，表明中国玉蜀黍赤霉自然群体的遗传变异较大。用药剂驯化法获得了6株ZF43菌株的多菌灵(MBC)室内抗药突变体，并研究了其中2株抗药突变体的营养亲和性能。结果表明，玉蜀黍赤霉对多菌灵产生抗药性后不会改变其营养亲和性能。但发现在营养亲和的两菌株之间发生菌丝融合以后，不能或很少能进行细胞核遗传物质的交换和重组，因此，菌丝融合在该菌对多菌灵的抗药群体发展中的作用较小。     

烯丙异噻唑对稻瘟病菌的抗菌活性

烯丙异噻唑对稻瘟病菌的抗菌活性马忠华周明国叶钟音方中达（南京农业大学植保系病虫监测与治理农业部重点开放实验室，南京２１００９５）ＡＰＲＥＩＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＹＯＮＡＮＴＩＦＵＮＧＡＬＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＰＲＯＢＥＮＡＺＯＬＥＡＧＡＩＮＳＴＰＹＲＩ...     

水稻白叶枯病菌室内链霉素抗性菌株的诱导及其抗性分子机制和风险评价

通过紫外光照射诱导获得了6株水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae抗链霉素突变体。测得链霉素对水稻白叶枯病菌敏感菌株ZJ173及其抗性突变体的最低抑制浓度(MIC)分别为0.10和600 μg/mL;对敏感菌株的有效抑制中浓度(EC50)为0.03 μg/mL,对抗性菌株的平均EC50值为11.64 μg/mL,平均抗性倍数为388。通过PCR扩增了敏感菌株ZJ173及5株抗性菌株的rpsL基因(编码S12核糖体蛋白)和rrs基因(编码16S rRNA),并检测了strA基因是否存在。序列分析表明,5株被测抗性菌株的rpsL基因均发生了突变,其中4株在氨基酸43位、1株在88位,均由赖氨酸突变为精氨酸,而rrs基因未发生突变,strA基因未被检测到。表明实验室诱导获得的水稻白叶枯病菌抗性菌株对链霉素的抗药性是由rpsL基因突变引起的。抗性风险研究表明,抗性突变体的抗药性在无药剂压力下可稳定保持,其致病性、生长速率与敏感菌株相比无明显差异,竞争性低于或略低于敏感菌株,抗性自发突变率较高,且抗性突变为单一位点突变,病害循环为多循环,因此由rpsL基因突变引起的水稻白叶枯病菌对链霉素的抗性风险较高。     

枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质的性质

用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261μg/m l和18.899μg/m l,上述两者对水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌有较强的抑菌活性,对马铃薯晚疫病菌则没有抑菌活性;当温度高于40℃时抑菌活性均降低,但在120℃时仍有部分抑菌活性;对pH值适应范围较宽,但在pH值为13.6时抑菌活性均丧失;经蛋白酶K、蛋白酶E、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌活性均下降。SDS-PAGE电泳结果表明枯草芽孢杆菌B-916能分泌多种蛋白质,其中硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质中相对分子质量为48 000的蛋白质可能为抗菌蛋白质。硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质经Sephadex G-100层析后检测到4个蛋白质吸收峰。