不同剂量PMSG对未性成熟小鼠卵巢发育的影响

探讨了不同剂量PMSG对20～21日龄未性成熟小鼠卵巢发育的影响,结果表明,PMSG处理后小鼠卵巢出现增大现象,其中20 IU、15 IU、10 IU、6 IU组处理的小鼠卵巢增重最明显,且组间差异不显著;卵巢内生长卵泡数量差异不显著,随激素作用量的上升,有腔卵泡数和有腔卵泡所占比例而增大.     

体外生产猪原核期胚胎的初探

初步研究了在体外生产猪的原核期胚胎.结果表明:将在体外成熟培养44h的卵母细胞移植入发情当日的母猪体内,同时进行人工授精,受精后16 h冲出胚胎,获得同期原核期胚胎的效率最高,可以降低多精入卵的发生率.     

原代猪成纤维细胞电转染条件的探索

用绿色荧光蛋白基因的DNA(p EGFP-N1)作为目的基因,对原代猪成纤维细胞电转染条件进行探索。结果表明,在电压1 200 V/cm、脉冲时间3 ms、p EGFP-N1添加量4 mg/m L时电转染效率最好。     

黄牛卵母细胞在三种不同培养基中的成熟效果比较

用3种不同的培养基培养黄牛卵母细胞,结果表明,TCM-199基础型和商用Holding型培养基可使其成熟率达到80%,DMEM基础型尽管可使颗粒细胞生长良好,但卵母细胞的成熟率极低。     

猪分级卵母细胞体外成熟时间规律的研究

试验根据猪卵丘－卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵母细胞孤雌激活。结果发现,A和B级COCs培养48 h时成熟率最高（83.2%和78.0%）,明显高于同级水平培养24、32和38 h的成熟率;不同级别COCs体外培养相同时间,A与B级成熟率差异不显著（P＞0.05）,但二者与C级的成熟率差异显著（P＜0.05）;体外培养48 h COCs卵裂率最高（81.7%）,与培养38 h前的卵裂率差异显著（P＜0.05）。结果表明,A、B级卵母细胞更适于体外培养,能获得高的成熟率和卵裂率,COCs周围颗粒细胞对卵母细胞的成熟有显著影响;COCs培养38 h之前,部分虽能看到极体,但激活后卵裂率极低,说明卵母细胞并未真正成熟,通常通过排出极体判断卵母细胞成熟是不够准确的,COCs体外培养44～48 h是成熟的最佳时期,能为体细胞核移植提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。     

猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响

研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕初期的猪输卵管上皮细胞可促进与之体外共培养的小鼠早期胚胎的发育;随着早期小鼠转基因胚胎的发育,PCR检测呈阳性的转基因胚胎的比率逐渐降低。     

猪乙脑快速诊断方法的建立与应用

根据乙脑病毒基因组3′末端保守区设计一对特异性引物,建立了乙脑病毒不同株的RT-PCR诊断技术.该技术可以从乙脑病毒WHe株、SA14-14-2株、P3株、SA14-14-2VS株接种的鼠脑组织中扩增出486bp的核酸片段,检出的灵敏度约为2pg.对20份临床样品的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但RT-PCR诊断技术可在3h内直接对组织进行诊断,具有敏感、快速、稳定的优点.     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:改良TCMl99(mTCMl99)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P<0.05);基础培养基中添加PMSG、hCG和pFF,卵母细胞体外成熟率(80.63%)显著高于仅...     

转sFat-1基因猪生理生化指标与繁殖性能测定

[目的]评价转sFat-1基因猪的健康状况,为猪育种选择优良个体提供依据.[方法]测定21头阴性试验对照纭和20头转sFat-1基因阳性猪15项生理生化指标和繁殖性能.[结果]部分转sFat-1基因猪肝功能受到轻度损伤,繁殖能力也有轻度下降.[结论]猪生理生化指标和繁殖性能测定能够成为转基因猪环境安全评价的有效方法之一. Abstract： [Objective] The aim was to evaluate the health of transgenic sFat-1 gene pigs in order to provide a reference for the breeding selection of pig excellent individuals.[Method]15 physiological biochemical parameters and reproductive performances of 21 negative control pigs and 20 transgenic sFat-1 gene pigs were determined. [Result] The liver functions of some transgenic sFat-1 gene pigs were hurted lightly,and the reproductive performance also decreased lightly. [Conclusion] The determination of physiological biochemical parameters and reproductive performance in transgenic pigs could be taken as one of effective methods in environmental safety evaluation of transgenic pigs.     

LHRH-A3及EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

试验研究了在成熟培养液中添加促黄体素释放激素A3(Luteinizing hormone releasing hormoneA3,LHRH-A3)与表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)联合作用对猪卵母细胞体外成熟及孤雌发育的影响,以确立猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明,在猪卵母细胞体外成熟培养中,LHRH-A3可以代替孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotrophin,hCG);在孤雌发育中,LHRH-A3作用的效果明显高于添加PMSG和hCG组合;在联合应用处理中,剂量为1.5μg/mL LHRH-A3和40ng/mL EGF的组合对猪卵母细胞体外培养和孤雌发育的效果比较好。